一种血型抗原三糖A类似物蛋白偶联物在血型抗体检测中的应用的制作方法

本发明属于血型抗体检测领域，涉及一种血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物在血型抗体检测中的应用。

背景技术：

1、血型鉴定是临床输血前的首要工作，因为不同血型的血液相互输血时会因为抗原和抗体的凝聚作用而发生溶血现象，进而可能危及人的生命安全，因此正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。目前血型鉴定的方法包括正定型法和反定型法。正定型法检测红细胞抗原，反定型法检测血清中的抗体，其中以人a、b、o血型抗原/抗体检测最为重要。根据人体血液中红细胞膜表面抗原的不同可分为不同的血型。a型血的红细胞上带有血型抗原a(以下简称“a抗原”)，血清中有血型抗体b(以下简称“b抗体”)；b型血的红细胞上带有血型抗原b(以下简称“b抗原”)，血清中有血型抗体a(以下简称“a抗体”)，ab型血的红细胞上既有a抗原也有b抗原，血清中没有a抗体和b抗体；o型血的红细胞上a抗原和b抗原都没有，血清中同时存在a抗体和b抗体。

2、目前常见的血型正反定型一般采用凝集法，其原理是利用血型抗原和抗体反应引起肉眼可见的红细胞凝集来判断结果。正定时，使用igm抗-a或抗-b试剂检测样本的红细胞抗原；反定时，使用已知a或b型的红细胞试剂测定样本血清中的igm血型抗体。但鉴于新鲜红细胞不易保存(红细胞表面血型抗原的抗原性随保存时间延长而逐渐下降)，因此用于反定检测的a型或b型的红细胞试剂对保存条件、运输条件的要求较高，增加了反定检测的成本、限制了反定检测的应用。现有技术中的一些技术方案尝试提取天然血型抗原(例如，通过红细胞膜来提取天然a抗原和b抗原)在反定检测中替代完整红细胞，但相关提取和制备工艺往往较为复杂、不易量产，并且提取出的天然血型抗原对保存条件依然有较高要求。

3、综上所述，人工合成血型抗原是解决上述技术问题的研究方向之一，但目前已知的人工合成血型抗原在特异性、亲和力、稳定性等方面都存在技术问题，无法有效应用到反定检测中。有必要提出新的方法或策略。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种人工合成的血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物在血型抗体检测中的应用，具体技术方案如下。

2、一种血型抗原三糖类似物蛋白偶联物在制备血型抗体检测试剂中的应用，所述血型抗原三糖类似物为血型抗原三糖a类似物，其为a2型；所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白或牛血清白蛋白偶联形成血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物，其与所述血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联比值为10:1–80:1。

3、在一些实施例中，所述血型抗原三糖a类似物与所述血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin,klh)的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1。

4、在一些实施例中，所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白(bovine serumalbumin，bsa)的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1。

5、在一些实施例中，所述血型抗体检测试剂用于免疫层析检测、光密度法检测和柱凝集法检测。

6、在一些实施例中，所述血型抗体检测试剂用于免疫层析检测，当所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白偶联时，其偶联比值为40:1；当所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白偶联时，其偶联比值为40:1。

7、一种免疫层析检测试剂盒，包含检测卡，所述检测卡采用硝酸纤维素膜；所述检测卡上包被血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联物，用于检测血清样本中的血型抗体；所述血型抗原三糖a类似物为a2型，其与血蓝蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1，其与牛血清白蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1。

8、优选的，当所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白偶联时，其偶联比值为40：1；当所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白偶联时，其偶联比值为40:1。

9、一种柱凝集试剂盒，包含abo血型反定型检测卡、血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联物，所述血型抗原三糖a类似物为a2型，其与血蓝蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1；其与牛血清蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1。

10、优选的，当所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白偶联时，其偶联比值为40：1；当所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白偶联时，其偶联比值为40:1。

11、有益技术效果

12、1)经实验证明，本发明提供的上述血型抗原三糖a2类似物蛋白偶联物(偶联bsa或klh)有良好的特异性，作为人工合成的血型抗原，可以区别识别相应的血型抗体，检测的准确性高，可以用于各类型血型抗体检测，具有巨大潜在的临床应用价值。尤其是在应用在免疫层析检测中，本发明技术方案所采用的部分血型抗原三糖类似物蛋白偶联物可以稳定地固定在检测试纸上，并且高效捕捉对应的血型抗体，显色效果(例如，通过胶体金标记显色)易于识别、肉眼可见，因此有应用到快速血型筛查、poct检测、普通人血型自查等场景中的潜力。本发明实验证实，当a2与klh和bsa的偶联比值为40：1时，其效果最好。

13、2)本发明采用的血型抗原三糖类似物蛋白偶联物通过化学工艺合成，比较容易实现工业级量产，可以作为各类实验体系中的血型抗原原料使用，从而可以在例如反定检测中替代红细胞试剂或天然血型抗原，避免了天然血型抗原提取及制备的繁琐工艺，降低了血型检测的成本。

技术特征：

1.一种血型抗原三糖类似物蛋白偶联物在制备血型抗体检测试剂中的应用，其特征在于，所述血型抗原三糖类似物为血型抗原三糖a类似物，其为a2型；所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白或牛血清白蛋白偶联形成血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物，其与所述血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联比值为10:1–80:1；所述a2型化学式如下：

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血型抗原三糖a类似物与所述血蓝蛋白的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血型抗体检测试剂用于免疫层析检测、光密度法检测和柱凝集法检测。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述血型抗体检测试剂用于免疫层析检测，当所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白偶联时，其偶联比值为40:1；当所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白偶联时，其偶联比值为40：1。

6.一种免疫层析检测试剂盒，其特征在于，包含检测卡，所述检测卡采用硝酸纤维素膜；所述检测卡上包被血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联物，用于检测血清样本中的血型抗体；所述血型抗原三糖a类似物为a2型，其与血蓝蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1，其与牛血清白蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1；所述a2型化学式如下：

7.如权利要求6所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，当所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白偶联时，其偶联比值为40：1；当所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白偶联时，其偶联比值为40：1。

8.一种柱凝集试剂盒，其特征在于，包含abo血型反定型检测卡、血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联物，所述血型抗原三糖a类似物为a2型，其与血蓝蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1；其与牛血清白蛋白偶联的偶联比值为10:1、20:1、40:1、60:1和80:1；所述a2型化学式如下：

9.如权利要求8所述的柱凝集试剂盒，其特征在于，当所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白偶联时，其偶联比值为40：1；当所述血型抗原三糖a类似物与牛血清白蛋白偶联时，其偶联比值为40：1。

技术总结
本发明属于血型抗体检测领域，涉及一种血型抗原三糖A类似物蛋白偶联物在血型抗体检测中的应用。所述血型抗原三糖A类似物为A2型；其与血蓝蛋白或牛血清白蛋白偶联形成血型抗原三糖A类似物蛋白偶联物；其与所述血蓝蛋白或牛血清白蛋白的偶联比值为10:1–80:1。本发明的血型抗原三糖偶联物有良好的特异性，可以识别相应的血型抗体，检测准确性高，可应用于各类型血型抗体检测。

技术研发人员：庞伟,黄志刚,魏立巧
受保护的技术使用者：天津德祥生物技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15