一种TAS测定试剂、TAS测定试剂的制备方法及TAS测定方法与流程

本发明涉及医疗检测，尤其涉及一种tas测定试剂、tas测定试剂的制备方法及tas测定方法。

背景技术：

1、tas(total antioxidative status)是一种用于评估体内(或样本中)氧化应激水平的生化指标。它是通过测量生物样本中的抗氧化物质的总和，并以trolox的当量浓度来反映机体内(或样本中)总的抗氧化物质水平。

2、采用的抗氧化活性测定方法主要有清除羟自由基和氧自由基能力测定法、β-胡萝卜素-亚油酸法、清除dpph自由基法、abts(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)阳离子脱色法、frap法、orac法等抗氧化活性测定方法，最常用的是后四种。但是上述的几种方法操作繁琐，其色原溶液均无法长期保存，开盖上机后稳定性差，不适用于生化分析仪自动化检测；并且一些方法与抗氧化剂的生物活性相关性不是太强。因此，本申请提出了一种tas测定试剂、tas测定试剂的制备方法及tas测定方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种tas测定试剂、tas测定试剂的制备方法及tas测定方法，以解决目前的抗氧化活性测定方法色原溶液无法长期保存的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种tas测定试剂，所述测定试剂包括r1试剂、r2试剂以及trolox标准品，其中，

4、所述r1试剂为0.1mmol/l柠檬酸盐缓冲液，ph为5.8；

5、所述r2试剂为8mmol/labts+·阳离子自由基溶液；

6、所述trolox标准品为5mmol/l的trolox溶液；

7、所述r1试剂、r2试剂以及trolox标准品分别盛装在不同的容器内。

8、优选的，所述r1试剂、r2试剂以及trolox标准品的比例为r1试剂：r2试剂：trolox标准品＝40：4：1。

9、本发明还公开了一种tas测定试剂的制备方法，用于配置上述tas测定试剂，包括以下步骤：

10、取0.1mol/l柠檬酸溶液以及0.1mol/l柠檬酸钠溶液混合，在ph计监测下配置所述r1试剂；

11、取8-羟基喹啉溶于丙酮试剂中以配置0.1g/ml的稳定剂；

12、取h2o2溶液，融入ph值为3.6的0.1mmol/l柠檬酸盐缓冲液中，加入稳定剂，采用0.1mol/l柠檬酸溶液或0.1mol/l柠檬酸钠溶液调节ph至3.6以配置h2o2缓冲液，其中，h2o2缓冲液中h2o2的浓度为2mmol/l；

13、取abts溶于h2o2缓冲液中以配置浓度为8mmol/l的abts+·阳离子自由基溶液；

14、取trolox溶于甲醇中，并采用去离子水定容以配置5mmol/l的trolox溶液。

15、进一步的，所述ph值为3.6的0.1mmol/l柠檬酸盐缓冲液的配置方法包括以下步骤：

16、称取一水柠檬酸溶于去离子水中以配置0.1mol/l柠檬酸溶液；

17、称取二水柠檬酸三钠溶于去离子水中以配置0.1mol/l柠檬酸钠溶液；

18、取适量0.1mol/l柠檬酸溶液和0.1mol/l柠檬酸钠溶液混合，在ph计监测下，调制ph值为3.6的0.1mmol/l柠檬酸盐缓冲液。

19、进一步的，所述r1试剂、所述r2试剂以及trolox标准品的存放温度为4℃。

20、进一步的，所述abts+·阳离子自由基溶液在放置到存放环境前在室温下静置1小时。

21、优选的，所述丙酮试剂内丙醇的质量分数为3％～5％；

22、本发明还公开了一种tas测定方法，采用上述tas测定试剂，包括以下步骤：

23、按照预设比例配置tas测定试剂；

24、使用紫外分光光度计扫描abts+·阳离子自由基溶液，得到吸收峰特征曲线，并根据生化分析仪滤光片的设置，确定测定方法的主波长和副波长；

25、在生化分析仪建立tas检测方案。

26、进一步的，紫外分光光度计在280nm～750nm范围内，扫描abts+·阳离子自由基溶液，得到吸收峰特征曲线，选择414nm吸收峰为参考依据，确定以405nm为主波长，选择无吸收峰的546nm为副波长。

27、进一步的，tas检测方案包括：

28、输入检测试剂、试剂配置比例以及主波长和副波长；

29、确定反应类型为逆反应，反应时间为10min；

30、确定测定方法为两点终点法：样本与r1试剂混匀孵育5分钟后测定第1次吸光度a1，立即加入r2试剂，混匀孵育5分钟后测定第2次吸光度a2，计算a1和a2的差值δa＝a1-a2。

31、综上所述，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

32、本发明的实施例公开的tas测定试剂测定抗氧化能力时采用abts法，检测被检样品的总抗氧化能力，能够反应机体所有抗氧化能力，比单个的抗氧化测定能更好地反应抗氧化剂状态,测定快速简便，与抗氧化剂的生物活性相关性强，且制作成本低；同时，tas测定试剂稳定性高，存储时间长，在测定抗氧化能力时不需要现场配置试剂，能够大大提高测定效率。

技术特征：

1.一种tas测定试剂，其特征在于，所述测定试剂包括r1试剂、r2试剂以及trolox标准品，其中，

2.根据权利要求2所述的tas测定试剂，其特征在于，所述r1试剂、r2试剂以及trolox标准品的比例为r1试剂：r2试剂：trolox标准品＝40：4：1。

3.一种tas测定试剂的制备方法，用于配置权利要求1或2所述的tas测定试剂，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的tas测定试剂的制备方法，其特征在于，所述ph值为3.6的0.1mmol/l柠檬酸盐缓冲液的配置方法包括以下步骤：

5.根据权利要求3所述的tas测定试剂的制备方法，其特征在于，所述r1试剂、所述r2试剂以及trolox标准品的存放温度为4℃。

6.根据权利要求5所述的tas测定试剂的制备方法，其特征在于，所述abts+·阳离子自由基溶液在放置到存放环境前在室温下静置1小时。

7.根据权利要求5所述的tas测定试剂的制备方法，其特征在于，所述丙酮试剂内丙醇的质量分数为3％～5％。

8.一种tas测定方法，采用权利要求1或权利要求2所述的tas测定试剂，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的tas测定方法，其特征在于，紫外分光光度计在280nm～750nm范围内，扫描abts+·阳离子自由基溶液，得到吸收峰特征曲线，选择414nm吸收峰为参考依据，确定以405nm为主波长，选择无吸收峰的546nm为副波长。

10.根据权利要求8所述的tas测定方法，其特征在于，tas检测方案包括：

技术总结
本发明涉及医疗检测技术领域，具体提供了一种TAS测定试剂的制备方法、TAS测定试剂及TAS测定方法，所述TAS测定试剂包括R1试剂、R2试剂以及Trolox标准品，其中，所述R1试剂为0.1mmol/L柠檬酸盐缓冲液，PH为5.8；所述R2试剂为8mmol/LABTS+·阳离子自由基溶液；所述Trolox标准品为5mmol/L的Trolox溶液；所述R1试剂、R2试剂以及Trolox标准品分别盛装在不同的容器内；本发明的实施例公开的TAS测定试剂TAS测定试剂稳定性高，存储时间长，在测定抗氧化能力时不需要现场配置试剂，可在各种型号的自动或半自动生化分析仪上实现TAS批量检测，能够大大提高测定效率。

技术研发人员：杨渝伟,俸家富,张彬,代春梅,陈曦
受保护的技术使用者：绵阳市中心医院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17