本申请涉及体外诊断的,具体涉及一种甲型流感病毒抗原的检测试剂盒及检测方法。
背景技术:
1、流行性感冒是一种流感病毒感染引起的一种呼吸道传染病,主要表现为高热、肌肉酸痛、头痛、咳嗽、咽痛、鼻塞流涕等呼吸道症状,传染性极强,曾多次引起世界范围内的暴发流行,对社会造成巨大的经济负担。流感一般多发生于冬春季节,人群普遍易感,主要通过呼吸道飞沫传播,可导致发热及严重的全身中毒症状,重者可危及生命,故早期鉴别和治疗十分关键。
2、根据流感病毒核蛋白抗原性不同,可将流感分为甲(a)、乙(b)、丙(c)三型,其中甲型流感病毒抗原对人类的威胁最大。甲型流感是由h1n1、h3n2等病毒亚型感染导致的传染性疾病,临床表现为咽痛、扁桃体肿大、咳嗽、发热等,与季节性流感相似。甲型流感传染性强,会累及多个脏器系统,且病原菌感染率较高。因此,早期诊断至关重要。
技术实现思路
1、为了检测甲型流感病毒抗原,本申请提供一种甲型流感病毒抗原的检测试剂盒及检测方法。
2、本申请提供一种甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,包括以下组分:链霉亲和素磁珠溶液、生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体、预激发液、激发液;
3、所述预激发液为含0.15-0.25wt%浓硝酸与0.45-0.55wt%吐温-20的水溶液;所述激发液为0.25-0.35m的氢氧化钠水溶液。
4、链霉亲和素能与生物素发生特异性结合,链霉亲和素-生物素反应体系之间的结合力是目前已知最强的非共价键结合力。链霉亲和素以同源四聚体的形式存在,每摩尔的四聚体分子可结合四摩尔的生物素分子,在免疫检测领域具有信号放大作用。
5、本申请采用化学发光免疫分析法体外定性检测待测样本或阳性对照品中的甲型流感病毒抗原。样本或阳性对照品中甲型流感病毒抗原与生物素标记抗体、链霉亲和素磁珠和吖啶酯标记抗体结合后,形成磁珠-待测物-吖啶酯复合物,测定其相对发光强度(rlu)。本申请基于化学发光平台采用吖啶酯发光物直接标记抗体,具有反应时间短、操作方便、自动化程度高、灵敏度高、线性宽、重复性好的优点,为市场提供质优价廉、稳定可靠、重复性好、批间差小、准确度高的检测试剂盒。
6、本申请利用生物素标记抗体作为捕获抗体,捕获待测样本或阳性对照品中的甲型流感病毒抗原,形成固相抗原;然后利用吖啶酯标记抗体作为发光标记抗体,获得了检测灵敏度较高、精密度较强甲型流感病毒抗原的检测试剂盒。
7、可选地,所述预激发液为含0.18-0.22wt%浓硝酸与0.47-0.53wt%吐温-20的水溶液;所述激发液为0.28-0.32m的氢氧化钠水溶液。
8、可选地,所述试剂盒中全部试剂组分的稀释液为含0.7-1.3%牛血清白蛋白、浓度为0.08-0.12mol/l、ph值为6.2-7.6的pbs缓冲液。
9、可选地,所述链霉亲和素磁珠溶液的浓度为0.15-0.35mg/ml。
10、可选地,所述生物素标记抗体包括浓度为0.01-0.03μg/ml的生物素和浓度为0.08-0.12μg/ml的抗甲型流感病毒抗原抗体。
11、可选地,所述吖啶酯标记抗体包括浓度为0.04-0.06μg/ml的吖啶酯和浓度为0.08-0.12μg/ml的抗甲型流感病毒抗原抗体。
12、可选地,所述洗涤液为浓度为0.08-0.12mol/l、ph值为6.2-7.6的pbs缓冲液。
13、第二方面,本申请提供了所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒在甲型流感病毒抗原检测中的应用。
14、第三方面,本申请提供了一种甲型流感病毒抗原的检测方法,其特征在于,所述检测方法是利用上述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒检测的。
15、可选地,所述甲型流感病毒抗原的检测方法,具体步骤如下:
16、分别向待测样品中加入15-25ul所述链霉亲和素磁珠溶液、40-60ul所述生物素标记抗体、40-60ul吖啶酯标记抗体,37℃振荡反应13-18min;
17、反复洗涤3次后,分别加入80-120ul所述预激发液和80-120ul所述激发液,然后检测发光强度并计数;
18、当所述待测样品的s/co值≥1.0,待测样品中甲型流感病毒抗原的检测结果判为阳性;
19、当所述待测样品的s/co值<1.0,待测样品中甲型流感病毒抗原的检测结果判为阴性。
20、可选地,组分添加顺序依次为:15-25ul所述链霉亲和素磁珠溶液、40-60ul所述生物素标记抗体、40-60ul吖啶酯标记抗体。
21、综上所述,本申请的技术方案具有以下效果:
22、本发明以生物素标记捕获抗体,同时以吖啶酯标记检测抗体,通过化学反应标记抗体,分离纯化,极大的提高了反应的灵敏度;以链霉亲和素磁珠为固相载体,利用生物素-链霉亲和素系统,使免疫反应更容易混匀和结合,而且大大提高了反应速度。
23、本发明以吖啶酯为发光物质,无需底物催化即可发光,具有发光迅速、信号强、本底值低等特点,有利于信号的检测,提高了试剂盒最终的灵敏度和特异性。
1.一种甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,其特征在于,包括以下组分:链霉亲和素磁珠溶液、生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体、预激发液、激发液、;
2.根据权利要求1所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,其特征在于,所述预激发液为含0.18-0.22wt%浓硝酸与0.47-0.53wt%吐温-20的水溶液;所述激发液为0.28-0.32m的氢氧化钠水溶液。
3.根据权利要求1所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中全部试剂组分的稀释液为含0.7-1.3%牛血清白蛋白、浓度为0.08-0.12mol/l、ph值为6.2-7.6的pbs缓冲液。
4.根据权利要求1所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,其特征在于,所述链霉亲和素磁珠溶液的浓度为0.15-0.35mg/ml。
5.根据权利要求1所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,其特征在于,所述生物素标记抗体包括浓度为0.01-0.03μg/ml的生物素和浓度为0.08-0.12μg/ml的抗甲型流感病毒抗原抗体。
6.根据权利要求1所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒,其特征在于,所述吖啶酯标记抗体包括浓度为0.04-0.06μg/ml的吖啶酯和浓度为0.08-0.12μg/ml的抗甲型流感病毒抗原抗体。
7.根据权利要求1-6任一项所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒在甲型流感病毒抗原检测中的应用。
8.一种甲型流感病毒抗原的检测方法,其特征在于,所述检测方法是利用权利要求1-6任一项所述甲型流感病毒抗原的检测试剂盒检测的。
9.根据权利要求8所述甲型流感病毒抗原的检测方法,其特征在于,具体步骤如下: