一种盐酸毛果芸香碱含量的HPLC检测方法与流程

本发明属于化学药物分析检测领域，具体涉及一种盐酸毛果芸香碱含量的hplc检测方法。

背景技术：

1、盐酸毛果芸香碱是一种胆碱能毒蕈碱激动剂，可激活位于虹膜括约肌和睫状肌等平滑肌上的毒蕈碱受体。盐酸毛果芸香碱滴眼液可收缩虹膜括约肌，收缩瞳孔以提高近距和中距视力，同时保持瞳孔对光的一些反应。盐酸毛果芸香碱滴眼液还会收缩睫状肌，并可能将眼睛转移到更近视的状态。本品在英国药典、美国药典中均有收载，均采用酸碱电位滴定法测定含量，电位滴定法对仪器的精度要求高，灵敏度较低，且供试品含量极易受滴定用酸、碱溶液浓度的影响，耗时长，测定结果无法得到对照品校正。本发明采用hplc法测定盐酸毛果芸香碱滴眼液中盐酸毛果芸香碱含量，峰形良好，专属性强，方法可靠，可以更好地控制盐酸毛果芸香碱滴眼液的质量，更好的控制产品稳定性。

技术实现思路

1、本发明的目的是建立一个测定盐酸毛果芸香碱滴眼液中盐酸毛果芸香碱含量的方法，可以更好的控制产品稳定性。

2、本发明的目的可以通过以下措施达到：

3、一种盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，通过液相色谱法检测盐酸毛果芸香碱原料或盐酸毛果芸香碱滴眼液中盐酸毛果芸香碱的含量，其中液相色谱的检测条件包括：

4、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；

5、流动相a：磷酸盐缓冲液；

6、流动相b：乙腈-甲醇的混合溶液；

7、洗脱方式：流动相a-b等度洗脱。

8、在本申请的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，优选的色谱柱为welchrom c18色谱柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；。

9、其中流动相a优选为四丁基磷酸二氢铵-氨的磷酸盐缓冲液，进一步优选的，流动相a为0.6-0.8g/l的四丁基磷酸二氢铵-氨的磷酸盐缓冲液，最优选的，流动相a为0.697g/l的四丁基磷酸二氢铵-氨的磷酸盐缓冲液。本发明采用四丁基磷酸二氢铵缓冲盐溶液作为流动相a，优化了盐酸毛果芸香碱峰形，同时降低了柱压，延长了色谱柱使用寿命。

10、其中流动相b为乙腈与甲醇体积比为55-65:50-60或75-85：15-25的混合溶液，进一步优选的，流动相b为乙腈与甲醇体积比为60:55或80:20的混合溶液。

11、一种磷酸盐缓冲液的配置方法为，取四丁基磷酸二氢铵，加水使溶解，用氨水调节ph至7.7，摇匀，其中四丁基磷酸二氢铵的浓度为0.697g/l。

12、本发明的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其液相色谱的检测条件还包括：

13、流速：1-2ml/min，优选1.2ml/min；

14、柱温：20℃-40℃，优选25℃-35℃，更优选30℃；

15、检测波长：220nm；

16、进样量：10μl。

17、在本申请的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，优选的洗脱方式为：流动相a-b以80：20等度洗脱。

18、本发明所提供的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，具体可包括如下步骤：

19、a)配制盐酸毛果芸香碱的原料供试品溶液或滴眼液供试品溶液：精密称取盐酸毛果芸香碱原料药置量瓶中，或量取盐酸毛果芸香碱滴眼液置量瓶中，用纯化水制成原料供试品溶液或滴眼液供试品溶液；以滴眼液为例，量取盐酸毛果芸香碱滴眼液加水制成每1ml水含0.5mg盐酸毛果芸香碱的溶液；

20、b)配制对照品溶液：取盐酸毛果芸香碱对照品置量瓶中，用纯化水制成对照品溶液；一种具体的方法为：称取盐酸毛果芸香碱对照品，加纯化水制成每1ml水含0.5mg盐酸毛果芸香碱的溶液；

21、c)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法以峰面积计算供试品溶液中盐酸毛果芸香碱的含量。测定条件包括：高效液相色谱仪的固定相为十八烷基键合硅胶，流动相a为磷酸盐缓冲溶液，流动相b为乙腈和甲醇的混合溶液，柱温为20～40℃，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，读取数据。

22、具体地，溶液中计算公式为：

23、

24、

25、式中：-----对照品的质量与对照品色谱图中主峰峰面积比值的平均值；ai-----供试品色谱图中主峰的峰面积；cs----对照品的有效含量，％；mi----原料药供试品的质量，mg；g---供试品的规格，mg/ml；di-----供试品溶液稀释倍数；ds-----对照品溶液稀释倍数。

26、优选的，该检测方法可准确定量供试品中盐酸毛果芸香碱的含量。

27、具体地，该方法适用于需要进行盐酸毛果芸香碱含量检测的原料及含盐酸毛果芸香碱的相关制剂，优选为盐酸毛果芸香碱滴眼液。

28、本发明的有益效果：本发明应用高效液相色谱法测定盐酸毛果芸香碱滴眼液中盐酸毛果芸香碱含量，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，通过检测盐酸毛果芸香碱滴眼液中每ml含盐酸毛果芸香碱11.25～13.75mg，能够控制盐酸毛果芸香碱滴眼液的含量，更好的控制产品稳定性。本发明在专属性、定量限、线性范围、准确性以及精密度上表现出无可拟比的优势。

技术特征：

1.一种盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于，通过液相色谱法检测盐酸毛果芸香碱原料或盐酸毛果芸香碱滴眼液中盐酸毛果芸香碱的含量，其中液相色谱的检测条件包括：

2.根据权利要求1所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于所述色谱柱为welchrom c18色谱柱。

3.根据权利要求1所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于所述流动相a为四丁基磷酸二氢铵-氨的磷酸盐缓冲液，所述流动相b为乙腈与甲醇体积比为55-65:50-60的混合溶液。

4.根据权利要求3所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于所述流动相a为0.697g/l的四丁基磷酸二氢铵-氨的磷酸盐缓冲液，所述流动相b为乙腈与甲醇体积比为55-65：50-60或75-85：15-25的混合溶液。

5.根据权利要求4所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于所述流动相b为乙腈与甲醇体积比为60:55或80:20的混合溶液。

6.根据权利要求1所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液的配置方法为，取四丁基磷酸二氢铵，加水使溶解，用氨水调节ph至7.7，摇匀，其中四丁基磷酸二氢铵的浓度为0.697g/l。

7.根据权利要求1所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于液相色谱的检测条件包括：

8.根据权利要求7所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于液相色谱的检测条件包括：

9.根据权利要求1所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于洗脱方式为：流动相a-b以80：20等度洗脱。

10.根据权利要求1所述的盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

技术总结
本发明公开了一种盐酸毛果芸香碱含量的检测方法，通过液相色谱法检测盐酸毛果芸香碱原料或盐酸毛果芸香碱滴眼液中盐酸毛果芸香碱的含量，其中液相色谱的检测条件包括：色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A磷酸盐缓冲液；流动相B乙腈‑甲醇的混合溶液；洗脱方式流动相A‑B等度洗脱。本发明在专属性、定量限、线性范围、准确性以及精密度上表现出无可拟比的优势。

技术研发人员：祁文静,辛妮
受保护的技术使用者：南京海纳医药科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25