一种多肽及氨基酸的酶解工艺及其浓度测定方法与流程

本发明涉及生物，尤其涉及一种多肽及氨基酸的酶解工艺及其浓度测定方法。

背景技术：

1、动、植物蛋白的酶解是以动、植物为原料，经过酶的作用，在一定的温度条件下进行水解的过程。在动、植物蛋白酶解后形成多肽组分，这些多肽组分需要再进行后续加工才能形成最终产品；同时在酶解前还需要对在对多肽以及氨基酸的浓度进行测定时，现有的设备不能够同时对多组溶液进行检测，且测定时溶液分层，产生沉淀，并且不能够与磁珠充分接触，测量结果存在较大误差。

技术实现思路

1、本发明提出的一种多肽及氨基酸的酶解工艺及其浓度测定方法，解决了上述背景技术中所提出的问题。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种多肽及氨基酸浓度的测定方法，多肽及氨基酸的浓度测定通过试剂盒完成，多肽及氨基酸的浓度测定方法包括以下步骤：

4、步骤一：将所需测定的溶液倒入在试剂盒内部的指定位置，所述试剂盒的内壁固定有第一固定板，所述第一固定板的顶部固定有沿其长度方向等距分布的测试单元，所述测试单元包括有沿第一固定板宽度方向等距分布的测量筒，所述测量筒中放置有磁珠，将所需测定的溶液倒入在测量筒中；

5、步骤二：对测量筒的顶部进行密封，避免溶液洒出；所述试剂盒的顶部外壁通过两组沿其中心轴线对称分布的卡扣连接有顶盖，所述顶盖的内壁固定有中空结构的第四固定板，所述第四固定板的底部固定有与测量筒一一对应的第二活塞，所述第四固定板的顶部固定有调节其做上下往复运动的驱动结构，所述第四固定板的内部固定有第三固定板，所述第三固定板的底部固定有与第二连接杆一一对应的第一推杆，所述第一推杆的下方设置与第二连接杆顶部固定有卡合结构；

6、步骤三：对测量筒中的溶液进行旋转处理，避免溶液沉淀分层，使得磁珠能够与测量筒中溶液的多肽基氨基酸充分接触，所述测量筒的外圈固定有中空结构的第一固定套环，所述第一固定套环的内圈固接有与测量筒固接的管道，所述第一固定套环的内部滑动套接有与其同轴设置的环形结构的第一活塞，所述第一活塞的顶部固定有两组沿其中心轴线对称分布的第一固定杆，两组所述第一固定杆的顶部固定有同一组与测量筒外圈滑动套接的第二固定套环，相邻两组所述第二固定套环之间固定有同一组第一连接杆，所述第一连接杆的顶部固定有第二连接杆，所述第二连接杆的顶部固定有卡合结构，通过以上结构实现磁珠与测量筒中溶液的多肽接氨基酸充分接触；

7、步骤四：反应结束之后，将测量筒中的溶液排除；所述第一固定板上开设有与测量筒一一对应的第二通孔，所述第二通孔的正下方设置有堵料结构，所述堵料结构包括有均为半圆形结构的第一堵料板和第二堵料板，且第一堵料板与第二堵料板沿试剂盒的竖直中心轴线对称分布，相邻所述第一堵料板与第二堵料板之间固定有同一组第一调节结构，所述第一调节结构包括有与试剂盒滑动套接的第二转轴，所述第二转轴伸入试剂盒内部的一端滑动套接有与试剂盒内壁固定的中空结构的第三转轴，所述第二转轴的外圈固定有沿其长度方向等距分布的第一推动结构，所述第一推动结构包括有两组与第二转轴外圈转动连接的第三推杆，且两组第三推杆沿第二转轴的竖直中心轴线对称分布，第一推动结构中的其中一组所述第三推杆的另一端与相邻的第一堵料板转动连接，第一推动结构中的另一组所述第三推杆的另一端与相邻的第二堵料板转动连接，所述第一堵料板与第二堵料板的顶部均固定有第一滑块，位于最边缘的所有第一堵料板和第二堵料板相互远离的一侧均转动连接有第二推杆，若干组所述第二推杆的另一端转动连接有同一组与试剂盒滑动套接的第四转轴，所述第四转轴的另一端滑动套接有与试剂盒内壁固定的第五转轴，所述第四转轴与第二转轴伸出试剂盒的一端固定有同一组限位板，所述限位板的边缘部分连接有与试剂盒外壁固定的罩壳，所述罩壳远离试剂盒的一端螺纹套接有与限位板固定的螺杆；

8、步骤五：对磁珠平衡处理，磁性分离，弃上清；

9、步骤六：清洗磁珠，除去分特异性结合杂质；

10、步骤七：加入洗脱液，对多肽及氨基酸的含量进行测定。

11、优选的，所述管道为倾斜设置，所述管道倾斜向上设置，且管道与测量筒直径之间的夹角范围为10°-30°。

12、优选的，所述驱动结构包括有与顶盖顶部内壁固定的电机，所述电机的输出端固接有第一转轴，所述第一转轴的外圈固接有第四固定杆，所述第四固定杆的底部转动连接有第四固定杆，所述第三固定杆的底部转动连接有与第四固定板顶部固定的第二固定杆。

13、优选的，所述卡合结构包括与第二连接杆顶部转动连接的两组沿其中心轴线对称分布的第三连接杆，两组所述第三连接杆与第二连接杆之间均固定与弹簧，所述第四固定板的底部开设有与第二连接杆一一对应的第一通孔，所述第一推杆为u型结构，且第一通孔的开口距离小于第一通孔的长度。

14、优选的，所述第三固定板的左右两端均连接有第三调节结构，所述第三调节结构包括有与第三固定板固定的第一调节杆，所述第四固定板的左右两端均开设有第二通道，所述顶盖的左右两端均开设有第一通道，所述第一调节杆穿过相邻的第一通道与第二通道转动连接有第一挂钩，所述第一挂钩的上下均设置有与顶盖外壁滑动连接的第二挂钩。

15、优选的，所述第一滑块的正上方设置有开设在第一固定板底部的第一滑槽，第一滑块与对应在其上方的第一滑槽滑动套接。

16、一种多肽及氨基酸的酶解工艺，多肽及氨基酸的酶解工艺包括以下步骤：

17、步骤一：试验设定ph值为8，研究不同的酶解温度、酶解时间和加酶量对多肽及氨基酸酶解程度的影响，根据单因素实验结果进行三因素三水平l9(3)3的正交试验，酶解产物进行dpph测定，以得出多肽及氨基酸酶解的最优方案；

18、步骤二：对酶解产物进行dpph测定；预试：取dpph溶液2ml，往其中加少量样液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。如：在预试过程中，发现加样到200μl时dpph溶液颜色基本褪去，则100μl为该样品液的最大用量，其用量梯度设为40μl、80μl、120μl、160μl、200μl；

19、步骤三：测量：a0值的测量：取dpph溶液2ml加入小试管中，加95乙醇1ml，充分混合，测a值(519nm)，此a值为a0；a值的测量：取dpph溶液2ml加入小试管中，加样品液xμl(x是根据预试结果确定样品液的用量)，再加(1000-x)μl95乙醇(或无水乙醇)，混合，静置30分钟后，测a值(519nm)；

20、步骤四：测定自由基清除率的计算公式：dpph清除率＝(a0-a)/a0×100％；

21、步骤五：统计分析：本试验所有试验数据重复测定三次，取平均值。

22、本发明能够同时对不同的溶液同时进行检测，并且，能够在检测过程中使得检测溶液一直处于流动状态，能够与磁珠充分接触，从而磁珠能够对溶液中的多肽或氨基酸进行充分吸附，测定结果更加准确。

23、本发明能够在想通过ph值下，研究不同的酶解温度、酶解时间和加酶量对多肽及氨基酸酶解程度的影响，根据单因素实验结果进行三因素三水平l9(3)3的正交试验，酶解产物进行dpph测定，以得出多肽及氨基酸酶解的最优方案。

24、本发明能够在对磁珠进行清洗时，能够将其清洗得更加测定，避免杂质影响多肽及氨基酸的浓度测定结果。