与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物及其应用的制作方法

本发明涉及生物医学，尤其涉及一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物及其应用。

背景技术：

1、巨噬细胞在子宫中含量丰富，是子宫内膜第二丰富的白细胞群体，也是子宫肌层白细胞的主要群体。巨噬细胞在胚胎着床、胎盘形成、妊娠维持和分娩启动等过程中发挥重要作用。根据活化状态、发挥功能以及分泌因子的不同，巨噬细胞主要可以分为经典活化的m1型巨噬细胞和选择性活化的m2巨噬细胞。m1型巨噬细胞一般是通过干扰素-γ及脂多糖(lps)活化，m1主要分泌促炎因子，在炎症早期承担着重要作用。m2型巨噬细胞通过th2细胞因子如il-4、il-13及免疫复合物进行活化，m2表达抑制炎症因子，起着抑制炎症反应及组织修复的作用。

2、研究发现，当巨噬细胞特异性耗尽则会导致植入失败，m1-m2失衡会导致妊娠丢失或妊娠并发症，因而巨噬细胞表型动态变化在正常妊娠过程中发挥着极其重要的作用。在围着床期，巨噬细胞被诱导向m1激活。当滋养层细胞附着于子宫内膜并侵入子宫间质时，巨噬细胞转变为混合的m1-m2类型并持续到妊娠中期，参与子宫血管系统的广泛重建，这是供应足够的胎盘-胎儿血液所必需的。在胎盘发育完成后，巨噬细胞转变为以m2为主的表型，促进母亲对半异基因胎儿的免疫耐受，并保护胎儿生长到分娩。在分娩之前，子宫中m1巨噬细胞积聚形成促炎状态以促进胎儿排出。整个妊娠过程若巨噬细胞m1-m2比例失衡通常将导致异常妊娠，如自然流产、早产、先兆子痫等。因而检测内膜巨噬细胞m1和m2型指标在观测妊娠结局中显得尤为重要。

3、irf5(interferon regulatory factor 5)全名干扰素调节因子5，irf5基因位于染色体7q32上，由50个非翻译区(utr)及8个编码外显子组成，irf5在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞中为高表达状态。研究显示，irf5是调控巨噬细胞极化的关键因子之一，并且对炎性因子的产生至关重要，它能通过结合髓样分化因子88、控制toll样受体、激活核因子-κb等机制诱导不同表型的巨噬细胞形成而发挥促炎反应。国内外许多实验发现，通过上调irf5的表达能诱导m1型巨噬细胞形成，促进大量炎性细胞因子(il-6、il-12和tnf-α等)的产生；反之，irf5的表达水平下调则诱导m2型巨噬细胞形成，且m1型巨噬细胞数量及炎症因子的释放含量均降低。因此，irf5的表达水平变化能够改变巨噬细胞的极化。更重要的是，近年来已有研究通过对肿瘤组织进行免疫组化多色荧光染色，证明了irf5可作为巨噬细胞m1的重要标志之一。sa等人在胰腺癌中开发了巨噬细胞定量多重免疫荧光分析方法，共使用包括cd68、cd163、cd86、irf5、mrc1(cd206)5种标记物，irf5与cd86双标定义m1，cd163与mrc1双标定义m2，运用空间点模式分析评估肿瘤细胞和免疫细胞之间的共定位程度，以及多变量调整的cox比例风险回归评估与患者预后的关系。通过定量分析不同分化表型的巨噬细胞细胞密度揭示了m2型巨噬细胞与较差的患者生存有关，并且m2型巨噬细胞与肿瘤细胞之间的距离与无病生存密切相关。

4、但目前的研究中，仍缺少对与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的相关研究，因而无法准确对子宫内膜巨噬细胞的分型和子宫内膜的耐受性进行评估，影响了对妊娠过程的检测判断。

技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物及其应用，旨在解决现有技术中缺少对与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的相关研究，导致无法准确对子宫内膜巨噬细胞的分型和子宫内膜的耐受性进行评估的问题。

2、第一方面，本申请提供了一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，所述巨噬细胞标志物包括巨噬细胞m1标志物和巨噬细胞m2标志物，其中，所述巨噬细胞m1标志物包括cd68+和irf5+的混合物，所述巨噬细胞m2标志物包括cd68+和cd163+的混合物。

3、本申请第一方面提供了一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其中，以cd68+和irf5+的混合物作为巨噬细胞m1标志物，以cd68+和cd163+的混合物作为巨噬细胞m2标志物，一方面解决了临床分析中缺乏巨噬细胞m1和巨噬细胞m2标志物不足的缺点，并且，通过分析巨噬细胞m1标志物和巨噬细胞m2标志物的相关指数，进而用于检测内膜巨噬细胞分型及评估内膜容受性，可以稳定的、准确的实现巨噬细胞分型鉴定和子宫内膜容受性评估，用于反应患者内膜状态，对妊娠结局的预测价值，为提高胚胎种植率和妊娠率提供了有力保障；通过针对内膜巨噬细胞细胞亚群的标记物染色，将内膜巨噬细胞的亚群特异性标记出来，能够更准确、更深入地分析子宫内膜组织上发挥不同功能的巨噬细胞亚群的状态变化同时采用了免疫组化双染技术，准确识别目标细胞，为内膜巨噬细胞的定量分析提供依据，有利于广泛应用。

技术特征：

1.一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述巨噬细胞标志物包括巨噬细胞m1标志物和巨噬细胞m2标志物，其中，所述巨噬细胞m1标志物包括cd68+和irf5+的混合物，所述巨噬细胞m2标志物包括cd68+和cd163+的混合物。

2.根据权利要求1所述的与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述子宫内膜容受性采用第一指数或第二指数进行评价；其中，

3.根据权利要求2所述的与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，当所述第一指数为-0.150％～0.150％，表示子宫内膜容受性好。

4.根据权利要求2所述的与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，当所述第二指数为0.700～2.500，表示子宫内膜容受性好。

5.根据权利要求1所述的与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述产品为用于评价子宫内膜容受性的试剂盒，其中，所述试剂盒包括检测所述巨噬细胞标志物的试剂。

6.根据权利要求5所述的子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述试剂包括过氧化物酶灭活液、抗原修复液、非特异性蛋白阻断剂、一抗、二抗、抗体稀释液、缓冲液、显色液、复染液、封片剂、脱蜡剂、水化剂、灭菌去离子水。

7.根据权利要求6所述的子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述一抗包括小鼠抗人巨噬细胞细胞表面分子cd68的抗体、兔抗人巨噬细胞表面分子cd163的抗体和兔抗人巨噬细胞胞内转录因子irf5的抗体；和/或，

8.根据权利要求7所述的子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述小鼠抗人巨噬细胞细胞表面分子cd68的抗体对应的二抗为所述辣根过氧化物酶标记的抗小鼠igg抗体；和/或，

9.根据权利要求6所述的子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，

10.根据权利要求5所述的子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，其特征在于，所述试剂盒利用多光谱图片分析软件对巨噬细胞m1标志物和巨噬细胞m2标志物进行信号识别和分析，得到子宫内膜巨噬细胞亚群的数量，通过计算得到第一指数或第二指数进行子宫内膜容受性评价。

技术总结
本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物及其应用。提供了一种与子宫内膜容受性相关的巨噬细胞标志物的定量检测试剂在制备评价子宫内膜容受性的产品中的应用，所述巨噬细胞标志物包括巨噬细胞M1标志物和巨噬细胞M2标志物，其中，所述巨噬细胞M1标志物包括CD68<supgt;+</supgt;和IRF5<supgt;+</supgt;的混合物，所述巨噬细胞M2标志物包括CD68<supgt;+</supgt;和CD163<supgt;+</supgt;的混合物。可以稳定的、准确的实现巨噬细胞分型鉴定和子宫内膜容受性评估，用于反应患者内膜状态，为提高胚胎种植率和妊娠率提供了有力保障。

技术研发人员：李龙飞,王琳琳,张海霞,刁梁辉,蔡松辰
受保护的技术使用者：深圳中山泌尿外科医院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11