葛根药材指纹图谱的构建方法和应用与流程

本发明涉及中药检测，特别是涉及一种葛根药材指纹图谱的构建方法和应用。

背景技术：

1、葛根药材为豆科植物野葛（pueraria lobata（willd.）ohwi）的干燥根，习称野葛，具有解肌退热、透疹、生津止渴、升阳止泻等功效。主要化学成分为3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆素、大豆苷等异黄酮类化合物。在临床常用于治疗表证发热、麻疹不透、阴虚消渴、脾虚泄泻等症。现代药理药效研究表明，葛根具有广泛的药理作用，如保肝、抗肿瘤、神经保护、心脏保护、改善胰岛素抵抗、抗炎、抗氧化等，在治疗心脑血管疾病、治疗糖尿病、抗肿瘤、预防骨质疏松、发挥雌激素作用、抗炎、抗氧化等方面发挥重要作用。

2、葛根目前已被国家卫生部批准列入“既是食品又是药品”名录，随着药食同源概念的普及与应用，葛根的市场需求量也日益增加。作为以野生资源为主的中药材，如何有效保证其资源品质、控制其产品质量是葛根药材可持续利用的重要环节。2020年版《中国药典》中对葛根水分、总灰分、醇浸出物测定作了规定，含量测定项下以葛根素的含量评价其质量，其以单一成分葛根素为质量评价指标评价葛根的质量，无法准确全面的对葛根药材进行质量控制。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种葛根药材指纹图谱的构建方法和应用，通过该方法建立的指纹图谱具有多个特征峰，可实现对葛根药材进行全面、准确的质量控制。

2、本发明的一个方面，提供一种葛根药材指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

3、使用提取溶剂对葛根药材进行提取，制备供试品溶液；

4、对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，构建葛根药材指纹图谱；

5、所述高效液相色谱检测的条件包括：流动相a为水或甲酸水溶液，流动相b为乙腈，采用梯度洗脱；

6、所述梯度洗脱程序包括：

7、0~2min，所述流动相b的体积百分比维持5%；

8、2~3min，所述流动相b的体积百分比由5%上升至9%；

9、3~20min，所述流动相b的体积百分比维持9%；

10、20~21min，所述流动相b的体积百分比由9%上升至12%；

11、21~35min，所述流动相b的体积百分比维持12%；

12、35~36min，所述流动相b的体积百分比由12%上升至15%；

13、36~50min，所述流动相b的体积百分比由15%上升至20%；

14、50~60min，所述流动相b的体积百分比维持20%；

15、60~72min，所述流动相b的体积百分比由20%上升至50%；

16、72~80min，所述流动相b的体积百分比维持50%。

17、在其中一些实施例中，所述高效液相色谱检测满足如下条件中的至少一个：

18、（1）色谱柱为c18色谱柱；

19、（2）检测波长为210nm-300nm；

20、（3）流速为0.5ml/min-2ml/min；

21、（4）柱温为25℃-35℃。

22、在其中一些实施例中，所述甲酸溶液中，甲酸的体积百分含量为0.05%-0.4%。

23、在其中一些实施例中，所述提取步骤满足如下条件中的至少一个：

24、（1）所述提取的方式包括超声提取和回流提取中的一种或多种；

25、（2）所述提取的时间为15min-60min；

26、（3）所述提取溶剂包括乙醇溶液。

27、在其中一些实施例中，所述乙醇溶液中乙醇的体积百分含量为30%-100%；及/或

28、所述葛根药材与所述乙醇溶液的质量体积比为0.1g：（15-75）ml。

29、在其中一些实施例中，所述的葛根药材指纹图谱的构建方法还包括如下步骤：

30、将对照品进行溶解，制备对照品混合溶液；

31、对所述对照品混合溶液进行高效液相色谱检测，获得对照图谱；

32、根据所述对照图谱对所述葛根药材指纹图谱的色谱峰进行共有峰指认；

33、其中，所述对照品包括葛根素、染料木素、染料木苷、芒柄花素、大豆苷、大豆苷元、鹰嘴豆芽素a、3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素和葛根素芹菜糖苷中的一种或多种。

34、在其中一些实施例中，所述葛根指纹图谱的色谱峰包含10个特征峰；其中指认的6个共有峰包括：1号峰为3'-羟基葛根素，2号峰为葛根素，3号峰为3'-甲氧基葛根素，4号峰为葛根素芹菜糖苷，5号峰为大豆苷，7号峰为大豆苷元。

35、本发明的第二方面，提供一种葛根药材的多指标成分的含量测定方法，所述多指标成分的含量测定方法包括如下步骤：

36、使用提取溶剂对葛根药材进行提取，制备供试品溶液；

37、将对照品进行溶解，制备对照品溶液；

38、分别进样所述供试品溶液以及不同体积的所述对照品溶液，进行高效液相色谱测定；

39、获取不同体积的所述对照品溶液中各指标成分分别对应的峰面积，以所述对照品溶液的进样量为横坐标，以不同进样量中所述对照品溶液中各指标成分分别对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程；

40、获取所述供试品溶液中各指标成分对应的峰面积，并代入所述线性回归方程中计算得到所述供试品中所述各指标成分的含量；

41、其中，所述各指标成分包括3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷和大豆苷元；所述供试品溶液的制备方法、对照品溶液的制备方法和高效液相色谱方法的条件与如上所述一致。

42、本发明的第三方面，提供一种葛根药材的质量评价方法，包括如下步骤：

43、根据如上所述的葛根药材的多指标成分的含量测定方法，获得所述葛根药材中各指标成分的含量；

44、将所述各指标成分的含量相加，获得所述葛根药材中的总黄酮含量；

45、按照中国药典2020版葛根浸出物项下方法对所述葛根药材进行浸出物含量测定；

46、根据综合评分评价所述葛根药材的质量，所述综合评分公式为：所述总黄酮含量×60%+所述浸出物含量×40%。

47、本发明的第四方面，提供如上所述的葛根药材指纹图谱的构建方法、如上所述葛根药材的多指标成分的含量测定方法或如上所述葛根药材的质量评价方法在葛根药材质量控制中的应用。

48、本发明具有如下有益效果：

49、本技术通过对葛根药材采用特定的hplc（高效液相色谱）条件进行检测分析，构建了含有多个特征峰的葛根药材指纹图谱，所述葛根药材指纹图谱的构建方法简便、可靠、客观性强，且具有良好的精密度、重复性、专属性和稳定性。

50、进一步地，所述葛根药材指纹图谱包含10个共有峰，并指认包括3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷和大豆苷元在内的6个指标成分，为葛根道地药材质量标准提供整体质控依据。

51、此外，本技术建立的葛根药材的hplc指纹图谱的构建方法，同样适用于葛根中多种异黄酮成分的含量测定以及葛根药材质量的综合评价，即通过收集各主产区的葛根药材，以6种葛根异黄酮总含量平均值及rsd、浸出物含量及rsd、相似度为指标的综合评价方式，对不同产地葛根进行了质量比较研究，为制定优质葛根药材质量标准以及稳定原料产地提供方法和依据。