本发明属于吲哚布芬检测方法，具体涉及一种吲哚布芬杂质检测方法及其应用。
背景技术：
：：1、吲哚布芬(indobufen)是一种异吲哚啉基苯基丁酸衍生物，化学名称为(±)2-[4-(1-氧代-2-异二氢吲哚基)苯基]丁酸，结构式如下所示。吲哚布芬是由farmitalia carloerba(法玛西亚，现在的辉瑞)公司开发的一种抗血小板聚集药物，通过可逆性的抑制血小板环氧化酶，减少血栓烷素a2的生成，从而阻断血小板的聚集，可用于预防和治疗动脉硬化引起的缺血性心血管病变、缺血性脑血管病变、静脉血栓形成等。2、3、吲哚布芬的合成工艺涉及氢化反应、环化反应、锌粉还原反应、粗品纯化等多个步骤，易产生多种工艺杂质：氢化反应产物(记为杂质1)、环化反应产物(记为杂质2)、锌粉还原反应副产物(记为杂质3～6)和粗品纯化反应副产物(7～8)。4、5、现有技术已公开多种吲哚布芬杂质：①吲哚布芬国家药品标准公开吲哚布芬杂质i(即杂质2)；②文献1(yu li et al.characterization of an unknown impurity inindobufen tablets by hplc-q-tof ms and nmr[j].current pharmaceuticalanalysis,2021(17):885-891)公开新杂质(即杂质4)；③文献2(赵欢.吲哚布芬的质量控制研究[d].成都大学,2023.)公开杂质b(即杂质1)、杂质c(即杂质2)、杂质f(即杂质8)、杂质g(即杂质6)、杂质tm-3(即杂质5)。但未有现有技术公开杂质3和杂质7。6、现有技术也公开多种杂质检测方法：吲哚布芬国家药品标准(ws1-(x-069)-2006z)公开有关物质的检测方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-三乙胺(65:35:0.5)(用磷酸调节ph值至3.0)为流动相。但是，该检测方法不适用于同时分离检测多种工艺杂质。7、专利cn114594168a公开一种吲哚布芬杂质的检测方法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节ph值至4.0)为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱。可同时分离检测4种杂质：ydbf-im-a(即杂质2)、ydbf-im-c、ydbf-im-f(即杂质8)、ydbf-im-i。8、专利cn114624339a公开一种吲哚布芬杂质的检测方法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节ph值至3.0)为流动相a，以0.1％磷酸乙腈为流动相b，进行梯度洗脱。可同时分离检测7种杂质：ydbf-im-a(即杂质2)、ydbf-im-b(即杂质6)、ydbf-im-c、ydbf-im-e、ydbf-im-f(即杂质8)、ydbf-im-h、ydbf-im-i。9、但是，还未有现有技术公开杂质3或杂质7的分离检测方法，也未给出相关技术启示。10、综上所述，如何优化吲哚布芬现有检测方法，以达到同时分离检测国家药品标准要求的杂质2、锌粉还原反应易产生的副产物杂质3和杂质6；更进一步地，还能同时分离检测粗品纯化反应易产生的副产物杂质7和杂质8等杂质，是本领域技术人员尚未解决的技术难题。技术实现思路1、本发明要解决的技术问题在于：提供一种吲哚布芬杂质检测方法，同时分离检测杂质2、杂质3、杂质6等多种杂质，用于吲哚布芬原料药与制剂质量控制。2、上述要解决的技术问题，通过以下技术方案实现：3、本发明提供了一种吲哚布芬杂质检测方法，采用高效液相色谱法，其中，色谱柱采用以酰胺基烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相a采用磷酸盐缓冲溶液，流动相b采用含四氢呋喃的混合溶剂。4、本发明针对色谱柱进行了优化：5、优选的，色谱柱为酰胺基十六烷基硅烷键合硅胶柱或酰胺基十八烷基硅烷键合硅胶柱。6、更优选的，色谱柱为zorbax bonus-rp 4.6mm×250mm，3.5μm、zorbax bonus-rp4.6mm×150mm，3.5μm，或rp 4.6×150mm，5μm或效能相当的色谱柱。7、最优选的，色谱柱为zorbax bonus-rp 4.6mm×250mm，3.5μm。8、色谱柱填充剂为酰胺基烷基硅烷键合硅胶，在长烷基链中嵌入的极性酰胺基团为分离脱羧杂质3的关键基团，本领域技术人员可以常规筛选色谱柱具体厂家、规格以满足实际检测的需求。9、本发明还针对流动相进行了优化：10、本发明所述的流动相a优选为磷酸盐缓冲溶液，包括但不限于磷酸二氢钾缓冲溶液、磷酸二氢钠缓冲溶液、磷酸二氢铵缓冲溶液中的一种或多种。11、更优选的，流动相a为磷酸二氢钾缓冲溶液。12、优选的，流动相a的浓度为10～25mmol。13、优选的，流动相a的ph为2～4。14、更优选的，流动相a的ph为2.5～3.2。15、最优选的，流动相a的ph为2.8～3.0。16、本发明所述的流动相b，其混合溶剂中除含四氢呋喃外，还优选包括甲醇、乙腈中的一种或多种。17、更优选的，流动相b为甲醇-乙腈-四氢呋喃、甲醇-四氢呋喃或乙腈-四氢呋喃。18、最优选的，流动相b为乙腈-四氢呋喃。19、优选的，流动相b中四氢呋喃的含量为15～40％。20、更优选的，流动相b中四氢呋喃的含量为35～40％。21、在流动相b中加入四氢呋喃调节流动相接受质子的能力，是分离酰胺基烷基硅烷键合硅柱条件下杂质2的关键因素，本领域技术人员可以选择甲醇和/或乙腈等常规液相色谱有机溶剂与四氢呋喃形成混合溶剂以满足实际检测的需求。22、本发明还针对流动相的洗脱梯度进行了优化：23、优选的，流动相采用梯度洗脱，包括如下梯度：24、25、更优选的，包括如下梯度：26、27、28、最优选的，包括如下梯度：29、30、本发明还针对柱温进行了优化：31、优选的，柱温为30～50℃。32、更优选的，柱温为40～50℃。33、最优选的，柱温为40℃。34、本发明还针对检测波长进行了优化：35、优选的，检测波长为208～248nm。36、更优选的，检测波长为228nm。37、本发明还针对流速进行了优化：38、优选的，流速为0.8～1.2ml/min。39、更优选的，流速为1.0ml/min。40、本发明还提供了一种如前所述的吲哚布芬杂质检测方法在吲哚布芬原料药或制剂的质量控制中的应用。41、具体而言，可用于分离检测杂质1～8中的全部或部分吲哚布芬杂质。42、前述的吲哚布芬杂质，包括但不限于43、中的一种或多种。44、优选的，本发明提供的吲哚布芬杂质检测方法，可用于同时至少分离杂质1～8这8个杂质中的三个，即至少分离杂质2、杂质3和杂质6。45、更优选的，本发明提供的吲哚布芬杂质检测方法，还可用于同时至少分离杂质1～8这8个杂质中的四个、五个、六个、七个或八个(且四个、五个、六个、七个、八个杂质中必须包含杂质2、杂质3和杂质6)。其举例未包括但不限于：当同时分离四个杂质时，除杂质2、杂质3和杂质6外，剩余的一个杂质可以任选自杂质1、4、5、7、8中的一个；同理，当同时分离五个杂质时，除杂质2、杂质3和杂质6外，剩余的两个杂质可以任选自杂质1、4、5、7、8中的两个；同理，当同时分离六个杂质时，除杂质2、杂质3和杂质6外，剩余的三个杂质可以任选自杂质1、4、5、7、8中的三个；同理，当同时分离七个杂质时，除杂质2、杂质3和杂质6外，剩余的四个杂质可以任选自杂质1、4、5、7、8中的四个；同理，当同时分离八个杂质时，即为杂质1～8。46、进一步，作为要求更高的内部质控标准，也可按照同时分离杂质2、杂质3、杂质6和杂质7，或同时分离杂质2、杂质3、杂质6、杂质7和杂质8来施行。47、相比于现有技术，本发明提供的吲哚布芬杂质检测方法，有益效果在于：48、1)本发明提供的吲哚布芬杂质检测方法，采用酰胺基烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，相比于cn114594168a和cn114624339a采用的以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，提高杂质3与杂质6的分离度，使两者能被同时分离检测。49、2)本发明提供的吲哚布芬杂质检测方法，通过优化流动相b为含四氢呋喃的混合溶剂，解决酰胺基烷基硅烷键合硅胶柱中主峰和杂质2难以有效分离的问题。50、亦因此，上述方案采用特定的色谱柱填充剂、流动相b，就能起到同时分离检测杂质2(药典规定必检杂质)、杂质3和杂质6的技术效果，解决了本发明的首要技术难题。51、进一步，通过优化流动相b中四氢呋喃的含量为15～40％，可进一步改善主峰和杂质2的分离效果。52、3)本发明提供的吲哚布芬杂质检测方法，通过优化色谱柱种类、流动相b种类和梯度洗脱，可同时分离检测吲哚布芬杂质2、杂质3、杂质6、杂质7和杂质8；53、在此基础上，进一步优化ph范围为2.5～3.2(甚至ph为2.8～3.0)等条件，可进一步同时分离检测杂质1、杂质4和杂质5等杂质，均可用于吲哚布芬原料药和制剂质量控制。当前第1页12当前第1页12