一种抗风桐化学成分的检测方法

本发明涉及化学成分分析，具体涉及一种抗风桐化学成分的检测方法。

背景技术：

1、抗风桐pisonia grandis l.别名白避霜花、麻枫桐或无刺藤，为紫茉莉科腺果藤属植物，为常绿无刺乔木，产印度、斯里兰卡、马尔代夫、马达加斯加、马来西亚、印度尼西亚、澳大利亚东北部及太平洋岛屿也有。抗风桐是中国西沙群岛自然森林群落的第一优势种，在很多岛屿上都有分布，其中在东岛和永兴岛生长最为茂盛。抗风桐木材结构疏松，材质不佳，因受风影响，枝条很少，叶常丛生，当地用其叶作为猪饲料。抗风桐生长速度快，断枝可再殖，且耐盐碱和干旱，在海岸固沙、调节海岛气候以及海岛植被恢复中发挥着重要作用。人们在对抗风桐的化学成分和药理活性方面的研究中，发现抗风桐中含有生物碱类、黄酮类、酚类、丹宁酸、草酸、尿囊素等化学成分，具有抗糖尿病、抗炎、镇痛、治疗炎症、促进创伤愈合、治溃疡等作用，具有较好的药用价值。高等植物的天然产物一直是人类获得药物的重要来源，天然药物在保障人类健康方面所发挥的作用愈加得到人们的重视。中药资源是我国中医药事业发展的基础，采用创新的理论和方法寻找和发现重要新资源是中药资源可持续利用研究的热点和重点。

2、为了进一步研究抗风桐的化学成分，充分挖掘抗风桐各部位的药用价值，本研究采用uplc-q-tof-ms技术对抗风桐的成分进行分析，以期丰富抗风桐的化学成分，并为抗风桐的药效物质基础的阐明提供参考，为其进一步的提取分离和药理作用研究提供科学参考依据。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种抗风桐化学成分的检测方法，能够有效分离和鉴定抗风桐中的化学成分。

2、本发明的第一个方面是提供一种抗风桐化学成分的检测方法，以抗风桐叶为检测对象，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定；

3、超高效液相色谱的条件为：

4、色谱柱为100mm×2.1mm，1.8μm waters acquity uplc hss t3色谱柱；

5、柱温：38-42℃；

6、体积流量：0.2-0.4ml/min；

7、流动相：流动相a为体积浓度0.05-0.15％甲酸水溶液；流动相b为体积浓度0.005-0.015％甲酸乙腈溶液；

8、洗脱梯度如下：

9、

10、其中，在采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱进行测定前，将检测对象采用60％-80％乙醇提取，优选采用70％色谱乙醇提取。

11、优选地，所述柱温为40℃。

12、优选地，所述体积流量为0.25-0.35ml/min，更优选为0.3ml/min。

13、优选地，流动相a为流动相a为体积浓度0.08-0.12％甲酸水溶液，更优选为体积浓度0.1％甲酸水溶液。

14、优选地，流动相b为体积浓度0.008-0.012％甲酸乙腈溶液，更优选为体积浓度0.01％甲酸乙腈溶液。

15、其中，质谱仪的质谱条件为：采用电喷雾离子源(esi)，分别在正离子和负离子条件下，以continuum模式采集mse数据。

16、优选地，质谱仪的质谱条件还包括：扫描范围m/z 50-1500da，低能量碰撞电压(ce)为6v，高能量碰撞电压为10-45v；正离子模式的毛细管电压为3.0kv，负离子模式的毛细管电压为2.0kv，锥孔电压为40v，锥孔气体流量50l/hr。

17、优选地，质谱仪的质谱条件还包括：扫描时间0.3s，检测时间22min；离子源温度为90-110℃，优选为100℃；辅助喷雾电离与去溶剂气体为高纯度n2，去溶剂化温度450℃，去溶剂化气体流量600l/hr。

18、采用本发明的检测方法能够从抗风桐中鉴定出50个化合物，包括20个黄酮类成分、10个酚酸类成分、9个长链脂肪酸类成分、6个苯丙素类成分、4个环烯醚萜苷类成分、1个木质素类成分。

19、本发明的第二个方面是提供一种抗风桐化学成分的分离方法，以抗风桐叶为分离对象，采用超高效液相色谱进行分离；超高效液相色谱的条件为：

20、超高效液相色谱的条件为：

21、色谱柱为100mm×2.1mm，1.8μm waters acquity uplc hss t3色谱柱；

22、柱温：38-42℃；

23、体积流量：0.2-0.4ml/min；

24、流动相：流动相a为体积浓度0.05-0.15％甲酸水溶液；流动相b为体积浓度0.005-0.015％甲酸乙腈溶液；

25、洗脱梯度如下：

26、

27、其中，在采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱进行测定前，将检测对象采用60％-80％乙醇提取，优选采用70％色谱乙醇提取。

28、优选地，所述柱温为40℃。

29、优选地，所述体积流量为0.25-0.35ml/min，更优选为0.3ml/min。

30、优选地，流动相a为流动相a为体积浓度0.08-0.12％甲酸水溶液，更优选为体积浓度0.1％甲酸水溶液。

31、优选地，流动相b为体积浓度0.008-0.012％甲酸乙腈溶液，更优选为体积浓度0.01％甲酸乙腈溶液。

32、采用本发明的分离方法，能够从爪耳木根中分离出52个化合物。

33、本发明的第三个方面是提供一种化合物的制备方法，所述化合物为2-hydroxyhenicosanoic acid、和/或2,6-anhydro-1-o-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)-d-mannitol、和/或3-hydroxy-4-{[(5xi)-4-o-methyl-d-xylo-hexopyranosyl]oxy}benzoicacid、和/或ulmoside、和/或hexopyranoside,1a,1b,2,5a,6,6a-hexahydro-1a-(hydroxymethyl)-6-methoxyoxireno[4,5]cyclopenta[1,2-c]pyran-2-yl6-o-pentopyranosyl-、和/或4-formyl-2-methoxyphenyl hexopyranoside、和/或isorhamnetin-3-o-glucoside、和/或13-oxo-3,6,9,12-tetraoxatetradec-1-ylacetate、和/或benzoic acid,2-hydroxy-5-[[2-o-[(2s,3r,4r)-tetrahydro-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)-2-furanyl]-beta-d-xylopyranosyl]oxy]-、和/或3,4,5-trimethoxyphenyl 6-o-beta-l-glucopyranosyl-beta-l-glucopyranoside、和/或epicatechin、和/或β-hydroxyacteoside、和/或[(2s,3s,4s,5s)-2,5-bis(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-4-(hydroxymethyl)tetrahydro-3-furanyl]methyl beta-d-glucopyranoside、和/或2h-1-benzopyran-2-one,4-methyl-7-(beta-d-xylopyranosyloxy)-、和/或methyl(1s,4ar,7ar)-1-{[(2xi)-6-o-(cyclopropylcarbonyl)-alpha-d-arabino-hexopyranosyl]oxy}-4a-hydroxy-7-(hydroxymethyl)-1,4a,5,7a-tetrahydrocyclopenta[c]pyran-4-carboxylate、和/或(1s,4ar,5s,7as)-5-({(4xi)-6-deoxy-4-o-[(2e)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-2-propenoyl]-beta-d-ribo-hexopyranosyl}oxy)-7-(hydroxymethyl)-1,4a,5,7a-tetrahydrocyclopenta[c]pyran-1-yld-glucopyranoside、和/或pectolinarigenin、和/或2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl(4xi)-2-o-acetyl-3-o-(6-deoxy-d-idopyranosyl)-4-o-[(2z)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propenoyl]-beta-d-ribo-hexopyranoside、和/或2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-4-oxo-4h-chromen-3-yl6-o-(6-deoxy-alpha-l-mannopyranosyl)-d-glucopyranoside、和/或apiin、和/或acteoside、和/或isoacteoside、和/或(4as,5r,6s)-1-oxo-5-vinyl-4,4a,5,6-tetrahydro-1h,3h-pyrano[3,4-c]pyran-6-yl4-o-acetyl-6-o-[3-(d-glucopyranosyloxy)-2-hydroxybenzoyl]-d-glucopyranoside、和/或5,7-dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-4-oxo-4h-chromen-3-yl4-o-(3-o-acetyl-6-deoxy-alpha-d-mannopyranosyl)-beta-l-glucopyranoside、和/或cirsilineol、和/或6-hydroxy-10-(6-hydroxy-1,3-benzodioxol-5-yl)furo[3',4':6,7]naphtho[1,2-d][1,3]dioxol-9(7h)-one、和/或5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4-oxo-4h-chromen-3-yl(5xi)-6-o-(4-o-acetyl-6-deoxy-l-mannopyranosyl)-l-xylo-hexopyranoside、和/或5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-6,7-dimethoxy-4-oxo-4h-chromen-3-yl l-galactopyranoside、和/或limocitrin、和/或isorhamnetin、和/或5-acetamido-1,3-phenylene di(2-furoate)、和/或(3,4,5-trihydroxytetrahydro-2-furanyl)methyl(2z)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-(2-methoxy-4-{(1e)-3-oxo-3-[(3,4,5-trihydroxytetrahydro-2-furanyl)methoxy]-1-propen-1-yl}phenoxy)acrylate(non-preferred name)、和/或eupatilin、和/或(+)-tanikolide、和/或farresol、和/或eupatorin、和/或quercetin 3,4'-dimethyl ether、和/或casticin、和/或3,5-dihydroxy-6,7,8-trimethoxyflavone、和/或irisflavone b、和/或5,7-dihydroxy-3,6,4'-trimethoxyflavone、和/或benzoic acid,2-(acetyloxy)-,anhydride、和/或(12e)-9-hydroxy-10-oxo-12-octadecenoic acid、和/或quercetintetramethyl ether、和/或13-hydroxy-10-oxooctadecenoic acid、和/或beta-dimorphecolic acid、和/或3,5,7-trimethoxy-3',4'-methylenedioxyflavone、和/或10-ketostearic acid、和/或8-(5-hexyl-2-furyl)octanoic acid、和/或12-hydroxy-9e-octadecenoic acid，以抗风桐叶为分离对象，采用超高效液相色谱进行分离。

34、超高效液相色谱的条件为：

35、色谱柱为100mm×2.1mm，1.8μm waters acquity uplc hss t3色谱柱；

36、柱温：38-42℃；

37、体积流量：0.2-0.4ml/min；

38、流动相：流动相a为体积浓度0.05-0.15％甲酸水溶液；流动相b为体积浓度0.005-0.015％甲酸乙腈溶液；

39、洗脱梯度如下：

40、

41、其中，在采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱进行测定前，将检测对象采用60％-80％乙醇提取，优选采用70％色谱乙醇提取。

42、优选地，所述柱温为40℃。

43、优选地，所述体积流量为0.25-0.35ml/min，更优选为0.3ml/min。

44、优选地，流动相a为流动相a为体积浓度0.08-0.12％甲酸水溶液，更优选为体积浓度0.1％甲酸水溶液。

45、优选地，流动相b为体积浓度0.008-0.012％甲酸乙腈溶液，更优选为体积浓度0.01％甲酸乙腈溶液。

46、本发明采用超高效液相色谱结合特定的流动相和洗脱程序能够从抗风桐叶中分离出52个化合物，进一步采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪的分析方法，能够快速地从抗风桐叶中鉴定出50个化合物(包括20个黄酮类成分、10个酚酸类成分、9个长链脂肪酸类成分、6个苯丙素类成分、4个环烯醚萜苷类成分、1个木质素类成分)，结果表明，抗风桐富含黄酮类及酚酸类成分，而且还含有苯丙素类成分，以及环烯醚萜苷类等成分，这些化学物质都有极强的生物活性，表明抗风桐具有较好的药用潜力，可以在今后加大对其的研发和利用。本发明丰富了抗风桐的化学成分，并为其药理活性及开发利用研究奠定基础，同时提供了50个化合物的新的制备方法，丰富了化合物的来源。