一种细胞染液及其应用的制作方法

本发明属于生物，涉及一种细胞染液及其应用。

背景技术：

1、目前，0.4％台盼蓝染液是被广泛使用的细胞活力测定及细胞染色试剂，染色效果较好。然而，有证据表明台盼蓝对人体及细胞具有轻微毒性，若使用台盼蓝染色细胞的时间过长(超过15min)，原本台盼蓝染色后透亮的活细胞也能摄取染料被染成蓝色，影响活力测定的结果。

2、2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考中，台盼蓝在2b类致癌物清单中。吸入或接触台盼蓝也可能会引起呼吸道刺激，皮肤刺激以及眼睛刺激，台盼蓝的安全性和毒性令人担忧。

3、因此，从工作人员的健康角度出发，我们迫切需要一种染色效果能与0.4％台盼蓝染液相当，且对人体健康危害小的新的细胞活力测定方法及染色试剂。而本研究中所提到的赤藓红b被实际应用时，我们发现其染色性能与0.4％台盼蓝染液效果相当；赤藓红b作为食品添加剂的一种，被广泛用于食品发酵、食品烘焙、雪糕制作等，同时，在药品生产及化妆品领域也有应用。相对于目前常用的台盼蓝染液，其使用安全性更高；此外，使用赤藓红b染色液染色时，不需要孵育，染色过程快速便捷，相比台盼蓝染色，背景更加清晰，更容易区分和确认死活细胞，且更少出现错误的假阴性及假阳性的结果，染色结果更准确。

4、综上所述，亟需提供一种背景更加清晰，更容易区分和确认死活细胞的细胞染液及方法。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种细胞染液及其应用，本发明的细胞染液和传统台盼蓝染液相比安全性更高，使用赤藓红b染色液染色时，不需要孵育，染色过程快速便捷，相比台盼蓝染色，背景更加清晰，更容易区分和确认死活细胞，且更少出现错误的假阴性及假阳性的结果，染色结果更准确。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供了一种细胞染液，所述细胞染液包括赤藓红b。

4、本发明的细胞染液和传统台盼蓝染液相比安全性更高，使用赤藓红b染色液染色时，不需要孵育，染色过程快速便捷，相比台盼蓝染色，背景更加清晰，更容易区分和确认死活细胞，且更少出现错误的假阴性及假阳性的结果，染色结果更准确。

5、优选地，所述细胞染液中赤藓红b的质量百分比为0.01～0.1％。

6、优选地，所述细胞染液中细胞染液还包括溶剂。

7、优选地，所述溶剂包括磷酸盐缓冲液、生理盐水或milli-q超纯水中任意一种。

8、第二方面，本发明提供了第一方面所述的细胞染液在制备细胞活力检测制品中的应用。

9、第三方面，本发明提供了一种细胞活力检测方法，所述细胞活力检测方法包括：细胞悬液与第一方面所述的细胞染液混匀后置于光学显微镜下根据呈现颜色的不同判断细胞死活并计算细胞活力。

10、优选地，所述判断细胞死活的方法包括根据光学显微镜下观察到的细胞颜色，所述细胞为红色或者粉红色时为死细胞，所述细胞为无色透明时为活细胞。

11、优选地，所述细胞活力为活细胞个数占总细胞个数的百分比。

12、优选地，所述细胞包括：cho细胞、vero细胞、hek293细胞或pg4细胞中任意一种或至少两种的组合。

13、第四方面，本发明提供了第一方面所述的细胞染液或第三方面所述的细胞活力检测方法在检测细胞活力中的应用。

14、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

15、(1)0.01～0.1％赤藓红染液的染色效果与0.4％台盼蓝染液相当，用其对cho、vero、hek293、pg4四种细胞进行活力测定并与台盼蓝染液比对，发现两者无论是细胞活率还是活细胞密度均没有显著性差异，证明两者的染色效果相当；

16、(2)0.4％台盼蓝染液是目前国际所通用的细胞染液及活力测定试剂，但因其能与血清蛋白紧密结合，而细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，所以残留的血清蛋白会导致较暗的染色背景，而赤藓红b染液的背景则较为清晰，被染色的细胞也更清晰，更容易区分和确认死活细胞；

17、(3)和传统台盼蓝染液相比安全性更高。

技术特征：

1.一种细胞染液，其特征在于，所述细胞染液包括赤藓红b。

2.根据权利要求1所述的细胞染液，其特征在于，所述细胞染液中赤藓红b的质量百分比为0.01～0.1％。

3.根据权利要求1或2所述的细胞染液，其特征在于，所述细胞染液中细胞染液还包括溶剂。

4.根据权利要求3所述的细胞染液，其特征在于，所述溶剂包括磷酸盐缓冲液、生理盐水或milli-q超纯水中任意一种。

5.权利要求1-4中任一项所述的细胞染液在制备细胞活力检测制品中的应用。

6.一种细胞活力检测方法，其特征在于，所述细胞活力检测方法包括：细胞悬液与权利要求1-4中任一项所述的细胞染液混匀后置于光学显微镜下根据呈现颜色的不同判断细胞死活并计算细胞活力。

7.根据权利要求6所述的细胞活力检测方法，其特征在于，所述判断细胞死活的方法包括根据光学显微镜下观察到的细胞颜色，所述细胞为红色或者粉红色时为死细胞，所述细胞为无色透明时为活细胞。

8.根据权利要求6或7所述的细胞活力检测方法，其特征在于，所述细胞活力为活细胞个数占总细胞个数的百分比。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的细胞活力检测方法，其特征在于，所述细胞包括：cho细胞、vero细胞、hek293细胞或pg4细胞中任意一种或至少两种的组合。

10.权利要求1-4中任一项所述的细胞染液或权利要求6-9中任一项所述的细胞活力检测方法在检测细胞活力中的应用。

技术总结
本发明公开了一种细胞染液及其应用。所述细胞染液包括赤藓红B。本发明的细胞染液和传统台盼蓝染液相比安全性更高，使用赤藓红B染色液染色时，不需要孵育，染色过程快速便捷，相比台盼蓝染色，背景更加清晰，更容易区分和确认死活细胞，且更少出现错误的假阴性及假阳性的结果，染色结果更准确。

技术研发人员：邱佳俊,孔令帅,施磊,童涌
受保护的技术使用者：苏州药明检测检验有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12