一种用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液及其制备方法和应用与流程

本发明涉及体外诊断试剂，具体涉及一种用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、人偏肺病毒(hmpv)属副黏病毒科肺病毒亚科。大部分人偏肺病毒感染发生在儿童期，可引起广泛的呼吸道疾病，常伴有高热、肌痛。诊断通常依靠临床表现，也可以通过实验室检查来确诊。

2、免疫层析技术是一种简便、快速的诊断方法，以胶体金纳米颗粒作为标志物，借助抗原抗体反应，在免疫层析试纸条上完成检测过程。免疫层析技术具备操作简便、检测快速、成本低廉、特异性强、方便运输和携带、使用安全等特点，广泛应用于临床诊断、食品安全、药物检测、环境污染等多种领域。

3、抗原免疫层析检测法是一种可以快速检测人偏肺病毒的方法。但目前检测人偏肺病毒的抗原免疫层析检测法有如下缺陷：

4、1、人偏肺病毒抗原稀释后(即阳性质控品，阳性质控品是免疫层析产品配套的组分，也是用户用于评估免疫层析产品有效性的关键材料)稳定性差，需要放置在-80℃保存，解冻后室温放置免疫活性迅速降低，有效期仅大概1个小时；阳性质控品对运输和保存条件要求严苛，偏远地区甚至无法有效送达，且在测试中无法保证结果的有效性，极大地限制了人偏肺病毒抗原免疫层析产品的推广使用。

5、2、目前常规配方抗原稀释液虽能改善人偏肺病毒抗原稀释后稳定性，但对胶体金的退白有明显不利影响(试纸条在规定的时间内(一般是15分钟)，仍然残留红色痕迹，整体感官不洁净，影响对结果的判读)，不利于弱阳性样本的检出。

技术实现思路

1、本发明提供了一种用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液及其制备方法和应用，以解决现有技术的不足。

2、本发明通过以下方案予以实现：

3、一种用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，包括以下组分：

4、

5、余量为去离子水；

6、所述用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液ph为7.0～8.5。

7、进一步地，还包括0.1～0.3wt％的防腐剂。

8、更进一步地，所述防腐剂选自proclin300、proclin950或叠氮化钠。

9、上述用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液的制备方法，包括以下制备步骤，以1l体系为基准：

10、s1、制备tris-hcl缓冲液，包括如下步骤：

11、(1)、称取配方量的tris粉末，加入800ml去离子水，充分搅拌均匀；

12、(2)、往上述溶液中加入浓盐酸，调节溶液的ph至7.0～8.5；

13、(3)、用去离子水定容至900ml，即得tris-hcl缓冲液；

14、s2、称取配方量的二氯化钙，加入50ml去离子水，充分搅拌均匀，即得二氯化钙溶液；

15、s3、向上述tris-hcl缓冲液中加入配方量的二氯化钙溶液、牛血清白蛋白、甘油、曲拉通x-100、维生素c，充分搅拌均匀，且避免气泡产生，加入浓盐酸，调节溶液的ph至7.0～8.5，再用去离子水定容到1000ml；

16、s4、用0.22μm滤膜过滤后，即得用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，于2～8℃保存。

17、上述用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液的制备方法，包括以下制备步骤，以1l体系为基准：

18、s1、制备tris-hcl缓冲液，包括如下步骤：

19、(1)、称取配方量的tris粉末，加入800ml去离子水，充分搅拌均匀；

20、(2)、往上述溶液中加入浓盐酸，调节溶液的ph至7.0～8.5；

21、(3)、用去离子水定容至900ml，即得tris-hcl缓冲液；

22、s2、称取配方量的二氯化钙，加入50ml去离子水，充分搅拌均匀，即得二氯化钙溶液；

23、s3、向上述tris-hcl缓冲液中加入配方量的二氯化钙溶液、牛血清白蛋白、甘油、曲拉通x-100、维生素c、防腐剂，充分搅拌均匀，且避免气泡产生，加入浓盐酸，调节溶液的ph至7.0～8.5，再用去离子水定容到1000ml；

24、s4、用0.22μm滤膜过滤后，即得用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，于2～8℃保存。

25、上述用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液在抗原免疫层析检测人偏肺病毒中的应用。

26、本发明中tris-hcl缓冲液作用是为抗原稀释液体系提供稳定的ph环境。二氯化钙作用是结合人偏肺病毒抗原，模拟生理环境，维持蛋白的空间结构。牛血清白蛋白作用是降低人偏肺病毒抗原的非特异性吸附，形成蛋白复合物，维持稳定性。甘油作用是作为共溶剂，稳定人偏肺病毒抗原表面非极性区域。曲拉通x-100作用是维持人偏肺病毒抗原的整体结构，避免三维结构的变化。维生素c作用是降低抗原稀释液中溶解氧对人偏肺病毒抗原和牛血清白蛋白的氧化作用。防腐剂作用是避免微生物滋生。去离子水提供必须的水环境。

27、本发明的有益效果为：

28、一、本发明抗原稀释液使得人偏肺病毒抗原在稀释后稳定性明显改善，室温保存24小时降解率明显降低；同时降低抗原稀释液中成分对免疫层析技术中胶体金退白的不良影响(实施例1降解率为12.73％，退白率为95.63％)。本发明抗原稀释液可改善人偏肺病毒抗原体外诊断检测的稳定性，提高抗原检测的准确性，具有较高的实际应用价值。

29、二、人偏肺病毒抗原的稳定性保持需要抗原稀释液多种成分的协同作用，本发明限定了抗原稀释液的组成成分和各成分的浓度范围，在不影响胶体金退白的前提下，维持人偏肺病毒抗原室温条件下的稳定性，实现了如下目标：

30、1、简化人偏肺病毒抗原免疫层析阳性质控品的运输、保存条件，使用本发明的抗原稀释液的阳性质控品，使用条件由-80℃保存、运输、取出后室温下1个小时内有效调整为2～8℃冷藏运输7天有效、-20℃下保存346天有效、取出后室温24小时有效，有利于推广；

31、有效期计算公式(由阿伦尼乌斯公式推导)为：

32、

33、t为特定温度下的有效期，

34、e为自然对数，

35、eα为实验活化能，一般可视为与温度无关的常数，生物制品为19.5kcal/molr为摩尔气体常数，取1.98cal/mol/k，

36、t为特定温度的华氏数值，单位为k，

37、t25为25℃的华氏数值，取298k。

38、2、提高人偏肺病毒抗原检测的准确性，避免退白不良导致结果的误判，有利于弱阳性样本的检出。

39、三、本发明抗原稀释液能够提高人偏肺病毒抗原的稳定性，各组份以不同的方式共同起到稳定人偏肺病毒抗原的作用，二氯化钙通过稳定人偏肺病毒抗原的结构、牛血清白蛋白通过与人偏肺病毒抗原可逆结合、甘油通过降低稀释液的极性、曲拉通x-100通过维持人偏肺病毒抗原整体结构、维生素c通过降低氧化作用。

技术特征：

1.一种用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，其特征在于，包括以下组分：

2.根据权利要求1所述的用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，其特征在于，还包括0.1～0.3wt％的防腐剂。

3.根据权利要求2所述的用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，其特征在于，所述防腐剂选自proclin300、proclin950或叠氮化钠。

4.权利要求1所述的用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤，以1l体系为基准：

5.权利要求2或3所述的用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤，以1l体系为基准：

6.权利要求1或2或3所述的用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液在抗原免疫层析检测人偏肺病毒中的应用。

技术总结
本发明公开一种用于免疫层析检测的人偏肺病毒抗原稀释液，包括以下组分：10～50mM Tris‑HCl缓冲液，2mM～7.5mM二氯化钙，0.25～1.5wt％牛血清白蛋白，0.5～8.5wt％甘油，0.5～2wt％曲拉通X‑100，0.01～0.025wt％维生素C，余量为去离子水。本发明还公开了其制备方法和应用。本发明抗原稀释液使得人偏肺病毒抗原在稀释后稳定性明显改善，室温保存24小时降解率明显降低；同时降低抗原稀释液中成分对免疫层析技术中胶体金退白的不良影响。本发明抗原稀释液可改善人偏肺病毒抗原体外诊断检测的稳定性，提高抗原检测的准确性，具有较高的实际应用价值。

技术研发人员：张亚北,张虻
受保护的技术使用者：杭州翎创生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17