一种含壬二酸的外用组合物体外透皮释放的评价方法与流程

本发明涉及一种含壬二酸的外用组合物体外透皮试验的方法，具体地，涉及采用franz扩散池法对含壬二酸的外用组合物体外透皮释放进行评估的方法。

背景技术：

1、壬二酸，分子式为hooc(ch2)7-cooh，研究表明其对痤疮丙酸杆菌有很好的抑制效果，因此被用作为活性药物组分即api(active pharmaceutical ingredient)加入到不少处方药以及化妆品中，用于治疗痤疮等。目前，已被美国fda批准上市的含有壬二酸的处方药产品有凝胶和乳膏。此外，壬二酸还能有效阻断脂肪酸生成，也能减缓角质细胞的生长、阻断黑色素的形成，可预防斑点形成，降低黑色素沉着。由于壬二酸的美白及祛除色斑等效果，近年来，壬二酸也被广泛应用在美白和祛斑类化妆品中。

2、这些含有壬二酸的药物和化妆品多为皮肤局部施用组合物，属于外用制剂。壬二酸微溶于水(在25度下，0.24g/100g水)，透皮释放差，常规方法难以检测。因此，需要开发一种壬二酸的透皮性能检测方法。

3、体外透皮试验可以模拟外用制剂或化妆品在生理条件下的透皮过程，能直观的评价药物皮肤透过量和透皮速率，因此，可以反映外用制剂的透皮吸收情况，为处方开发、临床应用和质量控制提供依据。体外透皮试验是采用离体皮肤(动物、人或人造皮肤)，结合特定的分析方法，动态测量给药一定时间内透过皮肤的药量和透过速率，考察药物的皮肤渗透行为。目前，体外透皮试验常用的方法包括franz扩散池法、浸没池法和流通池法。其中franz扩散池是目前主流的方法，动物皮肤是常用的皮肤模型，目前多为使用离体大鼠腹部皮肤或离体巴拿马香猪的皮肤。但是，壬二酸在动物皮肤中透过率低，常规液相、液相色谱质谱(lc-ms)方法无法检测，而且动物皮肤常常因伦理、贮藏等问题而限制其应用。

4、cn202310285358.2公开了一种用于壬二酸透皮检测的方法，包括在液质(lc-ms)检测前，采用偶联量子点的分子印迹聚合物对透皮处理样品进行前处理。

5、上述专利实施例中采用巴马小香猪皮肤作为离体皮肤模型，壬二酸透过率较低，采用液质检测响应差或没有峰，需在液质检测前，采用偶联量子点的分子印迹聚合物对透皮处理样品进行前处理，该方法前处理复杂，可操作性差，且质谱仪较昂贵，可及性不高。

6、cn115219613a公开了一种化妆品中壬二酸和壬二酰二甘氨酸钾的检测方法，包括如下步骤：

7、步骤一，标准系列溶液配制：分别精密称取壬二酸和壬二酰二甘氨酸钾标准物质于量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为壬二酸和壬二酰二甘氨酸钾标准储备溶液，准确移取所述标准储备溶液，用甲醇定容，配制得到标准系列溶液；

8、步骤二，待测溶液制备：精密称取待测样品，加入氢氧化钠水溶液-甲醇溶液，涡旋处理，再加入氢氧化钠水溶液-甲醇溶液定容，50-60℃超声处理60-90min后，离心5-20min，作为待测溶液；

9、步骤三，将步骤一制得的标准系列溶液和步骤二制得的待测溶液，接至高效液相色谱系统进行检测。

10、所述待测溶液的具体制备方法为：称取待测样品0.20g置于50ml具塞比色管中，加氢氧化钠水溶液-甲醇溶液45ml，涡旋处理1min，再加氢氧化钠水溶液-甲醇溶液定容至50ml，60℃超声处理90min后，10000rpm离心5min，作为待测溶液。

11、高效液相色谱条件：

12、色谱柱：b362v1瑞典sveac8柱，250mm×4.6mm×5μm；或等效色谱柱；

13、柱温：30℃；

14、流动相：溶液a为磷酸盐缓冲溶液；溶液b为乙腈；梯度洗脱。

15、上述专利仅涉及壬二酸于化妆品中的含量检测，并未涉及壬二酸的透皮检测，该方法检测时间长，不适合体外透皮试验大量样品的检测。

16、目前未见有壬二酸制剂体外透皮试验方法的相关报道。

17、因此，需开发一种既能模拟透皮性能又能对壬二酸的透皮量进行精确测量的方便、快捷的壬二酸外用制剂的体外透皮释放评价方法，支持壬二酸处方开发并为临床应用和质量控制提供依据。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术课题

2、鉴于现有技术中未见壬二酸外用制剂体外透皮释放的评估方法，本发明的目的是提供一种方便、快捷的壬二酸外用制剂体外透皮释放的评估方法，为壬二酸体外制剂的处方开发、临床应用和质量控制提供依据。

3、解决技术课题的技术方案

4、本发明采用strat-mtm人工膜作为体外渗透模型，在franz扩散池中进行透皮试验，以ph 7.4磷酸盐缓冲液作为接收介质，用超高效液相色谱仪测定接收液中壬二酸的含量，计算壬二酸的体外透皮速率和累积透过量，从而评估含壬二酸的外用组合物体外透皮释放，本发明的评估方法为壬二酸的处方开发、临床应用和质量控制提供依据。

5、本发明包括如下技术方案。

6、本发明提供一种评价含壬二酸的外用组合物体外释放的方法，其特征在于，

7、采用franz扩散池法，并在扩散池装置中使用人工膜，

8、采用液相色谱-紫外可见检测器检测扩散池的接收液中壬二酸的含量，

9、计算壬二酸的透过速率和/或累积透皮药量。

10、本发明的方法中，所述接收液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的温度为33℃±1℃，所述磷酸盐缓冲液的ph为7.4±0.2。

11、本发明的方法中，所述franz扩散池的转速为400±40rpm，所述体外释放试验取样或补液体积为0.7±0.1ml。

12、本发明的方法中，液相色谱条件如下：色谱柱为c18反相色谱柱，流动相a为磷酸盐水溶液，流动相b为乙腈，采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序如下。

13、 时间(min) 流动相a(体积％) 流动相b(体积％) 0 90±2 10±2 0.5 90±2 10±2 3 55±5 45±5 3.1 90±2 10±2 5 90±2 10±2

14、本发明的方法中，所述流动相a的ph值为3.0±0.2。

15、所述流动相a可以是磷酸二氢钾水溶液和/或磷酸二氢钠水溶液。

16、本发明的方法中，优选所述梯度洗脱程序如下：

17、

18、

19、本发明的方法中，色谱条件优选为：

20、流动相的流速为0.4±0.2ml/min，和/或，

21、进样体积为5～20μl，和/或，

22、柱温为40±5℃，和/或，

23、检测波长为210±5nm。

24、本发明的方法中，所述外用组合物选自泡沫剂、乳膏剂、软膏剂、霜剂或喷雾剂。

25、本发明的方法中，所述人工膜可以是strat-mtm人工膜。

26、有益的技术效果

27、1.采用strat-mtm人工膜作为渗透屏障，用磷酸盐缓冲液作为接收介质，结合超高效液相色谱分析方法，可以快速高效地测定壬二酸透皮速率和累积透过量，方法简单快速，为壬二酸制剂的处方筛选和不同壬二酸产品的对比提供一种新的方法。

28、2.strat-mtm人工膜与人体皮肤的透皮效果相近，易获得且便于保存，方法可普及性高。