一种洛索洛芬钠及其制剂中遗传毒性杂质的分析方法与流程

本发明属于化学分析，具体涉及一种洛索洛芬钠及其制剂中遗传毒性杂质的分析方法。

背景技术：

1、洛索洛芬钠，化学名为2-[4-(2-氧代环戊烷-1-基甲基)苯基]丙酸钠，cas号为80382-23-6，分子式为c15h17o3·2h2o，分子量为304.32。洛索洛芬钠与临床上同类药物相比，其特点主要体现在：临床效果好，副作用小。另一类特点是适应症广，临床上可广泛用于类风湿性关节炎、腰痛、肩周炎、颈肩腕综合症等的抗炎镇痛、手术、外伤后及拔牙后的镇痛消炎和急性上呼吸道炎症的解热镇痛等。

2、目前洛索洛芬钠的合成方法较多，其中较为常见的合成路线，如下所示：

3、

4、在该合成路线中：2-(4-(溴甲基)苯基)丙酸（sm1）和2-(4-溴甲基苯基)丙酸甲酯（lsl-1）分别是洛索洛芬钠原料药合成的起始物料和中间体1，均含有卤代烃警示结构，为潜在基因毒性杂质。根据ich m7的指导原则，对潜在遗传毒性杂质进行危害性评估，可归属于第3类（即含有警示结构，但与原料药的结构无关，无突变性数据集），适用于ttc（毒理学关注阈值）算法制定其可接受限度。洛索洛芬钠为镇痛消炎用药，最大日服用量为180mg/天，日摄入量按1.5μg/天计算，杂质sm1、杂质lsl-1控制限度均为0.00083%。

5、目前在洛索洛芬钠的杂质检测方法中主要包括有高效液相色谱检测和液质联用检测两种方法。例如在公开号为cn115236255b“一种洛索洛芬钠有关物质检测方法”中是采用高效液相法，其流动相由加入磷酸调节ph值为2.3～2.7的磷酸水溶液和乙腈组成，并进行梯度洗脱；从其测试结果上来看，其对杂质m1（上述合成路线中的中间体1）的检测限为0.02504μg/ml（相当于0.005%），检测结果达不到遗传毒性杂质标准的要求。又如在公开号为cn110940744a“一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的检测方法”中采用了液质联用的方法进行检测，但是该方法中采用了哌啶作为衍生试剂，先将杂质a(相当于上述合成路线中的sm1)和杂质b进行衍生化，但是哌啶与杂质a或b的反应并不单一，哌啶中的氨基可以杂质a或b中的羧基发生反应，也可以与杂质a或b中的卤素发生氨解反应，所以其衍生产物可能并不唯一。更进一步而言，因为杂质a为溴代物，活性高于杂质b，故在整个分析过程中，采用杂质a作为对照，检测杂质a与杂质b的总量，这种杂质控制策略是极不严谨的；而且由于杂质b的活性低，存在杂质b不能衍生或者不能完全衍生的可能，且杂质a与杂质b在色谱图中是否在同一时间出峰、杂质b能否被检测出都是未知数，而这些都直接影响数据的可靠性及结果的准确性。而且在该专利中使用液质联用采用的是sim模式，m/z=248，该检测模式为单离子检测，专属性不强，尤其对于衍生之后的样品来说，很可能存在该分子量的其他物质干扰检测；因而该专利中方法的可行性和数据的准确性都是有待考究的。从该专利中溶剂的选择上来看，其使用了dmso做为溶剂，dmso也具有较强毒性，对环境及操作人员均不友好，且dmso由于其在低温下易凝固，较难气化，对色谱柱及液相-质谱设备可能存在不同程度的损伤，使其灵敏度降低，一般液质是不建议使用。从该专利的检测结果上来看；该专利所述检测方法对杂质a的检测限为7.3ppm，则推测其能准确定量的限度(定量限)约为24ppm，满足不了该杂质限度8.3ppm的检测要求（一般要求定量限小于限度的30%），故该方法只能对杂质进行定性考察而不能对其结果进行准确的定量。综上，为了保证洛索洛芬钠的安全性和质量可控性，开发一种方法简单，检测限低的洛索洛芬钠遗传毒性杂质的检测方法是很有必要的。

技术实现思路

1、针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种洛索洛芬钠及其制剂中遗传毒性杂质的分析方法，该检测方法中供试品溶液及对照品溶液采用常规试剂进行溶解及稀释，无需复杂的前处理，操作简单，对两种遗传毒性杂质的检测限达到了0.5ppm以下，定量限达到了2ppm以下，方法学验证试验表明可以实现对遗传毒性杂质的精准检测。

2、本发明提供了一种洛索洛芬钠及其制剂中遗传毒性杂质的分析方法，包括以下步骤：

3、s1、供试品溶液配制：供试品采用稀释剂配制成供试品溶液，其中稀释剂由乙腈和甲醇组成；

4、s2、对照品溶液配制：遗传毒性杂质首先采用乙腈配制成对照品贮备液，然后进一步采用步骤s1中的稀释剂稀释至所需浓度，作为对照品溶液；

5、s3、检测：将步骤s1的供试品溶液和步骤s2中的对照品溶液分别进行高效液相色谱-质谱串联检测，记录相关谱图；

6、其中：步骤s3中的质谱中扫描模式采用mrm模式。

7、本发明中的质谱采用mrm模式，分别采用一对离子对物质进行识别，专属性更强，增加了定性的准确性。

8、优选的，所述步骤s1中，样品为洛索洛芬钠原料药或含洛索洛芬钠的药物制剂。

9、优选的，所述步骤s1中，乙腈和甲醇的体积比为(75~85):(20~25)。

10、优选的，所述步骤s2中，遗传毒性杂质为杂质sm1和杂质lsl-1中的一种或两种；具体结构式如下：

11、。

12、作为优选，所述步骤s3中，液相色谱的测试条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂或效能相当的色谱柱；流动相为乙腈-(0.25~0.35)%甲酸水溶液，其体积比为(40-60):(40-60)，流速为0.3~0.5ml/min；柱温为35~45℃；洗脱方式采用等度洗脱，运行时间约26～30min，视杂质sm1和杂质lsl-1出峰时间进行阀切换至质谱检测。

13、作为优选，所述步骤s3中，质谱的测试条件为：电离方式：电喷雾正离子模式；离子喷雾电压：4.0kv；雾化器：氮气，50psi；碰撞气：氮气；干燥气：氮气，流速12~14l/min。

14、作为优选，所述步骤s3中，质谱的检测条件为：杂质sm1：母离子为243.1，子离子为197.0；杂质lsl-1：母离子为256.9，子离子为197.0；

15、碰撞电压：m/z 243.1/197.0为111v；m/z 256.1/197.0为105v；

16、碰撞能（ce）：m/z 243.1/197.0为10v；m/z 256.9/197.0为6v。

17、作为优选，该方法按外标法计算供试品中的遗传毒性杂质的含量。

18、本发明的有益效果：

19、1）本发明的方法中，洛索洛芬钠及空白溶液不干扰杂质的检测，两杂质sm1及lsl-1能有效分离，不受干扰，专属性好。

20、2）本发明的方法中，采集时长较为合理，不需要过长的平衡时间及采集时间。

21、3）本发明的方法中，流动相仅为乙腈、醋酸水溶液，试剂简单易得，流动相配制简单，样品前处理操作操作单，不需衍生，无需使用特殊试剂，所选试剂为常规试剂，较为绿色环保，所选色谱柱规格较为常见，性价比高。

22、4）本发明的方法从测试结果上而言，具有较高的灵敏度，能准确对杂质sm1及lsl-1进行定量检测（杂质sm1的定量限浓度为24.895ng/ml，相当于供试品浓度的1.660ppm，检测限浓度为7.469ng/ml，相当于供试品浓度的0.498ppm。杂质lsl-1的定量限浓度为5.054ng/ml，相当于供试品浓度的0.337ppm，检测限浓度为1.516ng/ml，相当于供试品浓度的0.101ppm），能够符合标准的检测要求。

23、5）本发明的方法中，质谱是采用mrm模式，分别采用一对离子对物质进行识别，相较于sim模式中的单离子检测，其专属性更强，增加了定性的准确性。