恩格列净片中苄基氧化的-O-OH杂质的检测方法与流程

本发明属于药品检测，尤其涉及恩格列净片中苄基氧化的-o-oh杂质的检测方法。

背景技术：

1、糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。而作为sglt-2抑制剂(卡格列净，恩格列净，达格列净等)中的明星产品-恩格列净有着很大的市场潜力。目前上市的恩格列净片剂适应症为2型糖尿病，该类靶点药物是非胰岛素依赖型降糖，即通过减少肾脏的葡萄糖重吸收，降低肾糖阈，促进葡萄糖从尿液中直接排出，可以跟其他降糖药合用，起到协同作用，核心优点是心血管获益、降低体重。再有fda批准其具有降低心血管疾病风险的加持，国内仿制企业非常多。

2、恩格列净片进口药品注册标准(标准号：jx20150247)中收录了四个代码杂质，分别是in 78285，in 78286，in 78287，in 78288，qcs货号分别为rm-e131607、rm-e131622、rm-e131602、rm-e1382。但是目前还有研究者提出需要对恩格列净制剂产品中苄基氧化的-o-oh杂质进行研究，因为该杂质具有潜在的致突变可能。并且在进行药品注册获取上市许可的过程中，药审委也提出需要按照致突变杂质对制剂产品中的恩格列净苄基氧化的-o-oh杂质进行研究，提供分析方法与验证资料，根据研究结果拟定合理控制策略。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供恩格列净片中苄基氧化的-o-oh杂质的检测方法，以获得恩格列净片剂中苄基氧化的-o-oh杂质的合理控制策略，严格把控该制剂的质量控制结果。

2、为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：

3、本发明提供恩格列净片中苄基氧化的-o-oh杂质的检测方法，所述检测方法是采用高效液相色谱-质谱联用法进行检测，所述苄基氧化的-o-oh杂质的结构如式i所示：

4、

5、所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为55～70％：30～45％，采用等度洗脱；

6、所述质谱的检测条件包括：采用esi离子源，以多反应监测方式在正离子模式下进行定量分析。

7、优选地，所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以5～10mmol/l乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为60～70％：30～40％，采用等度洗脱；流速为0.5～1.0ml/min；柱温为30±5℃；样品室温度为15±5℃。

8、进一步优选地，所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以5～7mmol/l乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为60～65％：35～40％，采用等度洗脱；流速为0.5～0.7ml/min；柱温为30±2℃；样品室温度为15±2℃。

9、更为优选的，所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以5mmol/l乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为60％：40％，采用等度洗脱；流速为0.5ml/min；柱温为30℃；样品室温度为15℃。

10、优选地，所述质谱的检测条件包括：毛细管电压为0.5～1.0kv，脱溶剂气温度为400～500℃，脱溶剂气流速为800～1200l/hr，锥孔气流速为50～100l/hr，离子源温度为150～200℃，碰撞气为氦气。

11、进一步优选地，所述质谱的检测条件包括：毛细管电压为0.5～0.7kv，脱溶剂气温度为400～450℃，脱溶剂气流速为900～1100l/hr，锥孔气流速为50～60l/hr，离子源温度为150～170℃，碰撞气为氦气。

12、更为优选地，所述质谱的检测条件包括：毛细管电压为0.5kv，脱溶剂气温度为450℃，脱溶剂气流速为1000l/hr，锥孔气流速为50l/hr，离子源温度为150℃，碰撞气为氦气。

13、优选地，所述质谱的检测条件还包括：苄基氧化的-o-oh杂质定量离子为：母离子为500.3m/z，子离子为465.29m/z；锥孔电压15v，碰撞能10v；苄基氧化的-o-oh杂质定性离子为：母离子为500.3m/z，子离子为449.30m/z；锥孔电压15v，碰撞能10v；或者，苄基氧化的-o-oh杂质定性离子为：母离子为500.3m/z，子离子为70.98m/z；锥孔电压15v，碰撞能25v。

14、优选地，所述检测方法具体包括如下步骤：

15、步骤1，溶液的配制：包括50％乙腈、杂质对照品贮备液、杂质对照品溶液、供试品溶液，其中：

16、50％乙腈：量取乙腈500ml，加水500ml，摇匀，即得；

17、杂质对照品贮备液：精密称取苄基氧化的-o-oh杂质对照品适量，加50％乙腈溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，摇匀，精密量取该溶液适量，加50％乙腈稀释制成每1ml含60ng的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；

18、杂质对照品溶液：精密量取1ml的苄基氧化的-o-oh杂质对照品贮备液，置10ml量瓶中，加50％乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；

19、供试品溶液：取本品适量，研成细粉，称取粉末适量(约含恩格列净2mg)，精密称定，置20ml量瓶中，加50％乙腈稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液即得；

20、步骤2，采用高效液相色谱-质谱联用法对所述杂质对照品溶液和供试品溶液进行检测；

21、步骤3，根据检测结果计算苄基氧化的-o-oh杂质的含量，杂质含量计算公式为：

22、

23、其中，a供为供试品的峰面积；a对为对照品的峰面积；w对为对照品称样量，mg；r对为对照品的纯度或含量；v对为对照品溶液定容体积；m供为供试品取样量，单位：mg；规格为供试品规格；平均片重为供试品平均片重，mg；v供为供试品溶液定容体积。

24、优选地，所述高效液相色谱采用的色谱柱为watershss t3 2.5μm，3.0×150mm column xp。

25、本发明的检测方法对恩格列净片中苄基氧化杂质进行了完整的方法学验证，验证结果显示该检测方法具有良好的专属性、系统适用性、准确度、精密度、线性和灵敏度。

技术特征：

1.恩格列净片中苄基氧化的-o-oh杂质的检测方法，其特征在于，所述检测方法是采用高效液相色谱-质谱联用法进行检测，所述苄基氧化的-o-oh杂质的结构如式i所示：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以5～10mmol/l乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为60～70％：30～40％，采用等度洗脱；流速为0.5～1.0ml/min；柱温为30±5℃；样品室温度为15±5℃。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以5～7mmol/l乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为60～65％：35～40％，采用等度洗脱；流速为0.5～0.7ml/min；柱温为30±2℃；样品室温度为15±2℃。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件包括：采用t3色谱柱，以5mmol/l乙酸铵溶液为流动相a，乙腈为流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积百分比为60％：40％，采用等度洗脱；流速为0.5ml/min；柱温为30℃；样品室温度为15℃。

5.根据权利要求1～4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的检测条件包括：毛细管电压为0.5～1.0kv，脱溶剂气温度为400～500℃，脱溶剂气流速为800～1200l/hr，锥孔气流速为50～100l/hr，离子源温度为150～200℃，碰撞气为氦气。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的检测条件包括：毛细管电压为0.5～0.7kv，脱溶剂气温度为400～450℃，脱溶剂气流速为900～1100l/hr，锥孔气流速为50～60l/hr，离子源温度为150～170℃，碰撞气为氦气。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的检测条件包括：毛细管电压为0.5kv，脱溶剂气温度为450℃，脱溶剂气流速为1000l/hr，锥孔气流速为50l/hr，离子源温度为150℃，碰撞气为氦气。

8.根据权利要求5～7任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的检测条件还包括：苄基氧化的-o-oh杂质定量离子为：母离子为500.3m/z，子离子为465.29m/z；锥孔电压15v，碰撞能10v；苄基氧化的-o-oh杂质定性离子为：母离子为500.3m/z，子离子为449.30m/z；锥孔电压15v，碰撞能10v；或者，苄基氧化的-o-oh杂质定性离子为：母离子为500.3m/z，子离子为70.98m/z；锥孔电压15v，碰撞能25v。

9.根据权利要求1～8任一项所述的检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用的色谱柱为hss t3 2.5μm，3.0×150mm column xp。

技术总结
本发明提供恩格列净片中苄基氧化的‑O‑OH杂质的检测方法。所述检测方法是采用高效液相色谱‑质谱联用法进行检测，所述苄基氧化的‑O‑OH杂质的结构如式I所示：所述高效液相色谱的检测条件包括：采用T3色谱柱，以乙酸铵溶液为流动相A，乙腈为流动相B，所述流动相A和所述流动相B的体积百分比为55～70％：30～45％，采用等度洗脱；所述质谱的检测条件包括：采用ESI离子源，以多反应监测方式在正离子模式下进行定量分析。本发明的检测方法对恩格列净片中苄基氧化杂质进行了完整的方法学验证，验证结果显示该检测方法具有良好的专属性、系统适用性、准确度、精密度、线性和灵敏度。

技术研发人员：王燕敏,孙小院,马元战,王卫士,王刚,王琨
受保护的技术使用者：国药集团容生制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24