壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条及其制备方法与试剂盒与流程

本发明涉及生物医学检测，尤其涉及一种壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条及其制备方法与试剂盒。

背景技术：

1、肝纤维化是由病毒感染、酒精滥用、毒素等多种病因导致肝慢性损伤后的一类损伤再修复过程，晚期可进展为肝硬化。目前临床上主要通过肝组织活检、影像学和血清学标志物的检测对肝纤维化进行诊断。虽然肝组织活检是肝纤维化诊断的“金标准”，但肝组织活检存在较高的抽样误差、费用昂贵和侵入性等缺点，不适用于肝纤维化进程的动态观测，另外，具有侵入性可能导致严重并发症而使其应用受限。影像学方法主要基于超声波弹性成像的技术测定肝脏硬度，其结果与操作者的经验有关，主观性较强，并且对于腹水或肥胖患者假阴性率高。

2、因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

1、鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条及其制备方法与试剂盒，旨在解决现有肝纤维化的检测方法费用昂贵、具有侵入性等的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供一种壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，其中，包括：

4、基板，以及依次搭接设置在所述基板上的样本垫、结合垫、包被膜和吸水纸；

5、所述样本垫上含有阻断剂和惰性蛋白；所述阻断剂包括hbr24主动型阻断剂、gublocker-mx1主动型阻断剂和gu blocker-mm3主动型阻断剂；

6、所述结合垫上含有胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体；

7、所述包被膜上间隔设置有检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫设置，所述质控线靠近所述吸水纸设置。

8、可选地，所述惰性蛋白包括牛血清白蛋白、牛血清γ球蛋白、鸡卵白蛋白中的至少一种。

9、可选地，所述样本垫上还含有无机盐和表面活性剂。

10、可选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾中的至少一种；所述表面活性剂包括曲拉通x-100、吐温-20中的至少一种。

11、可选地，所述胶体金颗粒的粒径为10-30nm；

12、所述检测线上包被有壳多糖酶3样蛋白1抗体；

13、所述质控线上包被有能够与胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体特异性结合的抗体。

14、本发明的第二方面，提供一种本发明如上所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条的制备方法，其中，包括步骤：

15、提供第一混合液，所述第一混合液中含有阻断剂和惰性蛋白；所述阻断剂包括hbr24主动型阻断剂、gu blocker-mx1主动型阻断剂和gu blocker-mm3主动型阻断剂；

16、将样本垫浸泡在所述第一混合液中，干燥后，得到含有阻断剂和惰性蛋白的样本垫；

17、提供第二混合液，所述第二混合液中含有胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体；

18、将所述第二混合液涂覆在结合垫上，得到含有胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体的结合垫；

19、在包被膜上形成间隔设置的检测线和质控线，得到含有间隔设置的检测线和质控线的包被膜；

20、将含有阻断剂和惰性蛋白的样本垫、含有胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体的结合垫、含有间隔设置的检测线和质控线的包被膜和吸水纸依次搭接设置在基板上，得到所述壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条。

21、可选地，所述第一混合液中含有阻断剂、惰性蛋白、无机盐和表面活性剂；

22、将所述样本垫浸泡在所述第一混合液中，干燥后，得到含有阻断剂、惰性蛋白、无机盐和表面活性剂的样本垫。

23、可选地，所述第一混合液中，所述阻断剂的浓度为10-200μg/ml，所述惰性蛋白的质量含量为0.1％-10％，所述无机盐的浓度为100-200mm，所述表面活性剂的体积含量为1％-2％，所述第一混合液的溶剂为ph为7.0-7.5的磷酸盐缓冲液；

24、所述第二混合液中，所述胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体的浓度为2-4μg/ml。

25、可选地，所述在包被膜上形成间隔设置的检测线和质控线的步骤具体包括：

26、提供第三混合液和第四混合液，所述第三混合液中含有壳多糖酶3样蛋白1抗体，所述第四混合液中含有能够与胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体特异性结合的抗体；

27、将所述第三混合液和所述第四混合液间隔涂覆在包被膜上，形成间隔设置的检测线和质控线，得到含有间隔设置的检测线和质控线的包被膜。

28、本发明的第三方面，提供一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其中，所述壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒包括盒体和设置在所述盒体中的本发明如上所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，或所述壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒包括盒体和设置在所述盒体中的采用本发明如上所述的制备方法制备得到的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条。

29、有益效果：本发明中以壳多糖酶3样蛋白1为肝纤维化标志物进行肝纤维化检测，在样本垫中加入阻断剂可以降低内源性和外源性干扰，提升壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条的灵敏度、特异性和准确度；在样本垫中加入惰性蛋白能够降低假阳性，同时节省抗体。此外，本发明所述壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条检测快速，具有非侵入性、成本低、不需要任何仪器设备、操作简便、不需由专业人员操作等优点。

技术特征：

1.一种壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，其特征在于，所述惰性蛋白包括牛血清白蛋白、牛血清γ球蛋白、鸡卵白蛋白中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，其特征在于，所述样本垫上还含有无机盐和表面活性剂。

4.根据权利要求3所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾中的至少一种；所述表面活性剂包括曲拉通x-100、吐温-20中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，其特征在于，所述胶体金颗粒的粒径为10-30nm；

6.一种如权利要求1-5任一项所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括步骤：

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液中含有阻断剂、惰性蛋白、无机盐和表面活性剂；

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液中，所述阻断剂的浓度为10-200μg/ml，所述惰性蛋白的质量含量为0.1％-10％，所述无机盐的浓度为100-200mm，所述表面活性剂的体积含量为1％-2％，所述第一混合液的溶剂为ph为7.0-7.5的磷酸盐缓冲液；

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述在包被膜上形成间隔设置的检测线和质控线的步骤具体包括：

10.一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒包括盒体和设置在所述盒体中的权利要求1-5任一项所述的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条，或所述壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒包括盒体和设置在所述盒体中的采用权利要求6-9任一项所述的制备方法制备得到的壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条。

技术总结
本发明公开一种壳多糖酶3样蛋白1检测试纸条及其制备方法与试剂盒，所述检测试纸条包括：基板，以及依次搭接设置在基板上的样本垫、结合垫、包被膜和吸水纸；样本垫上含有阻断剂和惰性蛋白；阻断剂包括HBR24、GU Blocker‑MX1和GU Blocker‑MM3；结合垫上含有胶体金颗粒标记的壳多糖酶3样蛋白1抗体；包被膜上间隔设置有检测线和质控线，检测线靠近所述结合垫设置，质控线靠近所述吸水纸设置。本发明在样本垫中加入阻断剂可以降低内源性和外源性干扰，提升检测试纸条的灵敏度、特异性和准确度。在样本垫中加入惰性蛋白能够降低假阳性，同时节省抗体。同时该检测试纸条检测快速，具有非侵入性、成本低等优点。

技术研发人员：张旭东,阚洪晶,王学敏,孙成艳,吴志波
受保护的技术使用者：迪瑞医疗科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17