12种生物胺含量的离子色谱测定方法

本发明涉及多种生物胺含量的同时测定方法，尤其涉及餐桌剩余食物中12种生物胺含量的离子色谱测定方法，属于生物胺含量的测定领域。

背景技术：

1、食物中蛋白在食物本身的酶及微生物酶的作用下，会分解产生氨基酸，氨基酸进一步分解产生具有腐败特征的低分子物质。一是氨基酸在脱羧酶的作用下，脱羧形成胺类(amines)，如组氨酸脱羧形成组胺、乌氨酸脱羧形成腐胺、赖氨酸脱羧形成尸胺、色氨酸脱羧形成色胺等；二是氨基酸在脱氨基酶的作用下，脱去氨基形成氨，氨与甲基反应生成一甲胺，二甲胺、三甲胺等。

2、生物胺(biogenic amine，ba)是一类具有生物活性的小分子量含氮有机化合物的总称。根据其化学结构可分为：脂肪族，包括尸胺、腐胺等；芳香族，包括酪胺、苯乙胺等；杂环类，包括组胺、色胺等。生物胺是食物腐败变质的重要评价指标，被广泛用来评价食物的新鲜度。

3、文献报道的生物胺含量测定方法主要有液相色谱法、液相色谱串联质谱法和离子色谱串联质谱法等。液相色谱法用于测定生物胺的应用报道最多，但是前处理需要衍生化，操作繁琐，方法稳定性差；液相色谱串联质谱法和离子色谱串联质谱法仪器设备要求高，检测线性范围窄，不适合复杂基质样品中的高含量生物胺测定。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供12种生物胺含量的离子色谱测定方法，该检测方法操作简单、线性范围宽、重复性好、准确度高、适用范围广、稳定性好。

2、本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

3、本发明提供了12种生物胺含量的离子色谱测定方法，所述的12种生物胺是甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺和胍丁胺；所述的离子色谱测定方法包括：

4、(1)分别配制甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺和胍丁胺的标准工作母液；将各标准工作母液混和并定容得到混合标准工作液；

5、(2)将混和标准工作液采用离子色谱仪进行分析分别得到甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺和胍丁胺的离子色谱图；

6、(3)根据离子色谱图中各生物胺的色谱峰面积对标标准工作母液中各生物胺的浓度分别绘制甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺、胍丁胺的标准曲线；

7、(4)将待测的样品进行前处理后采用离子色谱仪进行分析得到待测定的样品溶液离子色谱图；

8、(5)以待测的样品溶液离子色谱图中各生物胺对应的色谱峰面积通过对标的相应的标准曲线计算待测的样品溶液中各生物胺的含量。

9、本发明一种优选的具体实施方案，步骤(1)中所述的甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺、胍丁胺的标准工作母液的配制方法包括：称取各生物胺标准品加入硝酸酸化，再用硝酸溶液定容得到各自的标准工作母液。

10、作为本发明一种优选的具体实施方案，步骤(2)或步骤(4)中采用进行离子色谱仪进行分析的色谱条件包括：

11、流动相由硝酸水溶液与乙腈组成；优选的，按照体积比计，4.25mmol/l硝酸水溶液和乙腈的体积比为95：5；更优选的，所述的硝酸水溶液是浓度为4.25mmol/l硝酸水溶液。

12、离子色谱柱为阳离子柱，其中，所述的阳离子柱优选为metrosep c4 100/4.0；

13、流速优选为0.9ml/min；

14、进样体积优选为20μl；

15、柱温优选为30℃；

16、检测器优选为非抑制-电导检测器。

17、本发明一种优选的具体实施方案，步骤(4)将待测的样品进行前处理的方法包括：向待测样品中加入提取液进行振荡提取后离心，取上清液过微孔滤膜，即得；其中，所述的提取液优选为4.25mol/l硝酸水溶液。

18、作为本发明一种优选的具体实施方案，步骤(5)中以待测的样品溶液色谱图中各生物胺对应的色谱峰面积通过对标相应的标准曲线计算待测的样品溶液中各生物胺的含量的方法包括：

19、采用标准曲线外标法计算待测的样品溶液中各生物胺的含量，计算公式如下：

20、

21、式中：

22、x-样品中生物胺的含量，单位：mg/g；

23、c-样品溶液中测定的生物胺的浓度，mg/l；

24、v-提取液体积，ml；

25、m-样品称样质量，g

26、k-稀释倍数。

27、本发明采用离子色谱的检测方法，以硝酸水溶液-乙腈二种混合流动相经阳离子柱实现了12种生物胺含量的同时测定，12种生物胺在35分钟内能够同时被定性和定量分析。本发明建立的12种生物胺的同时测定方法的线性范围为0.5-100mg/l；12种生物胺的检出限如下：甲胺0.05mg·l-1，乙胺0.06mg·l-1，章鱼胺0.16mg·l-1，三甲胺0.17mg·l-1，酪胺0.33mg·l-1，苯甲胺0.32mg·l-1，β-苯乙胺0.47mg·l-1，腐胺0.25mg·l-1，尸胺0.35mg·l-1，组胺0.58mg·l-1，色胺0.67mg·l-1，胍丁胺0.59mg·l-1；各生物胺组分的回收率介于85.2％～116.7％之间，精密度为0.2％～2.4％；本发明具有操作简单，线性范围宽、重复性好、准确度高、适用范围广、稳定性好等特点，在餐桌剩余食物中的生物胺同步测定中具有应用前景。

技术特征：

1.一种12种生物胺含量的离子色谱测定方法，所述的12种生物胺是甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺和胍丁胺；其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的离子色谱测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述的甲胺、乙胺、章鱼胺、三甲胺、酪胺、苯甲胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺、胍丁胺的标准工作母液的配制方法包括：称取各生物胺标准品加入硝酸酸化，再用硝酸水溶液定容得到各自的标准工作母液。

3.根据权利要求1所述的离子色谱测定方法，其特征在于，步骤(2)或步骤(4)中采用离子色谱仪进行分析的色谱条件包括：流动相由硝酸水溶液与乙腈组成。

4.根据权利要求3所述的离子色谱测定方法，其特征在于，按照体积比计，硝酸水溶液和乙腈的体积比为95：5。

5.根据权利要求3或4所述的离子色谱测定方法，其特征在于，所述的硝酸水溶液是浓度为4.25mmol/l硝酸水溶液。

6.根据权利要求1所述的离子色谱测定方法，其特征在于，步骤(2)或步骤(4)中采用离子色谱仪进行分析的色谱条件包括：离子色谱柱为阳离子柱；优选的，所述的阳离子柱为metrosep c4 100/4.0。

7.根据权利要求1所述的离子色谱测定方法，其特征在于，步骤(2)或步骤(4)中采用离子色谱仪进行分析的色谱条件包括：

8.根据权利要求1所述的离子色谱测定方法，其特征在于，步骤(4)将待测的样品进行前处理的方法包括：向待测样品中加入提取液进行振荡提取后离心，取上清液过微孔滤膜，即得。

9.根据权利要求8所述的离子色谱测定方法，其特征在于，所述的提取液为硝酸水溶液，优选为4.25mol/l硝酸水溶液。

10.根据权利要求1所述的离子色谱测定方法，其特征在于，步骤(5)中以待测的样品溶液色谱图中各生物胺对应的色谱峰面积通过对标相应的标准曲线计算待测的样品溶液中各生物胺的含量的方法包括：

技术总结
本发明公开了12种生物胺含量的离子色谱测定方法。本发明采用离子色谱的检测方法，以硝酸水溶液‑乙腈二种混合流动相经阳离子柱实现了12种生物胺含量的同时测定，12种生物胺在35分钟内能够同时被准确的定性和定量分析。本发明建立的12种生物胺的离子色谱测定方法的线性范围为0.5‑100mg/L，各生物胺组分的回收率介于85.2％～116.7％之间，精密度为0.2％～2.4％；本发明建立的离子色谱测定方法具有操作简单、线性范围宽、重复性好、准确度高、适用范围广、稳定性好等特点，在餐桌剩余食物中的生物胺同步测定和分析中具有应用前景。

技术研发人员：谢秀兰,阚慷,饶正华
受保护的技术使用者：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31