一种同时测定参梅养胃颗粒中白芍、甘草和丹参的含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药复方制剂的含量测定方法，特备涉及一种同时测定参梅养胃 颗粒中白芍、甘草和丹参的含量的方法。
【背景技术】
[0002] 参梅养胃颗粒的性状为棕色的颗粒；味微苦；功能主治：养阴和胃，用于胃痛灼 热，嘈杂似饥，口咽干燥，大便干结；浅表性胃炎，胃阴不足型慢性胃炎及各种胃部不适症。 其药物成分为北沙参、山楂、乌梅、红花、莪术、土木香、蒲公英、丹参、甘草、白苟、当归。目 前，市面上销售有江苏中兴药业有限公司提供的参梅养胃颗粒，批号：150303,150401， 150410,规格 16gX6 袋。
[0003] 目前，参梅养胃颗粒的药物疗效已经得到临床的肯定，但药物的疗效只有在质量 可控的前提下才能得到保证，药物原有的质量控制方法及其简单粗糙，更不能全面、准确的 反应和控制该复方制剂的质量。目前，还没有一种可以同时测定参梅养胃颗粒中白芍、甘草 和丹参的含量的方法。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种可以同时测定参梅养 胃颗粒中白芍、甘草和丹参的含量的方法。
[0005] 技术方案：为实现上述技术目的，本发明提供了一种同时测定参梅养胃颗粒中白 芍、甘草和丹参的含量的方法，按照高效液相色谱法测定，参照中国药典2010年版一部附 录VID，其中，色谱条件与系统适用性试验：
[0006] 以用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0. 17% 磷酸为流动相B进行梯度洗脱，线性梯度洗脱方式为：0~5min，10 %A- 15 %A;5~ 14min，15%A- 25. 5A;14 ~20min，25. 5%A- 25. 5%A;20 ~35min，25. 5%A- 50%A; 35~40min，50% - 50% ;检测波长为232nm;流速：1.OmL?minS柱温：30°C;进样体积： 10yL;
[0007] 对照品溶液的制备：精密秤取适量芍药苷、甘草苷、丹酚酸B、甘草酸铵作为对 照品，加入甲醇制成对照品储备液，各储备液浓度为：芍药苷，220. 4yg?mL%甘草苷， 181. 2yg.mLS丹酸酸B，186. 6yg.mLS甘草酸铵，163. 6yg.mL\取不同体积的上述储 备液加甲醇稀释后，制成不同浓度的对照品混合溶液；
[0008] 供试品溶液的制备：精密称取参梅养胃颗粒lg，精确至0.OOOlg，加入25mL甲醇， 超声处理40min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0009] 测定法：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10yL，注入液相色谱仪， 测定，即得。
[0010] 优选地，在对照品储备液的制备中，加入的甲醇的体积分数为60%~100%。
[0011] 更优选地，在对照品储备液的制备中，加加入的甲醇的体积分数为90%甲醇。
[0012] 优选地，在供试品溶液的制备中，加入的甲醇的体积分数为60%~100%。
[0013] 更优选地，在供试品溶液的制备中，加入的甲醇的浓度为90%甲醇。
[0014] 优选地，在供试品溶液的制备中，功率为300~500W，频率50~lOOKHz，超声时间 20 ~60min〇
[0015] 更优选地，在供试品溶液的制备中，功率为300W，频率50KHz，超声时间40min。
[0016] 在一种更优选的实施方式中，本发明同时测定参梅养胃颗粒中白芍、甘草和丹参 的含量的方法，按照下述步骤进行：按照高效液相色谱法测定，参照中国药典2010年版一 部附录VID，其中，色谱条件与系统适用性试验：
[0017] 以用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0. 17% 磷酸为流动相B进行梯度洗脱，线性梯度洗脱方式为：0~5min，10 %A- 15 %A;5~ 14min，15%A- 25. 5A;14 ~20min，25. 5%A- 25. 5%A;20 ~35min，25. 5%A- 50%A; 35~40min，50% - 50% ;检测波长为232nm;流速：1.OmL?minS柱温：30°C;进样体积： 10yL;
[0018] 对照品溶液的制备：精密秤取适量芍药苷、甘草苷、丹酚酸B、甘草酸铵作为对照 品，加90%甲醇制成对照品储备液，各储备液浓度为：芍药苷，220. 4yg?mL-1 ;甘草苷， 181. 2yg?mL-1 ;丹酸酸B，186. 6yg?mL-1 ;甘草酸铵，163. 6yg?mL-1，取不同体积的上 述储备液加90%甲醇（体积分数）稀释后，制成不同浓度的对照品混合溶液；
[0019] 供试品溶液的制备：精密称取参梅养胃颗粒lg，精确至0.OOOlg，加入25mL90%甲 醇（体积分数），超声处理，功率300W，频率50KHz，40min，放冷，加90%甲醇（体积分数） 至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0020] 测定法：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10yL，注入液相色谱仪， 测定，即得。
[0021] 有益效果：与现有技术相比，本发明首次提出了一种可以同时测定参梅养胃颗粒 中白芍、甘草和丹参的含量的方法，使用同一色谱条件即可实现同时测定，操作简便，分析 数据准确，既节省了分析人员的分析时间，提高了工作效率，延长了色谱柱的使用寿命，降 低了成本，同时保证了制剂的稳定性，提高了可控性。
【附图说明】
[0022] 图1为参梅养胃颗粒供试品的紫外扫描图；
[0023] 图2为甲醇浓度对提取率的影响，其中，A为芍药苷，B为甘草苷，C为丹酚酸B，D 为甘草酸铵；
[0024] 图3为液固比对提取率的影响，其中，A为芍药苷，B为甘草苷，C为丹酚酸B，D为 甘草酸铵；
[0025] 图4为超声时间对提取率的影响，其中，A为芍药苷，B为甘草苷，C为丹酚酸B，D 为甘草酸铵；
[0026] 图5为芍药苷（A)、甘草苷（B)、丹酚酸B(C)和甘草酸铵⑶标准曲线；
[0027] 图6为样品（A)、对照品（B)、缺白芍阴性样品（C)、缺丹参阴性样品（D)、缺甘草阴 性样品（E)及阴性样品（F)的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0028] 下面通过具体的实施例详细说明本发明，但不用于限制本发明。
[0029] 本发明提供了一种同时测定参梅养胃颗粒中白芍、甘草和丹参的含量的方法。
[0030] I. 1仪器与色谱条件AgilentLC1260高效液相色谱系统（安捷伦科技有限公 司），自动进样；色谱柱：KromasilCls(150nmX4.6nm，5iim);流动相：乙腈（A) :0? 17%磷 酸水溶液（B)，线性梯度洗脱（0 ~5min，10%A- 15%A;5 ~14min，15%A- 25. 5A，14 ~ 20min，25. 5%A-25. 5%A，20 ~35min，25. 5%A-50%A;35 ~40min，50%A-50%A); 检测波长：232nm;流速：1.OmL.minS柱温：30°C;进样体积：10y匕册6MC超声清洗机（无 锡超声仪器厂）；METTLERAE240分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；1810-B 型自动双重纯水蒸馏器（上海申立玻璃仪器公司）；旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；紫外 分光光度计（SHIMADZU，UV-2550) ;R0-MB-10D纯水仪（杭州永豪工贸有限公司）；芍药苷 对照品（中国食品药品鉴定研究所，批号=110736-201438,供含量测定用）；甘草苷对照品 (中国食品药品检定研究院，批号=111610-201106,供含量测定用）；丹酚酸B对照品（中国 食品药品检定研究院，批号=111562-201313,供含量测定用）；甘草酸铵对照品（中国食品 药品检定研究院，批号：110731-201418);甘草酸铵对照品：批号110731-201418(供含量测 定用，中国食品药品鉴定研究所提供）；
[0031] 参梅养胃颗粒（江苏中兴药业有限公司提供，批号：150303,150401，150410,规格 16gX6袋）；乙腈（色谱纯，TediaCompany)，甲醇（色谱纯，TediaCompany)，磷酸（分析 纯，中国苏州振亚化工场），水（超纯水，实验室自制）。
[0032] 1. 2检测波长确定取供试品溶液，用紫外分光光度仪进行光谱检测，结果表明，图 谱显示提取液在232nm及321nm处有最大吸收，查阅《中国药典》(2010版一部）可知，芍药 苷检测波长为230nm，丹酚酸B检测波长为286nm，甘草苷和甘草酸铵检测波长为237nm，根 据仪器条件及紫外扫描结果，选取232nm为检测波长。（见图1)。
[0033] 1. 3提取条件优化
[0034] I. 3. 1最佳提取浓度的确定
[0035] 取150303批样品颗粒，研细，取粉末五份，每份I. 0g，精密称定，置50mL容量瓶中， 加20mL不同浓度（60%，70%，80%，90%，100% )的甲醇溶液，超声处理（功率300W，频率 50KHz) 40min，放冷，加相应提取溶剂至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按"I. 1项下"色 谱条件进样，结果图2所示。
[0036] 1. 3. 2最佳液固比的确定
[0037] 取150303批样品颗粒，研细，取粉末五份，每份I. 0g，精密称定，置50mL容量瓶 中，按不同液固比（10,15, 20, 25, 30)，分别加90%甲醇溶液，即分别加入10ml、15ml、20ml、 25ml、30ml的90 %甲醇溶液超声处理（功率300W，频率50KHz) 40min，放冷，加90 %甲醇至 刻度，摇勾，滤过，取续滤液，即得。按"I. 1项下"色谱条件进样，结果图3所示。
[0038] 1. 3. 3最佳超声时间的确定