一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析领域，具体涉及一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有 关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 替格瑞洛，Ticagrelor，其化学名称为（lS，2S，3R，5S)-3-(7-(lR，2S)-2-(3,4-: 氟苯基）环丙氨基）-5-丙巯基-3H-[1，2, 3]三唑-[4, 5-d]嘧啶-3-基）-5-(2-羟乙氧 基）环戊烧_1，2_二醇。
[0003] 替格瑞洛结构式为：
[0005] 替格瑞洛为血小板聚集抑制剂，用于急性冠脉综合症（ACS)的治疗。替格瑞洛片 是由英国阿斯利康（AstraZeneca)制药公司研制开发，于2011年7月获美国FDA批准上市， 商品名为Brilinta。
[0006] 替格瑞洛及其有关物质检测的难度在于，产品在合成过程中产生的杂质较多，可 能广生的杂质包括关键起始物料、残留中间广品等多种杂质，而且替格瑞洛的杂质不易完 全分离。目前，替格瑞洛的有关物质检测方法无相关文献报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的方法。 该方法可有效将替格瑞洛及其有关物质（即杂质）分离，分析时间短，从而实现了替格瑞洛 及其杂质的有效检测，保证了替格瑞洛的质量控制。
[0008] 具体地说，本发明的一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的方法， 包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，用缓冲盐水溶液和乙腈作为流动相， 以紫外检测器为检测器，采用梯度洗脱法测定。
[0009] 上述本发明的方法，色谱柱，优选地为C18柱，规格为4. 6X 150mm，1.8 μ m，其中， 色谱柱的温度为20~30°C，最佳柱温为25°C，所述流动相流速为0. 6~I. 2ml/min，优选 0. 8ml/min，所述紫外检测器的检测波长为230~250nm，优选检测波长为242nm，所述缓冲 盐水溶液的pH范围为5. 0~6. 0,其中，缓冲盐选自磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠中的一种或几种，优选为磷酸氢二钠的水溶液，用磷酸调节pH值为5. 0~6. 0。
[0010] 上述本发明的方法，所述梯度洗脱法，其中，缓冲盐水溶液和乙腈体积比例的梯度 如下表1 :
[0011] 表1缓冲盐水溶液和乙腈体积比例的梯度
[0014] 优选的，本发明的方法，所述梯度洗脱法，其中，缓冲盐水溶液和乙腈体积比例的 梯度为如下表2 :
[0015] 表2缓冲盐水溶液和乙腈体积比例的梯度
[0017] 上述本发明的方法，具体操作过程包括取替格瑞洛适量，称重，用稀释液超声溶 解，配成每1ml含替格瑞洛Img的样品溶液，流速为0. 8ml/ml，检测波长为242nm，柱温25°C; 精密量取样品溶液10 μ 1注入液相色谱仪，完成替格瑞洛及有关物质检测，所述稀释剂为 乙腈：水=35:65v/v的混合溶剂。
[0018] 在一实施方案中，本发明的一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的 方法，包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，所述色谱柱优选为C18柱，规格 为4. 6X 150mm，1. 8 μ m,其中，色谱柱的温度为20~30°C，优选为25°C，用缓冲盐水溶液 和乙腈作为流动相，所述缓冲盐水溶液的pH范围为5. 0~6. 0,优选用磷酸调节pH值为 5. O~6. 0,所述缓冲盐选自磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中的一种或 几种，优选为磷酸氢二钠的水溶液，以紫外检测器为检测器，所述紫外检测器的检测波长为 230~250nm，优选检测波长为242nm，采用梯度洗脱法测定，所述梯度洗脱法，其中，缓冲盐 水溶液和乙腈体积比例的梯度如上表1，优选如上表2。
[0019] 本发明的一种用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的方法，包括如下操 作：
[0020] 取本品（即替格瑞洛）适量，称重，用稀释液（乙腈-水=35 :65v/v)超声溶解， 配成每1ml含替格瑞洛Img的样品溶液，流速为0. 8ml/ml，检测波长为240nm，柱温25°C ; 精密量取样品溶液10 μ 1注入液相色谱仪，完成替格瑞洛及其有关物质的检测。
[0021] 本发明的方法的优点是：各杂质之间分离度好，各杂质与替格瑞洛分离彻底，操作 简便快捷，分析时间短，成本低，能有效的控制替格瑞洛的有关物质，确保产品的安全性和 有效性。
[0022] 在本发明的实施方案中，所述的百分比（％)除特别注明外都是指体积百分比。
[0023] 在本发明的实施方案中，所述有关物质包括但不限于替格瑞洛的杂质：中间产品 Α、中间产品Β、中间产品C、SM2、SM3 ;
[0024] 中间产品A的化学结构式如下：
[0026] 中间产品B的化学结构式如下：
[0028] 中间产品C的化学结构式如下：
[0030] SM2的化学结构式如下：
[0032] SM3的化学结构式如下：
【附图说明】
[0034] 图1为实施例1的色谱图。
[0035] 图2为实施例2的色谱图。
[0036] 图3为实施例3的色谱图。
[0037] 图4为对比实施例的色谱图。
【具体实施方式】：
[0038] 以下实施例用于说明本发明，但不作为对本发明保护范围的限制。
[0039] 实施例1
[0040] 仪器和条件
[0041] 安捷伦1200高效液相色谱仪，C18柱（4. 6 X 150mm，1. 8 μ m)，以缓冲盐溶液 (10mm〇l/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH至5. 0)为流动相A，以乙腈作为流动相B， 检测波长为242nm，流速0. 8ml/min，柱温25°C，稀释液为乙腈：水（35:65v/v)。进样量为 10 μ 1。按如下表3梯度程序进行洗脱：
[0042] 表3流动相A和B的梯度
[0045] 实验步骤：
[0046] 取替格瑞洛及其杂质如中间产品A、中间产品B、中间产品C、SM2、SM3各自配成Iml 溶液以及稀释剂，分别按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，获得替格瑞洛及各杂质 的定位保留时间，替格瑞洛、中间产品A、中间产品B、中间产品C、SM2、SM3的保留时间（min) 分别为 33. 05、34. 46、29. 36、50. 73、32. 23、20. 33,稀释剂无干扰。
[0047] 取本品（即替格瑞洛）适量，称重，用稀释液超声溶解，并加入替格瑞洛的杂质 (中间产品A、中间产品B、中间产品C、SM2、SM3)，配成每1ml含替格瑞洛、中间产品A、中间 产品B、中间产品C、SM2、SM3各20 μ g的混合溶液。按上述条件进行高效液相分析，记录色 谱图。结果见图1和表4。
[0048] 表4测定结果
[0050] 结合替格瑞洛及各杂质的定位保留时间，图1保留时间为20. 343min的色谱峰 是SM3的色谱峰，保留时间为29. 370min的色谱峰是中间产品B的色谱峰，保留时间为 32. 244min的色谱峰是SM2的色谱峰，保留时间为33. 062min的色谱峰是替格瑞洛的色谱 峰，保留时间为34. 468min的色谱峰是中间产品A的色谱峰，保留时间为50. 728min的色谱 峰是中间产品C的色谱峰。在上述色谱条件下，替格瑞洛的杂质之间分离度好，且60min内 结束整个有关物质检测，分析时间短，效率高，节约成本，满足中国药典的要求。
[0051] 实施例2
[0052] 仪器和条件
[0053] 安捷伦1200高效液相色谱仪，C18柱（4. 6 X 150mm，L 8 μ m)，以缓冲盐溶液 (10mm〇l/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH至6. 0)为流动相A，以乙腈作为流动相B， 检测波长为242nm，流速0. 8ml/min，柱温25°C，稀释液为乙腈：水（35:65V/V)。进样量为 10 μ 1。