的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也 纳入本发明的范围内。
【附图说明】
[0033] 图1 :本发明的基于金属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织切片方法流程示意图，其中：
[0034] A，低速金钢锅（SYJ_150Kejing automation equipment Co.，Shenyang, China)，用 来将含有弹簧圈的动脉瘤瘤体远端切除（含部分弹簧圈）；a.SYJ-150低速金钢锯；b.夹持 蜡块进行第一次标本处理；
[0035] B，标本处理示意图：a.血管标本被包埋于石蜡块中；b.使用慢速金刚锯将含有弹 簧圈的动脉瘤瘤体远端切除（含部分弹簧圈）；c.使用显微镊将动脉瘤内残留的弹簧圈取 出；d.进行第二次石蜡包埋；
[0036] C, 5 μ m石錯切片染色：a.动脉瘤切片的HE染色；b.使用Anti-Von Willebrand Factor antibody在DAB免疫组织化学染色中标记动脉瘤瘤颈内皮细胞；
[0037] D, 5 μ m石蜡切片免疫荧光：a.使用DAPI进行动脉瘤瘤颈处细胞核的标记；b.使 用 Anti-Von Willebrand Factor antibody 作为一抗，Labeled Donkey Anti - Rabbit IgG AntibodiesAlexa Fluor? 488作为二抗进行突光标记；c.双标显示动脉瘤瘤颈处内皮细 胞形态及其聚集程度。
【具体实施方式】
[0038] 实施例1
[0039] 本实施例中，基于金属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织进行切片，其包括：将从载瘤动脉 瘤颈两端切除离体的栓塞后动脉瘤组织标本浸泡于10%福尔马林溶液中固定至少24小 时；取上述固定的标本，分别经2h酒精福尔马林、70 %酒精30min，80 %酒精30min，95 % 酒精30minx2遍，和100 %酒精55minx2遍；然后经过二甲苯透明55minx2遍，石錯浸润 40minx3遍；最后用石蜡包埋标本置矩形模具盒内；使用低速金钢锯，将上述包埋的动脉瘤 瘤体标本其远端切除"帽端";将切除掉帽端的动脉瘤侧暴露，在手术显微镜下使用显微镊 抽取其中的弹簧圈；将抽取过弹簧圈的标本石蜡块再次融化，再用石蜡将标本包埋在矩形 模具盒内；使用常规石錯切片机（Leica Microsystems, Nussloch, Germany)将二次包埋的 动脉瘤标本切片为5 μ m石蜡切片。
[0040] 实施例2
[0041] 实验大鼠弹簧圈栓塞后腹主动脉瘤切片及其免疫组化检测
[0042] 选取200g左右实验大鼠，将一只大鼠的腹主动脉作为供体，通过端侧吻合，吻合 至受体腹主动脉（肾静脉和髂腰静脉中间部分），通过缝合制作瘤颈后，使用Coil完全栓 塞，远端结扎；关腹，通过MRA确定造模的成功；1月后，通过颈动脉插管处，注射肝素生理 盐水2ml，使得全身血液甘素化；此时切去腹主动脉动脉瘤处并延伸至远端、近端各3mm血 管；使用4%多聚甲醛固定后，脱水，包埋，制作组织蜡块；使用慢速金刚锯将动脉瘤远端切 除后（包含部分弹簧圈），在显微镜下抽去其中的弹簧圈金属丝；二次包埋后，进行5 μ m石 蜡切片；获得的切片进行免疫组化以及免疫荧光检验；结果表明，所获得的切片可以完成 动脉瘤切片的HE染色，使用Anti-Von Willebrand Factor antibody在DAB免疫组织化学 染色中标记动脉瘤瘤颈内皮细胞；5 μ m石蜡切片进行免疫荧光检测，结果能明显显示动脉 瘤瘤颈处内皮细胞形态及其聚集程度。
[0043] 本切片方法适用于对金属弹簧圈栓塞后的动脉瘤进行5 μ m石蜡切片，有助于进 行免疫组化、免疫荧光等常规研究。
【主权项】
1. 一种基于金属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织切片方法，其特征在于，其包括步骤： 1) 离体的栓塞后动脉瘤血管标本取材和处理： 将离体的栓塞后动脉瘤组织标本浸泡福尔马林溶液中固定； 2) 动脉瘤标本的包埋： 取步骤1)固定的标本，分别经酒精福尔马林、以及不同浓度酒精浸泡后；再经过二甲 苯透明，石蜡浸润；最后用石蜡包埋标本置矩形模具盒内； 3) 动脉瘤远端切除： 使用低速金钢锯，将上述包埋的动脉瘤瘤体标本其远端切除"帽端"； 4) 金属弹簧圈抽取： 将步骤3)的切除掉帽端的动脉瘤侧暴露，在手术显微镜下使用显微镊抽取其中的弹 簧圈； 5) 修饰后动脉瘤标本再包埋： 将抽取过弹簧圈的标本石蜡块再融化，再用石蜡将标本包埋在矩形模具盒内； 6) 石蜡组织薄切片： 使用常规石蜡切片机将二次包埋的动脉瘤标本切片。2. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离体的栓塞后动脉瘤组织标本为从 载瘤动脉瘤颈的两端切除获得。3. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的从载瘤动脉瘤颈两端切除离体的栓 塞后动脉瘤组织标本浸泡于10%福尔马林溶液中固定至少24小时。4. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中，将步骤1)固定的标本，分 别经2h酒精福尔马林、70%酒精30min，80%酒精30min，95%酒精30minx2遍，和100%酒 精55minx2遍；然后经过二甲苯透明55minx2遍，石錯浸润40minx3遍；最后用石錯包埋标 本置矩形模具盒内。5. 按权利要求4所述的方法，其特征在于，所述石蜡包埋标本为含有弹簧圈的动脉瘤 瘤体标本。6. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤6)中将二次包埋的动脉瘤标本 切片为5μm石蜡切片。
【专利摘要】本发明属生物材料检测领域，涉及一种基于金属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织切片方法。本发明采用结合慢速金刚锯切割的二次包埋双切割技术，对石蜡包埋的栓塞后动脉瘤标本进行处理，对金属弹簧圈栓塞后的动脉瘤进行5μm石蜡切片，进而可进行免疫组化、免疫荧光等常规研究。本发明提供了一种简易、稳定、多数普通研究机构能实现的动脉瘤组织切片方法，能明显提高含金属弹簧圈血管组织切片的可行性和稳定性，降低对于实验机构及器械和技术的要求。
【IPC分类】G01N1/28
【公开号】CN105319089
【申请号】CN201410331411
【发明人】刘佩玺, 朱巍, 安庆祝, 陈曦
【申请人】复旦大学附属华山医院
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年7月12日