一种提高硫普罗宁原料药稳定性的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明针对硫普罗宁原料药与片剂的有关物质测定法中供试品溶液稳定性差，测 定结果不准确，不能真是的反应产品的质量，提供一种提高硫普罗宁原料药稳定性的检测 方法。
【背景技术】
[0002] 硫普罗宁片为本公司申报并批准的药品，国药准字号H20065248,质量标准文号 YBH14632006。硫普罗宁为一种新型含游离巯基的甘氨酸衍生物。临床适应症病毒性肝炎， 酒精性肝炎，药物性肝炎，重金属中毒性肝炎，脂肪肝及肝硬化早期;降低放疗、化疗的毒副 作用，升高白细胞并加速肝细胞的恢复，降低骨髓染色体畸变率和皮肤溃疡的发生，并能预 防放疗所致二次肿瘤的发生;对老年性早期白内障和玻璃体混浊有显著治疗作用;预防和 治疗泌尿系统胱氨酸结石;有抗炎抗过敏作用，对皮炎、湿疹、痤疮及荨麻疹有较好疗效。当 前药典及相关文献收载有关物质均为高效液相色谱法，
[0003] 本公司报批的有关物质测定法如下
[0004] 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.06mol/L的磷酸氢二钾（用甲 烷磺酸调pH值至4.7)为流动相，流速约为每分钟1.0ml，检测波长为210nm，理论板数按硫普 罗宁计算应不低于2000。
[0005] 取本品适量，加流动相制成每lml中含0.5mg硫普罗宁的溶液，滤过，取滤液作为供 试品溶液;精密量取续滤液适量，加流动相制成每lml中含5yg的溶液作为对照溶液。量取对 照溶液20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图 中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主峰面积的2.5倍(2.5%)。见附 图1。
[0006] 现有技术的缺陷
[0007] 样品溶液稳定性极差，同一溶液进样测定时单针运行时间30min，在1小时内杂质 降解增加在0.3%以上，测定结果不真实，对生产与产品质量控制无任何意义。具体数据见 表1:
[0008]
[0009]
[0010] 在改系统下运行的图谱，明显可见主成分峰拖尾(拖尾因子为1.709)见附图1;主 成分峰后相邻杂质不能分离(分离度只有0.88)，见附图1;该系统适用性差。
[0011]杂质控制限度不合理，只是限定了总杂，没有单杂的控制限度。
【发明内容】
[0012] 针对上述问题，本发明提供一种提高硫普罗宁原料药稳定性的检测方法。
[0013] 首先是优化系统，在优化好的系统下进行该产品的强降解试验，找出该产品的主 要降解因素：
[0014] 优化后的色谱条件
[0015] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0. lmol/L磷酸二氢钾溶液以体积比 为3: 97混合，经磷酸调pH至4.0为流动相，流速为每分钟1.0ml，柱温为25°C，检测波长为 210nm，理论板数按硫普罗宁计算不低于2000。
[0016]检测方法具体包括如下步骤：
[0017] 称取硫普罗宁原料药细粉适量，加溶剂制成含浓度为lmg/mL硫普罗宁的溶液作为 供试液；
[0018] 量取供试液，加溶剂制成含浓度为〇. 〇lmg/ML硫普罗宁的溶液作为对照液；
[0019]取对照液10此，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为记录 仪满量程的30%;再精密量取供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保 留时间的4倍。供试液的色谱图中（相对主峰保留时间0.5倍之前的溶剂峰除外），任一杂质 的峰面积不得大于对照液主峰面积的0.2倍(0.2% )，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液 主峰峰面积的1倍(1.0% )，即可完成检测方法。
[0020] 所述的溶剂是乙腈与0. lmol/L磷酸二氢钾溶液以体积比3:97混合，经磷酸调pH至 4.0后加入0.1 % (w/v)乙二胺四乙酸二钠的混合溶液。
[0021] 本发明的技术方案针对样品溶液的不稳定性，找出不稳定因素为氧化降解。供试 品溶液水解氧化降解快，将乙二胺四乙酸二钠抗氧剂加入测试溶液中，而不是加入样品中， 即解决了溶液稳定性差带来的测定技术困扰，不在产品中加入抗氧剂保证了临床用药的安 全。同时提供了一种新开发的色谱条件。
[0022] 本发明的原料药产品固态时稳定，但测定时必须溶解呈溶液，液态稳定性差，测定 结果不真实，无法重现，保证测试液的稳定性为关键因素，即在配制溶剂中加入0.1%(w/V) 乙二胺四乙酸二钠防止氧化降解即可。
【附图说明】
[0023] 图1为现有技术中硫普罗宁的液相色谱图。
[0024] 图2为本发明技术方案中硫普罗宁的液相色谱图。
【具体实施方式】 [0025] 实施例1
[0026]通过该产品的强降解试验找出主要降解途径为湿热条件的氧化降解，结论见图表 2：
[0027]具体的强降解试验操作：
[0028]称取硫普罗宁批次A的原料药50g于50ml的量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，作 为原料药的标准溶液。
[0029] 另称取采用硫普罗宁批次A的原料药按公司处方生产一批片剂，取片剂20片，剥去 包衣，取片芯研细，称取细粉160mg于50ml的量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，作为片剂的 标准溶液。
[0030] 称取硫普罗宁批次A的原料药50g于50ml的量瓶中加 O.lmol/L盐酸溶液2ml室温放 置4小时后加溶剂溶剂并稀释至刻度，作为酸降解的测试溶液。
[0031] 称取硫普罗宁批次A的原料药50g于50ml的量瓶中加0. lmol/L氢氧化钠溶液2ml室 温放置4小时后加溶剂溶剂并稀释至刻度，作为碱降解的测试溶液。
[0032]称取硫普罗宁批次A的原料药50g于50ml的量瓶中加3%双氧水溶液2ml室温放置4 小时后加溶剂溶剂并稀释至刻度，作为氧化降解的测试溶液。
[0033] 取硫普罗宁批次A的原料药适量放置于高温80°C下8小时，取出，称取50mg于50ml 的量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，作为高温降解的测试液。
[0034]取硫普罗宁批次A的原料药适量放置于照度为4500LX的强光下10天取出，称取 50mg于50ml的量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，作为强光降解的测试液。
[0035] 分别量取上述溶液各10ul，按新开发的色谱条件依法检测，记录色谱图。根据图谱 统计各待测溶液中主成分峰的百分含量、总杂含量、车间生产成片剂过程杂质的增加百分 比，及酸、碱、氧化、高温、强光降解产生杂质的增加百分比，具体试验结果见下列表2
[0036] 表2硫普罗宁的降解试验分析统计
[0037]
[0038]以上测试结果证实：原料药经现有处方工艺制备（制剂颗粒采用的80°C减压干燥） 片剂杂质增加了 0.08%，说明制剂处方没缺陷；原料药固态在80°C处理8小时后杂质增加了 0.73%，说明单独的高温对产品无影响，固态高温降解增加的0.73%主要是氧化降解。原料 药50mg+3.0%双氧水2ml室温放置4小时后主成分降解完全，这就说明该产品在水溶液中氧 化降解超快。要解决测定时的样品降解，阻断样品的水溶液氧化降解是关键，已是考虑在测 定溶剂中加入抗氧剂，并对加入的量进行了筛选。
[0039]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0. lmol/L磷酸二氢钾溶液以体积比 为3: 97混合，经磷酸调pH至4.0为流动相，流速为每分钟1.0ml，柱温为25°C，检测波长为 210nm，理论板数按硫普罗宁计算不低于2000。
[0040] 所述的溶剂是乙腈与0. lmo 1/L磷酸二氢钾溶液以体积比3:97混合，经磷酸调pH至 4.0后加入0.1 % (w/v)乙二胺四乙酸二钠的混合溶液。
[0041] 测定法称取本品细粉适量，加溶剂制成每lml中含硫普罗宁lmg的溶液作为供试 液;精密量取供试液适量，加溶剂制成每lml中含0.0 lmg的溶液作为对照液。取对照液10μ1， 注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。供试液的色谱图中（相对主峰保留时 间0.5倍之前的溶剂峰除外），任一杂质的峰面积不得大于对照液主峰面积的0.2倍 (0.2%)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积的1倍(1.0%)。改进后的效果见 列表3。
[0042]
【主权项】
1. 一种提高硫普罗宁原料药稳定性的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 称取硫普罗宁原料药细粉适量，加溶剂制成含浓度为lmg/mL硫普罗宁的溶液作为供试 液;量取供试液，加溶剂制成含浓度为〇. 〇lmg/ml硫普罗宁的溶液作为对照液； 取对照液l〇yL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为记录仪满 量程的30%;再精密量取供试品溶液10yL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时 间的4倍，任一杂质的峰面积不得大于对照液主峰面积的0.2倍，各杂质峰面积的和不得大 于对照溶液主峰峰面积的1倍，即可完成检测方法。2. 如权利要求1所述的提高硫普罗宁原料药有关物质测定法中供试品溶液稳定性的方 法，其特征在于:所述的溶剂是乙腈与0. lmol/L磷酸二氢钾溶液以体积比3:97混合，经10% 磷酸溶液调pH至4.0后加入0.1 % (w/v)乙二胺四乙酸二钠的混合溶液。3. 如权利要求1所述的提高硫普罗宁原料药稳定性的检测方法，其特征在于，液相色谱 条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈、0. lmol/L磷酸二氢钾溶液以体积比为3: 97混合，经磷酸调pH至4.0为流动相，流速为每分钟1.0ml，柱温为25°C，检测波长为210nm， 理论板数按硫普罗宁计算不低于2000。
【专利摘要】本发明一种提高硫普罗宁原料药稳定性的检测方法，包括如下步骤：称取硫普罗宁原料药细粉适量，加溶剂制成含浓度为1mg/mL硫普罗宁的溶液作为供试液；量取供试液，加溶剂制成含浓度为0.01mg/ml硫普罗宁的溶液作为对照液；取对照液10μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为记录仪满量程的30％；再精密量取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍，任一杂质的峰面积不得大于对照液主峰面积的0.2倍,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积的1倍，即可完成检测方法。采用本发明的方法保证了测试液的稳定性，使原药产品测定结果真实，可重现。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105510455
【申请号】CN201510828172
【发明人】李芳 , 周威
【申请人】宜昌东阳光长江药业股份有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年11月25日