多处随 机的取样点，具备抽检的功能，取样点易修复不会破坏制品的外观，适用于对各类名贵木材 制品的抽样。②取样和前处理无需专业技术工作者，只需经过培训即可上岗。③采用酯醇提 取液，充分萃取出木材的有效成分。④鉴别的结果从"类"的级别提升到"种"的层面。⑤GC-MS 3D指纹图谱特征峰保留时间D1的一致性、质谱图D2的一致性和峰面积D3的准确性完全 通过数据系统处理，多层面确证鉴别样品的真伪。
[0024] 以下结合具体实施例对本发明的鉴别方法作进一步详细的说明： 首先建立标准巴里黄檀种属提取液GC-MS 3D指纹图谱。
[0025] 1.1、标准样品的预处理 确定十批真巴里黄檀种属作为标准样品，分别用直径为3.0mm的电钻钻头钻取深度 10mm标准样品约0. lg置于提取瓶中，加入5mL乙酸乙酯：甲醇=10:1的混合液作为提取溶剂， 超声提取5-10min(如果超声提取两次或多次的话，则需合并提取液并通过氮吹浓缩至lmL 左右），再经有机相微孔滤膜(〇.45μπι)过滤，得到十个待上机预处理样品，置于样品瓶中。
[0026] 1.2、GC_MS 3D指纹图谱的获取 将上述十个经过预处理标准样品（即巴里黄檀提取液或巴里黄檀提取物)分别进行气 相色谱-质谱联用仪检测，分别得到以样品提取物总离子流色谱图特征峰的保留时间D1、质 谱图D2和峰面积D3作为定性参数组成GC-MS 3D指纹图谱。
[0027] 气相色谱-质谱联用仪参数:毛细管色谱柱是DB-5MS: 30m X 0.25mm X 0.25μπι;进样 量是lyL，进样口温度是250°C ;柱温初始温度是60°C保持2min，然后以5°C/min升至280°C保 持5min;质谱接口温度是270°C ;质谱扫描模式是全扫描，质量扫描范围是35amu-350amu;进 样方式是脉冲不分流;载气是氦气（2 99.999%)，流量是1 .OmL/min;离子化方式是EI，离子 化电压是70eV;离子源温度是230°C，四级杆温度是150°C。
[0028] 1.3、根据这十个巴里黄檀提取物总离子流色谱图共有特征峰的保留时间D1、质谱 图D2和峰面积D3,整理得出巴里黄檀提取物GC-MS 3D指纹图谱特征峰及其化学物质信息 表，见下表1和附图1。
[0029]表 1
本发明的鉴别是基于提取物总离子流色谱图特征峰的保留时间D1、质谱图D2和峰面积 D3作为定性参数组成GC-MS 3D指纹图谱准确判断巴里黄檀制品真伪的鉴别方法，鉴于待检 样品的产地、取样部位及取样量等的差异性，存在提取物个别特征峰含量差异性较大，甚至 缺少个别低含量特征峰属于正常现象。经上述十批测试真品整理巴里黄檀数据库发现，十 批巴里黄檀提取物中出现检出的化学物质峰面积低于检出限的一般低于三个。因此，真伪 鉴别判定的必要条件是:①保留时间（D1)的一致性是允许偏差±0.5min。②质谱图（D2)的 一致性是检出的化学物质检索匹配率大于90%，允许出现五个检出的化学物质匹配率小于 90%。③峰面积(D3)的准确性，最多允许五个检出的化学物质峰面积低于检出限，必不可少 的成分是特征峰17(美迪紫檀素)和特征峰18(孕三烯酮），且两者百分比含量总和一般大于 30% 小于 60%。
[0030]需鉴别的几个样品： 实施例一 ：1、将检测样品一按照上述标准样品的预处理方法中的步骤（1.1)(1.2)，得 到样品一的GC-MS 3D指纹图谱（如图2)，及图谱特征峰的化学物质信息与表1对照的匹配 表，如下表2。
[0031] 表 2
2、鉴别 根据上述样品的GC-MS 3D指纹图谱特征峰的化学物质信息表(表2)与表1及图1与图2 对照可知:①保留时间(D1)的一致性要求允许偏差±0.5min，符合要求。②质谱图（D2)的一 致性是检索匹配率大于90%，其中有十个特征峰的质谱图匹配率小于90%，十三个特征峰的 质谱图匹配率大于90%，不符合要求。③峰面积(D3)的准确性要求检出的化学物质峰面积低 于检出限最多允许5个，样品检出的化学物质峰面积有十个为0,不符合要求。因此，该巴里 黄檀制品为假冒产品。
[0032] 实施例二：1、将检测样品二按照上述标准样品的预处理方法中的步骤（1.1) (1.2)，得到样品二的GC-MS 3D指纹图谱(如图3所示），及图谱特征峰的化学物质信息与表1 对照的匹配表，如下表3所示。
[0033] 表 3
2鉴别 根据上述样品的GC-MS 3D指纹图谱特征峰的化学物质信息表(表3)与表1及图1与图3 对照可知:①保留时间(D1)的一致性要求允许偏差±0.5min，符合要求。②质谱图（D2)的一 致性是检索匹配率大于90%，其中有一个特征峰的质谱图匹配率小于90%，二十二个特征峰 的质谱图匹配率大于90%，符合要求。③峰面积(D3)的准确性要求检出的化学物质峰面积低 于检出限最多允许5个，样品检出的化学物质特征峰3(反式肉桂醛)峰面积为0,不属于必不 可少的成分特征峰17(美迪紫檀素)和特征峰18(孕三烯酮），且特征峰17(美迪紫檀素)和特 征峰18(孕三烯酮）的百分比含量总和为38%，符合要求。因此，该巴里黄檀制品为真品。 [0034]实施例三：1、将检测样品三按照上述标准样品的预处理方法中的步骤（1.1) (1.2)，得到样品三的GC-MS 3D指纹图谱(如图4)，及图谱特征峰的化学物质信息与表1对照 的匹配表，如下表4。
[0035]表 4
2、鉴别 根据上述样品的GC-MS 3D指纹图谱特征峰的化学物质信息表(表4)与表1及图1与图4 对照可知:①保留时间（D1)的一致性要求允许偏差±0.5min，其中特征峰6(4-甲氧基-1，2-苯二酚)保留时间偏差大于〇.5min，列为可疑特征峰。②质谱图(D2)的一致性是检索匹配率 大于90%，其中有十七个特征峰的质谱图匹配率小于90%，六个特征峰的质谱图匹配率大于 90%，不符合要求。③峰面积(D3)的准确性要求检出的化学物质峰面积低于检出限最多允许 5个，样品检出的化学物质峰面积有十六个为0,未检出必不可少的成分特征峰17(美迪紫檀 素)和特征峰18(孕三烯酮），不符合要求。因此，该巴里黄檀制品为假冒产品。
【主权项】
1. 一种基于指纹图谱的微损鉴别巴里黄檀种属的方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 、巴里黄檀种属指纹图谱的建立： (1.1) 、样品的预处理： 用直径为1.5-3.Omm的钻头钻取深度为5-10mm的巴里黄檀种属木肩样品0.05-0.2g于 提取瓶中，加入提取溶剂3-8mL，超声提取5-1 Omin，得提取液，再经有机相微孔滤膜过滤置 于样品瓶中，得到待上机预处理样品，其中所述提取溶剂为乙酸乙酯：甲醇=10:1-8:1的混 合物； (1.2) 、指纹图谱的获取： 将上述预处理样品进行气相色谱-质谱联用仪检测，得到以总离子流色谱图特征峰的 保留时间、质谱图和峰面积作为定性参数组成的GC-MS 3D指纹图谱;气相色谱-质谱联用仪 参数设置为：毛细管色谱柱是DB-5MS: 30m X 0.25mm X 0.25μπι;进样量是0.5-lyL，进样口温 度是230-250°C;柱温初始温度是50-70°C保持2min，然后以4-6°C/min升至280°C保持4-6min;质谱接口温度是250-270°C ;质谱扫描模式是全扫描，质量扫描范围是35amu-350amu; 进样方式是脉冲不分流;载气是氦气（2 99.999%)，流量是1.0-1.5mL/min;离子化方式是 EI，离子化电压是70eV;离子源温度是230°C，四级杆温度是150°C ; (1.3) 、确定巴里黄檀种属的标准GC-MS 3D指纹图谱特征峰： 确定多批巴里黄檀种属标准样品，按上述（1.1)(1.2)步骤得到提取物总离子流色谱图 共有特征峰的保留时间、质谱图和峰面积，整理得出用作标准的巴里黄檀提取物GC-MS 3D 指纹图谱特征峰及其化学物质信息表； (2) 、巴里黄檀木真伪鉴别判定方法： 将按步骤（1.1)(1.2)获得的巴里黄檀种属待检样品的GC-MS 3D指纹图谱中特征峰的 保留时间、质谱图和峰面积的数据与标准GC-MS 3D指纹图谱中的特征峰对照，通过核对两 特征峰保留时间、质谱图和峰面积的一致性或相似性来判定巴里黄檀种属样品的真伪； 其中保留时间的一致性允许偏差±〇.5min，质谱图的一致性是匹配率大于90%，允许出 现五个检出的化学物质匹配率小于90%，峰面积的一致性是最多允许5五个检出的化学物质 峰面积低于检出限，必不可少的成分是第17个特征峰的成分美迪紫檀素和第18个特征峰的 成份孕三烯酮，且两者百分比含量总和大于30%小于60%。2. 根据权利要求1所述的基于指纹图谱的微损鉴别巴里黄檀种属的方法，其特征在于 上述保留时间的一致性是参考安捷伦数据处理系统来判断的，保留时间允许偏差± 0.5min，超出允许偏差列为可疑特征峰。3. 根据权利要求2所述的基于指纹图谱的微损鉴别巴里黄檀种属的方法，其特征在于 上述保留时间的一致性偏差应小于〇.2min，避免色谱峰漂移影响分析结果。4. 根据权利要求1所述的基于指纹图谱的微损鉴别巴里黄檀种属的方法，其特征在于 上述质谱图的一致性可参考收入安捷伦数据处理系统的谱库的巴里黄檀提取物GC-MS 3D 指纹图谱特征峰的质谱图，并结合上述巴里黄檀种属的标准GC-MS 3D指纹图谱特征峰，以 保证样品检出的化学物质质谱图得到合理解释的匹配率大于90%，保证样品检出的化学物 质质谱图检索的一致性。5. 根据权利要求1所述的基于指纹图谱的微损鉴别巴里黄檀种属的方法，其特征在于 上述峰面积的响应值是待测质量离子峰高除以1/2平均噪声高度，确定样品检出的化学物
【专利摘要】本发明涉及基于指纹图谱的微损鉴别巴里黄檀种属的方法。所述方法包括钻头微孔取样，将待检样品加入溶剂超声提取，以提取液总离子流色谱图特征峰的保留时间D1、质谱图D2和峰面积D3作为定性参数组成GC-MS？3D指纹图谱，再通过核对待检样品的GC-MS？3D指纹图谱中特征峰与标准巴里黄檀种属的GC-MS？3D指纹图谱中特征峰的3D数据匹配的一致性或相似性，来判定巴里黄檀种属样品的真伪。本发明利用有机物唯一性的质谱图D2作为重要定性参数之一，再加上定性参数D1和D3，构成3D指纹图谱，多层面“指”“纹”的确证保证巴里黄檀种属进行准确判断真伪的鉴别方法。本发明方法，实现了对巴里黄檀制品真伪的鉴别，结果准确可靠，且是微损取样，取样少易修复，不破坏制品的外观。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/88
【公开号】CN105588907
【申请号】CN201510899961
【发明人】仇镇武, 陈智勇, 黄明华, 胡传宝, 谢梅妍, 郭佳, 麦裔强, 吴铨洪, 闵雯
【申请人】中山市中广测协同创新中心
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2015年12月9日