复方氨基酸注射液18aa-ii含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药品制备领域，特别涉及一种复方氨基酸注射液18AA-II含量测定方 法。
[0002]
【背景技术】
[0003] 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质，氨基酸分析技术 对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制盒生产管理等具有 重要意义，广泛地应用于食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析。其分析测 定方法，按照检测方法可分为化学分析法、电化学分析法、分光光度法等；按照衍生反应的 先后，可分为柱前衍生和柱后衍生。
[0004] 以上分析方法中，化学分析法、电化学分析法以及分光光度法的专属性差，不能实 现多种氨基酸同时分离测定；柱前衍生法，虽然可以使用自动进样器与色谱联用实现多种 氨基酸的分离测定，但是衍生技术较为复杂，周期较长，衍生条件不易控制，重复性较差，难 以推广。
[0005] 氨基酸的分离分析方法很多，近年一般认为离子交换色谱法是比较准确的定量方 法，氨基酸分析仪和HPLC法使用较为普遍。但是HPLC法衍生技术较为复杂，周期较长，衍 生条件不易控制，重复性较差，难以推广。相对于HPLC法，氨基酸分析仪灵敏快速提供数据 准确可靠：分辨率高操作简单分析周期短；保留时间，峰面积，重现性好检出限可达3pmol， 不存在液级衍生物的问题，峰型显高斯分布，体系稳定快。
[0006] 常规的氨基酸含量测定，通常采用的都是氨基酸分析仪仪器厂家本身推荐的分离 条件，包括缓冲液pH值、缓冲液变换时间以及柱温等等。
[0007] 但是，在使用氨基酸分析仪对复方氨基酸注射液（18AA-II)进行含量测定时，由于 胱氨酸含量较小，并且胱氨酸出峰时间正好在流动相转化时间附近，使用仪器本身的分离 条件进行试验，导致胱氨酸与缬氨酸分析效果不佳，达不到试验对组分分离度的要求，同时 胱氨酸含量波动较大，致使含量测定结果准确度不佳，重现性差。
[0008]
【发明内容】
[0009] 针对现有技术的不足，本发明提供一种复方氨基酸注射液18AA-II含量测定方 法。
[0010] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种复方氨基酸注射液18AA-II含量测定方法，采用离子交换树脂柱，柱温57°C，流 量为0· 4ml/min，检测波长是570nm和440nm，流动相是由缓冲液Bl、B2、B3、B4、B5组成， 洗脱时间为60分钟，0-2. 5分钟采用100%的B1进行洗脱，2. 6-5分钟采用100%的B2进 行洗脱，5. 1-13. 6分钟采用100%的B3进行洗脱，13. 7-27. 8分钟采用100%的Μ进行洗 脱，27. 9-33. 8分钟采用100%的B5进行洗脱，33. 9-34. 8分钟采用100%的B2进行洗脱， 34. 9-53. 8分钟采用100%的B1进行洗脱； 所述缓冲液B1组成为6. 19g柠檬酸钠· 2H20、1M NaOH 6-7 mL、5. 66g氯化钠、19. 80g 柠檬酸· H20、135. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液； 所述缓冲液B2组成为7. 74g柠檬酸钠· 2H20、1M NaOH 20-22 mL、7. 07g氯化钠、 22. 00g柠檬酸· H20、25. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液； 所述缓冲液B3组成为13. 31g柠檬酸钠 · 2H20、3. 74g氯化钠、12. 80g柠檬酸· H20、 9. 00ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液； 所述缓冲液Μ组成为26. 67g柠檬酸钠· 2H20、54. 35g氯化钠、6. 10g柠檬酸· H20，用 蒸馏水将其配制成l〇〇〇mL溶液； 所述缓冲液B5组成为8. 00g NaOH、100. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液。
[0011] 本发明的有益效果： 本发明在缓冲液从B2向B3转换的时间推后0. 5min，在缓冲液从B3向Μ转换的时间 推后0. 8min，分离柱温度达到57度时，各组分间的分离效果更好，使胱氨酸与缬氨酸二者 分离度满足含量测定的要求，同时使得胱氨酸受流动相转换的干扰降低，使其在含量较低 的情况下也能准确定量，最终实现了氨基酸分析仪对复方氨基酸注射液（18AA-II) 16种氨 基酸含量的准确测定。
【附图说明】
[0012] 附图1为氨基酸分析仪推荐的分离条件的分离图谱； 附图2为本发明的分离条件的分离图谱。
【具体实施方式】
[0013] 以下结合实施例进一步阐述本发明的【具体实施方式】如下，分离图谱如图2所示： 采用日立L-8900氨基酸分析仪 试验样品：复方氨基酸注射液（18AA-II)(华仁药业股份有限公司生产） 对照品：来源中检所，批号140624-200805,纯度100% ; 柱压：泵1的柱压为llMpa左右，泵2柱压为2. OMpa ; 上样量：10 μ L 采用离子交换树脂柱(购自日立)，柱温57°C，流量为0. 4ml/min，检测波长是570nm和 440nm，流动相是由缓冲液B1、B2、B3、B4、B5组成，洗脱时间为60分钟，0-2. 5分钟采用100% 的B1进行洗脱，2. 6-5分钟采用100%的B2进行洗脱，5. 1-13. 6分钟采用100%的B3进行 洗脱，13. 7-27. 8分钟采用100%的Μ进行洗脱，27. 9-33. 8分钟采用100%的B5进行洗脱， 33. 9-34. 8分钟采用100%的Β2进行洗脱，34. 9-53. 8分钟采用100%的Β1进行洗脱； 表1 :洗脱体系
注：表中的％指体积百分比。
[0014] 所述缓冲液B1组成为6. 19g柠檬酸钠· 2H20、1M NaOH 6-7 mL、5. 66g氯化钠、 19. 80g柠檬酸· H20、135. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成lOOOmL溶液； 所述缓冲液B2组成为7. 74g柠檬酸钠· 2H20、1M NaOH 20-22 mL、7. 07g氯化钠、 22. 00g柠檬酸· H20、25. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成lOOOmL溶液； 所述缓冲液B3组成为13. 31g柠檬酸钠· 2H20、3. 74g氯化钠、12. 80g柠檬酸· H20、 9. 00ml乙醇，用蒸馏水将其配制成lOOOmL溶液； 所述缓冲液Μ组成为26. 67g柠檬酸钠· 2H20、54. 35g氯化钠、6. 10g柠檬酸· H20，用 蒸馏水将其配制成l〇〇〇mL溶液； 所述缓冲液B5组成为8. 00g NaOH、100. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成lOOOmL溶液。
[0015] 表2:缓冲液的配制表
本发明针对缓冲液的变换时间以及分离柱的柱温等条件进行了一系列的条件筛选。首 先将缓冲液从B2向B3转换的时间在4. 5min的条件下分别提前和推后0. 5min，发现在推 后0. 5分钟的情况下也就是转换时间在5. Omin，同时将B3向Μ转换的时间推后0. 8min， 也就是由原来的12. 9min推后到13. 7min条件下分离效果有所改善，胱氨酸受流动相转换 的含量波动较小，重现性变佳。
[0016] 图1为日立L-8900氨基酸分析仪推荐条件分离，可看出胱氨酸与前后两种氨基酸 的分离效果都不是太好，自身峰形也不是太好看，无法进行准确定量分析。
[0017] 图2为本发明的分离条件的图谱，可明显看出本发明使胱氨酸与前后两个氨基酸 达到有效分离，优化了峰形，减小了因流动相转换时间对胱氨酸定量的影响，从而提高了其 含量测定的准确性和重现性。
【主权项】
1. 一种复方氨基酸注射液18AA-II含量测定方法，其特征在于，采用离子交换树脂 柱，柱温57°C，流量为0· 4ml/min，检测波长是570nm和440nm，流动相是由缓冲液Bl、B2、 B3、B4、B5组成，洗脱时间为60分钟，0-2. 5分钟采用100%的B1进行洗脱，2. 6-5分钟采用 100%的B2进行洗脱，5. 1-13. 6分钟采用100%的B3进行洗脱，13. 7-27. 8分钟采用100%的 B4进行洗脱，27. 9-33. 8分钟采用100%的B5进行洗脱，33. 9-34. 8分钟采用100%的B2进 行洗脱，34. 9-53. 8分钟采用100%的B1进行洗脱； 所述缓冲液B1组成为6. 19g柠檬酸钠· 2H20、1M NaOH 6-7 mL、5. 66g氯化钠、19. 80g 柠檬酸· H20、135. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液； 所述缓冲液B2组成为7. 74g柠檬酸钠· 2H20、1M NaOH 20-22 mL、7. 07g氯化钠、 22. 00g柠檬酸· H20、25. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液； 所述缓冲液B3组成为13. 31g柠檬酸钠· 2H20、3. 74g氯化钠、12. 80g柠檬酸· H20、 9. 00ml乙醇，用蒸馏水将其配制成1000mL溶液； 所述缓冲液Μ组成为26. 67g柠檬酸钠· 2H20、54. 35g氯化钠、6. 10g柠檬酸· H20，用 蒸馏水将其配制成l〇〇〇mL溶液； 所述缓冲液B5组成为8. 00g NaOH、100. 0ml乙醇，用蒸馏水将其配制成lOOOmL溶液。
【专利摘要】本发明涉及药品制备领域，特别涉及一种复方氨基酸注射液18AA-II含量测定方法，在缓冲液从B2向B3转换的时间推后0.5min，在缓冲液从B3向B4转换的时间推后0.8min，分离柱温度达到57度时，各组分间的分离效果更好，使胱氨酸与缬氨酸二者分离度满足含量测定的要求，同时使得胱氨酸受流动相转换的干扰降低，使其在含量较低的情况下也能准确定量，最终实现了氨基酸分析仪对复方氨基酸注射液（18AA-II）16种氨基酸含量的准确测定。
【IPC分类】G01N30/06
【公开号】CN105588900
【申请号】CN201410579008
【发明人】孔文静, 陆宇, 刘春霞, 邹姗姗
【申请人】华仁药业股份有限公司
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2014年10月24日