一种毛钩藤的指纹图谱检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种毛钩藤的指纹图谱检测方法，属于药物技术领域。 技术背景
[0002] 药用钩藤为茜草科钩藤属常绿藤本植物，攀援状灌木，以带钩的茎枝入药，它具有 清热平肝、息风定惊功效，现代药理实验还证明钩藤有降压作用，因此具有很高的药用价 值。2010版中国药典共收载有5个种，分别为:钩藤1]]1〇31'11丨3 1'11711(311(^7113(1丨9.)1丨9.61 Havil·、大叶钩藤Uncarnia macrophylla Wail、毛钩藤Uncarnia hirsute Havil·、华钩藤 Uncarnia sinensis(01iv. )Havil和无柄果钩藤Uncarnia sessilifructus Roxb〇虽然都 被用于临床，然而由于种的不同，其中的化学成分组成就存在一定差异。药用钩藤在我国多 地均有生长，主要分布于贵州的有毛钩藤、钩藤和华钩藤三个种。
[0003] 现有技术中，文献"钩藤饮片HPLC指纹图谱研究"（谭超元等，中国实验方剂学杂志 第18卷第1期，2012年1月）一文中公开了以流动相乙腈(A)-0.385 %乙酸铵-冰乙酸水溶液 (B)梯度洗脱（0 ~10min，15% ~27%A;10min ~40min，27% ~35%A)、检测波长 245nm 的方 法建立钩藤饮片的HPLC指纹图谱;文献"黔产钩藤HPLC指纹图谱的研究"（王克英等，中国医 药指南第10卷第35期，2012年12月）一文中公开以流动相甲醇(A)-0.05%氨水(B)梯度洗脱 (0 ~45min，70% ~45%B;45min ~75min，45% ~35%B;75min ~90min，35% ~30%B)、流速 1. OmL/min、检测波长245nm的方法建立钩藤的HPLC指纹图谱;文献"钩藤生物碱HPLC指纹图 谱构建及不同基原种钩藤药材的鉴别"（黄样增等，中药材2014年02期，2012年12月）一文中 公开以流动相乙腈(A)-甲醇(B)-水（lOmmol/L三乙胺用磷酸调pH 7.5)(C)梯度洗脱（0~ 15min，5-35%A，45%~5%B;15min~25min，35-30%A，5%~25%B;25min~45min，30-30%八，25%~45%8;4511^11~5211^11，30-0%八，45%~95%8)、流速1.01111711^11、检测波长 245nm的方法建立钩藤的HPLC指纹图谱；文献"钩藤的HPLC指纹图谱研究"（黄艳萍等，中药 新药与临床药理第21卷第4期，2010年7月）一文中公开了以流动相甲醇(A)-lOmmol磷酸二 氛钱溶液(B)梯度洗脱（0~5min，80%B;5min ~50min，80% ~40%B;50min ~65min，40% ~ 90%B)、流速1.0mL/min、检测波长254nm的方法建立不同产地钩藤的HPLC指纹图谱;这些检 测方法虽然在一定程度上提高了钩藤的质量控制标准，但有的存在洗脱程序复杂、操作时 间长等缺点，另外对不同种的药用钩藤还需要区别对待，且不同时期采收的毛钩藤药材，其 分析评价还有待研究;为了更好的控制毛钩藤药材及其产品的质量，保证用药的安全性，更 好的指导生产，使其从药材采收、加工等各个环节的控制更加严格合理，使消费者能全面认 识产品质地，需要不断研究和摸索出更有利于药材及其产品鉴别和质量检测的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于，提供一种毛钩藤的指纹图谱检测方法。这种方法针对如下药 材及产品向相关的生产、检测机构提供检测的指标、检测的手段、技术方法等，以便更好的 控制该药材和产品的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导药材的采收、加工、生产，使 消费者能全面认识药材及产品质地，所针对的药材和产品为：
[0005] 毛钩藤药材，由毛钩藤药材单独制备而成的制剂产品，包括药品、保健品；制剂剂 型包括口服制剂、注射制剂、外用制剂、经皮吸收制剂等。
[0006] 本发明是这样构成的：
[0007] 毛钩藤的指纹图谱检测方法，包括以下内容：
[0008] (1)供试品溶液的制备:取待测毛钩藤样品，加氨水浸泡，再加入三氯甲烷，甲醇， 超声提取，取出，放冷，过滤，滤液置于水浴上挥干，残渣用甲醇溶解，摇匀，微孔滤膜过滤， 取续滤液作为供试品溶液；
[0009] (2)色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料:流动相A为乙腈，流动相 B为0.1 %~0.5 %氨水溶液，梯度洗脱，流速为0.8~1.2ml/min、检测波长为254~260nm、柱 温为20-30°(：，记录时间为50-801^11 ;
[0010] (3)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立毛钩藤的指纹图谱的测试手段;依 据10批或10批以上样品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留 时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有8~12 个；
[0011] (4)以（1)、（2)所述方法作为待测毛钩藤的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的 指纹图谱；
[0012] (5)将待测毛钩藤的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分 或全部：
[0013] I.计算待测毛钩藤的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90~1.00;
[0014] II.待测毛钩藤指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的20%;
[0015] III.待测毛钩藤指纹图谱中有5%~50%的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中 各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于± 50 %。
[0016] 其中，所述步骤（1)中毛钩藤样品可以为毛钩藤药材，还可以为毛钩藤单独制成 的、药品或保健品；所述药材样品通过阴干后切段、粉碎过60目筛、经45°C烘干至恒重的方 法制备。
[0017] 其中，所述步骤（2)中梯度洗脱参数为：0~45min，72 %~45 %B; 45min~60min， 45% ~37%B〇
[0018] 其中，所述步骤(3)中10批或10批以上样品可以为每月采收一次、连续采收12个月 及以上的毛钩藤药材，还可以为毛钩藤单独制成的药品或保健品，连续或不连续生产10批 及以上。
[0019] 进一步地，所述毛钩藤的指纹图谱检测方法，包括以下内容：
[0020] (1)供试品溶液的制备:取含毛钩藤为2.0g的待测毛钩藤样品粉末，加入l-3mL氨 水浸泡20-40min，再加入三氯甲烷20-30mL，甲醇2-8ml，超声提取45-75min，取出，放冷，过 滤，滤液置于50-60°C水浴上挥干，残渣用甲醇溶解于10mL量瓶中并定容至刻度，摇匀，用 0.45μπι微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
[0021 ] (2)色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料:流动相Α为乙腈，流动相 B为0 · 1 %~0 · 3%氨水溶液，梯度洗脱，参数为：0~45min，72%~45%B; 45min~60min， 45%~37%8，流速为0.8~1.21111/1^11、检测波长为254~26011111、柱温为20-30°(：，记录时间 为50_80min;
[0022] (3)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立毛钩藤的指纹图谱的测试手段;依 据10批或10批以上样品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留 时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有8~12 个；
[0023] (4)以（1)、（2)所述方法作为待测毛钩藤的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的 指纹图谱；
[0024] (5)将待测毛钩藤的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分 或全部：
[0025] I.计算待测毛钩藤的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90~1.00;
[0026] II.待测毛钩藤指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10%;
[0027] III.待测毛钩藤指纹图谱中有5%~50%的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中 各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于± 30 %。
[0028]更进一步地，所述毛钩藤的指纹图谱检测方法，