一种红枣中总糖含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种红枣中总糖含量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 红枣(Zizyphus jujuba Mill.)为鼠李科枣属植物成熟的果实，原产中国，是我国 的主要栽培种，现亚洲、欧洲、非洲、美洲和大洋洲的亚热带、温带地区的很多国家已有引 种，但尚少较大规模的经济栽培。红枣全身都是宝，其果实、种仁、根皮都有药用功效，在《名 医别录》、《神农本草》、《本草纲目》、《中医大辞典》等医学名著中均有医疗价值的记载，认为 红枣有健脾养胃、益血壮神之功效。现代医学研究表明，红枣具有促进免疫、抗氧化、降脂、 抗肿瘤等多种药理活性。近年来，随着科技的进步与社会的发展，人们的保健意识日益增 强，对保健食品的需求迅速增加。红枣以其特有的药食同源及丰富的营养成分、优良的保健 作用、显著的疗效，被人们誉为"天然的保健食品"，受到国内外众多科研人员的青睐。研究 显示，存在于大枣中的糖类主要以果糖、葡萄糖和蔗糖为主。目前研究主要采用紫外分光光 度计技术建立了大枣及枣属药用植物中包括糖类等多种化学成分的分析评价方法，但所测 定指标对照品分离制备难度大、分析成本高，作为大枣药材质量控制方法不易推广。截止目 前，《中国药典》尚未见收载用于大枣药材分析评价的有效方法，不利于大枣药材及其制剂 产品的质量控制。
[0003] 据文献报道，红枣中不仅含有糖、蛋白质、氨基酸、膳食纤维、矿质元素等常见的营 养物质，还含有三萜酸、黄酮、皂苷、腺苷、脂肪油、
[0004] 多种维生素等生理活性物质，其中糖类成分含量最为丰富，约占干物质的60 %~ 80%。目前对于红枣药材或者红枣提取物中总糖的测定方法是紫外分光光度计法，此方法 专属性不好，准确度差，容易受辅料的影响。因此寻找一种不易受辅料影响的具有较好专属 性和准确性的红枣总糖含量的测定方法已经成为近年来的研究热点之一。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明提供了一种红枣中总糖含量的检测方法。目前对于红枣药材、红 枣提取物、红枣成品中总糖的测定方法是紫外分光光度计法，如苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法 等，此方法是使用硫酸将聚糖水解为单糖，用比色法测定单糖的含量。当样品中含有环糊 精、麦芽糖糊精、淀粉等辅料时，使用此方法测定时硫酸也会将辅料水解为单糖，因此不能 准确测定。同时紫外分光度计法受人为影响较大，专属性不强，准确度差。本发明方法针对 上述问题，排除了红枣产品原料中其它辅料(如环糊精、麦芽糖糊精、淀粉等）的干扰，能 够准确测定红枣以及红枣产品原料中总糖的含量;通过对红枣总糖的含量测定方法进行线 性、精密度试验、重现性试验、回收率试验等以证明该检测方法科学有效，从而达到对红枣 总糖的含量测定起到质量控制的目的，也为红枣的规模化使用提供了技术支持。
[0006] 本发明的目的在于提供了一种红枣及其衍生品中总糖含量的检测方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明采用下述技术方案：
[0008] 一种红枣中总糖检测方法，其采用高效液相色谱仪进行测定。
[0009] 优选地，取供试品，所述供试品可为食用红枣、红枣药材、红枣制品或红枣提取物。
[0010] 优选地，将供试品加水回流提取，过滤，稀释，制得供试品溶液，注入高效液相色谱 仪进行测定，所述高效液相色谱条件为：以纯化水和色谱有机溶剂进行洗脱，根据高效液相 色谱结果获得红枣总糖的含量。
[0011] 优选地，所述过滤是经0.22μπι有机系滤膜过滤。
[0012] 优选地，所述供试品可以为食用红枣、红枣药材、红枣制品或红枣提取物。
[0013] 优选地，所述加水量为红枣供试品质量的20~100倍。
[0014]优选地，所述稀释倍数为4~6倍。
[0015]优选地，所述回流提取时间至少为lh。
[0016] 优选地，如果供试品为红枣提取物时，直接加提取物质量的300~500倍纯化水溶 解，过滤后注入高效液相色谱仪进行分析测定。
[0017] 优选地，所述高效液相色谱仪使用的色谱柱为碳水化合物色谱柱或者氨基柱。
[0018] 优选地，所述高效液相色谱条件中的检测器可以为示差检测器或者蒸发光散射检 测器。
[0019] 优选地，所述高效液相色谱条件中流动相中水与色谱有机溶剂的体积比为5:5~9 :1〇
[0020] 优选地，所述高效液相色谱条件中色谱有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇中的一种或 几种。
[0021] 优选地，所述高效液相色谱条件的流动相流速为0.5~1.2mL/min，柱温为20~50 Γ。
[0022] 所述的检测方法，所述高效液相色谱结果的色谱图中可以观察得到果糖、葡萄糖 和蔗糖色谱峰，此三个化合物的色谱峰具有较好的对称性(对称因子为0.8~1.2)，并与杂 质明显分离开来，分离度均大于1.5;三个化合物的含量之和与红枣总糖含量(紫外分光光 度计法测定结果)相当。
[0023] 优选地，高效液相色谱的检测条件为:仪器为Waters HPLC 1525series，色谱柱为 Prevail Carbohydrate ES碳水化合物色谱柱（4.6*250mm，5ym)，柱温为20~50°C，流速为 0.5~1.2mL/min，进样体积为20yL;Waters 2424蒸发光散射检测器设定参数为:漂移管温 度为80°C，气体压力为40Psi。
[0024]优选地，流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为乙腈，流动相B为纯化水。 [0025]优选地，所述梯度洗脱的条件为:0~26min，流动相A相的体积分数保持为80%，B 相的体积分数保持为20% ; 26~28min，流动相A相的体积分数由80%降为20%，流动相B相 的体积分数由20 %升至80 % ; 28~33min，流动相A相的体积分数保持20%，流动相B相的体 积分数保持80% ; 33~35min，流动相A相的体积分数由20%升为80%，流动相B相的体积分 数由80%降至20% ; 35~40min，流动相A相的体积分数保持80%，流动相B相的体积分数保 持 20 %。
[0026] 果糖、葡萄糖及鹿糖对应的保留时间分别约为9.2min、12.6min和19.9min。
【附图说明】
[0027] 图1:对照品高效液相色谱图；
[0028] 图2:山东红枣药材总糖高效液相色谱图；
[0029] 图3:甘肃红枣药材总糖高效液相色谱图；
[0030] 图4:和田红枣药材总糖高效液相色谱图；
[0031]图5:麦芽糖糊精高效液相色谱图。 实施例
[0032]下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法 仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方 法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明，实施例中用到的所有原料和 溶剂均贝勾自 Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents公司。
[0033] 实施例1:
[0034] 精密称取果糖、葡萄糖、蔗糖对照品各20mg左右，置于lOmL容量瓶中，用纯化水溶 解并稀释至刻度，浓度为2000yg/mL，并继续稀释至100yg/mL、200yg/mL、400yg/mL、800yg/ mL、1600yg/mL，分别用0.22μηι有机系滤膜过滤，注入高效液相色谱仪进行检测。果糖、葡萄 糖、蔗糖的标准曲线，分别以各自的浓度的对数值为横坐标，峰面积的对数值为纵坐标，绘 制标准曲线，得到方程为：
[0035] 果糖： Υ=1·6513Χ+1·2696 r = 0.9998
[0036] 葡萄糖：Y= 1 · 6958X+0 · 2604 r = 1
[0037] 鹿糖： Y= 1 · 6922X+0 · 9644 r = 1
[0038] 高效液相色谱的检测条件如下所示：
[0039] 仪