抗病毒口服液的质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种抗病毒口服液的质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 抗病毒口服液收载于《中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第二册》 WS3-(X-39)-92(z)，（中华人民共和国卫生部药典委员会编，1992年出版），目前载入2015年 版《中国药典》。产品为复方制剂，它是由板蓝根129g、石膏57g、芦根61g、地黄32g、郁金25g、 知母25g、石菖蒲25g、广藿香29g、连翘46g的水提取物加药用辅料和水制成1000ml的抗病毒 口服液。具有清热祛湿，凉血解毒之功效，临床上用于风热感冒、温病发热引起的上呼吸道 感染、流感及流行性腮腺炎等病毒感染性疾患，疗效显著。
[0003] 复方中成药由多味药材提取而成，有效成分复杂，建立较为全面的产品质量评价 方法，提高质量标准，是保证产品疗效的主要方法之一。有效成分的含量与药材的产地、采 集时间、保存质量，药材的提取方法和工艺控制条件等多种因素有关，如板蓝根是该药物处 方中的君药，其药材质量与活性成分含量有密切关系，板蓝根有南板蓝根和北板蓝根，其所 含的有效成分又不同。北板蓝根来源于十字花科植物菘兰，含抗病毒的特征性成分(R，S)_ 告依春(又称表告依春）。南板蓝根来源于爵床科植物马蓝，不含(R，S)_告依春，其抗病毒的 药理活性远低于北板蓝根。连翘根据其采收期不同，可分为青翘和老翘两种，但均为连翘。 果实初熟尚带绿色时采收，用沸水煮片刻或蒸熟后晒干，习称"青翘"；果实熟透时采收晒 干，习称"老翘"。近年来的研究表明，青翘中总黄酮、连翘酯苷类成分、连翘苷含量都高于老 翘。石膏知母相须为用，取知母清热去火，生津润燥之功。芒果苷为知母主要成分之一，具有 抗病毒活性。目前抗病毒口服液生产企业众多，导致产品质量鱼龙混杂，甚至有的企业产品 不按标准要求投料，则产品的质量就更无法保证在临床治疗效果。
[0004] 中国专利CN201010183008公开了一种抗病毒口服液的质量检测方法，其通过HPLC 一次性对抗病毒口服液中的（R，S)_告依春、连翘苷、连翘酯苷A、连翘酯素四个成分进行了 含量测定。但是在实际应用中连翘酯苷A的分离度不佳，方法重现性差异较大，不便于推广 应用;并且其所选择的活性成分仅来自于复方中的板蓝根和连翘，对复方的活性表征不具 有代表性。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是提供一种抗病毒口服液的质量检测方法，其通过HPLC方法对 所述口服液中（R，S)_告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷H、连翘酯苷A、松脂酚-4-0-葡萄 糖苷和连翘苷七个活性成分进行含量测定。
[0006] 在本发明的一个实施方案中，所述HPLC方法中，流动相为三相，分别为含0.1 %磷 酸的水(v/ν)、甲醇和乙腈。
[0007] 在本发明的另一个实施方案中，在每毫升的抗病毒口服液中（R，S)_告依春不低于 l〇yg，芒果苷不低于l〇yg，连翘酯苷I不低于l〇〇yg，连翘酯苷Η不低于12〇yg，连翘酯苷A不低 于lOOyg，松脂酸-4-0-葡萄糖苷不低于3〇yg，连翘苷不低于5〇yg。
[0008] 在本发明具体的实施方案中，所述HPLC的具体条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;洗脱是以含0.1%磷酸的水(v/ν)、甲醇和乙腈组成的流动相进行梯度洗脱，检测 波长为254nm，流速为lml/min，柱温30°C ;具体洗脱程序如下表所示：
[0009]
[0010] 在本发明中，所述抗病毒口服液的质量检测方法还包括对照品溶液制备、供试品 溶液的制备和根据峰面积计算成分含量等步骤;具体如下：
[0011] 对照品溶液制备:取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄糖 苷，连翘苷对照品适量，精密称定，分别置l〇ml量瓶，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 得到(R，S)_告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷浓度为2.31mg/ ml，0· 30mg/ml，7· llmg/ml，8·05mg/ml，7· 50mg/ml，2·01mg/ml，2·88mg/ml的对照品储备液。
[0012] 精密量取(R，S)_告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷 对照品溶液2ml，6ml，4ml，3ml，4ml，6ml，2ml置20ml量瓶，加70 %甲醇稀释至刻度，摇匀，得 混合对照品母液。
[0013] 供试品溶液的制备:精密量取本品25ml，用饱和正丁醇萃取4次，每次25ml，合并正 丁醇层，蒸干，残渣加70%甲醇溶解，置10ml量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
【附图说明】
[0014] 图1:本发明实施例2的高效液相图谱，峰1为(R，S)_告依春，峰2为芒果苷，峰3为连 翘酯苷I，峰4为连翘酯苷Η，峰5为连翘酯苷A，峰6为松脂酚-4-0-葡萄糖苷，峰7为连翘苷；
[0015] 图2:0.1 %磷酸水和乙腈二相流动相系统获得的高效液相图谱，峰1为(R，S)_告依 春，峰2为芒果苷。
【具体实施方式】
[0016] 下面将进一步的举例如图1-2来详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是 对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保 护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
[0017]实施例!抗病毒口服液的制备
[0018]处方:板蓝根129g、石膏57g、芦根61g、地黄32g、郁金25g、知母25g、石菖蒲25g、广 藿香29g、连翘46g。
[0019] 制法：以上九味药材，加水提取二次，第一次加8倍量水，煎煮3小时，同时收集挥发 油及挥发油乳浊液，加入羟丙基-β_环糊精包合;第二次加6倍量水，煎煮1小时20分钟，合并 煎煮液，浓缩至相对密度1.08 (60 °C )，加85 %以上的乙醇使含醇量达70 %，静置24小时，滤 过，收集滤液，将滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.10(60°C)，滤过，加入挥发油包合物 及蜂蜜、蔗糖，等，补加纯化水至l〇〇〇ml，混匀，滤过至澄清，灌封，灭菌，即得。
[0020] 药材来源：
[0021 ]板蓝根:为十字花科植物菘蓝的干燥根，黑龙江产。
[0022]连翘:为木犀科植物连翘的干燥果实，秋季果实初熟尚带绿色时采收，习称青翘， 山
[0023] 西产。
[0024] 石膏:为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏。
[0025] 芦根:为禾本科植物芦苇的干燥根茎，河北产。
[0026] 地黄:为生地黄，玄参科植物地黄的干燥块根，河南产。
[0027]郁金:为姜科植物姜黄的干燥块根，习称"黄丝郁金"，四川产。
[0028]知母:百合科植物知母的干燥根茎，河北产。
[0029]石菖蒲:为天南星科植物石菖蒲的干燥根茎，浙江产。
[0030]广藿香:为唇形科植物广藿香的干燥地上部分，广州产。
[0031] 实施例2抗病毒口服液的质量检测
[0032] 1)对照品溶液制备:取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄 糖苷，连翘苷对照品适量，精密称定，分别置l〇ml量瓶，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，得到（R，S)_告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷浓度为 2 · 3 lmg/ml，0 · 30mg/ml，7 · 1 lmg/ml，8 · 05mg/ml，7 · 50mg/ml，2 · 0 lmg/ml，2 · 88mg/ml 的对照品 储备液。
[0033] 精密量取(R，S)_告依