一种同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物分析领域，特别涉及一种金匮肾气片中同时检测马钱苷、京尼平 甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚含量的方法。
【背景技术】
[0002] 金匮肾气片系六味地黄系列中成药，处方来自"医圣"张仲景之手，记载于《金匮要 略》。金匮肾气片用于肾虚水肿，腰膝酸软，小便不利，畏寒肢冷。不仅有六味地黄滋阴补肾 的作用，而且能在补阴中助阳，从而达到阴阳同补的目的。
[0003] 金匮肾气片现行标准收载于国家药品标准WS-10439(ZD-0439)-2002-2011Z，其鉴 别标准收载了 1个显微鉴别、3个薄层鉴别和2个含量测定，而金匮肾气片处方中有10味药。 通过研究发现多种药味的薄层色谱之间均存在阴性干扰，尚无有效分离方法进行鉴别其有 效成分，导致现有的质量控制方法未能有效实现产品质量的控制。且现有的2个有效成分的 含量测定，需要分别提取供试液及采用不同的色谱系统检测，实验步骤繁琐，且不能全面的 监测到产品的质量水平。
【发明内容】
[0004] 针对上述技术问题，本发明提供一种同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的 方法。本方法中所述有效成分为马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚，所述方 法为高效液相色谱法，所述色谱条件为：
[0005] 反相色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;进样量:10yl;
[0006] 流动相:流动相A:乙腈、流动相B:体积百分比为0.1%的磷酸水溶液，流动相A的体 积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100%，进行线性梯度洗脱，所述线性梯 度洗脱、波长与流速如下：
[0007] 梯度1 ---0~15min，流动相A与流动相B的体积百分比为（10~20 % ): (90~80 % )， 流速为l.Oml/min，检测波长为230~245nm;
[0008] 梯度2---15~30min，流动相A与流动相B的体积百分比为〔（10~20%) - (65~ 40% )〕：〔（90~80% ) - (35~60% )〕，流速为 1 .Oml/min，检测波长为230~245nm;
[0009] 梯度3---30~55min，流动相A与流动相B的体积百分比为（40~65%) : (60~ 35% )，流速为1 ?0~1 ? 2ml/min，检测波长为284~294nm。
[0010] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述线性梯度洗脱、波长与流速进一步为：
[0011 ] 梯度1 -0~15min，流动相A与流动相B的体积百分比为15%:85%，流速为1.0ml / min，检测波长为240nm;
[0012] 梯度215~30min，流动相A与流动相B的体积百分比为（15%-55%):(85% - 45% )，流速为1 .Oml/min，检测波长为240nm;
[0013] 梯度3---30~55min，流动相A与流动相B的体积百分比为55% :45%，流速为 1 ? 2ml/min，检测波长为 286nm。
[0014] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述线性梯度洗脱、波长与流速还可以进一步为：
[0015] 梯度10~15min，流动相A与流动相B的体积百分比为10% :90%，流速为1.0ml/ min，检测波长为235nm;
[0016] 梯度2---15~30min，流动相A与流动相B的体积百分比为（10%-65%):(90% - 30% )，流速为1 .Oml/min，检测波长为245nm;
[0017] 梯度3---30~55min，流动相A与流动相B的体积百分比为65% :35%，流速为 1 ? 2ml/min，检测波长为 294nm。
[0018] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述线性梯度洗脱中梯度3后面还可以添加一个过渡梯度，所述过渡梯度的流动相比例与 所述梯度1相同，并冲洗至基线平稳。以便连续进样。
[0019] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 对照品溶液的配置方法如下:精密称取马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚 对照品，用体积百分比为80%的甲醇溶液溶解并稀释，使每lml对照品溶液中含有0.10~ 0 ? 14mg马钱苷、0 ? 04~0 ? 08mg京尼平甘酸、0 ? 07~0 ? 1 lmg毛蕊花糖苷、0 ? 15~0 ? 25mg桂皮醛 和0.15~0.2511^丹皮酚。
[0020] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述金匮肾气片的前处理方法为：取金匮肾气片供试品除去包衣，研细，所得细粉能通过 100目筛，取细粉1.8~2.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积百分比为80 %的甲 醇25ml，称定重量，45 °C下浸泡1.5小时，超声15min后放至室温，再称定重量，用体积百分比 为80 %的甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
[0021] 本发明另提供一种同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法。本方法中所 述有效成分为马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚，所述方法为高效液相色 谱法，所述色谱条件为：
[0022]反相色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;进样量:10yl;
[0023]流动相:流动相A:乙腈、流动相B:体积百分比为0.1%的磷酸水溶液，流动相A的体 积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100%，进行线性梯度洗脱，所述线性梯 度洗脱、波长与流速如下：
[0024] 梯度1 ---0~35min，流动相A与流动相B的体积百分比为〔（5~15 % ) - (65~ 45%)〕：〔（95~85%) - (35~55%)〕，流速为 1.0~1.2ml/min，检测波长为230~245nm; [0025] 梯度2-35~65min，流动相A与流动相B的体积百分比为（40~65%) : (60~ 35% )，流速为1 ?0~1 ? 2ml/min，检测波长为284~294nm。
[0026]作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述线性梯度洗脱、波长与流速进一步为：
[0027] 梯度1---0~35min，流动相A与流动相B的体积百分比为（5%-55%): (95% - 45% )，流速为1 .Oml/min，检测波长为235nm;
[0028] 梯度2--35~65min，流动相A与流动相B的体积百分比为55% :45%，流速为 1 ? 2ml/min，检测波长为 286nm。
[0029] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述线性梯度洗脱、波长与流速还可以进一步为：
[0030] 梯度1---0~35min，流动相A与流动相B的体积百分比为（10%-60%):(90% - 40% )，流速为1 .Oml/min，检测波长为240nm;
[0031] 梯度2--35~65min，流动相A与流动相B的体积百分比为60% :40%，流速为 1 .Oml/min，检测波长为 290nm。
[0032] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 所述线性梯度洗脱中梯度2后面还可以添加一个过渡梯度，所述过渡梯度的流动相比例与 所述梯度1相同，并冲洗至基线平稳。以便连续进样。
[0033] 作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中， 对照品溶液的配置方法如下:精密称取马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚 对照品，用体积百分比为80%的甲醇溶液溶解并稀释，使每lml对照品溶液中含有0.10~ 0 ? 14mg马钱苷、0 ? 04~0 ? 08mg京尼平甘酸、0 ? 07~0 ? 1 lmg毛蕊花糖苷、0 ? 15~0 ? 25mg桂皮醛 和0.15~0.2511^丹皮酚。
[0034] 作为实施方式之一，本发明