一种基于体内过程的中成药质检指标辨析方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药药代动力学领域，尤其涉及一种基于体内过程的中成药质检指标 辨析方法。
【背景技术】
[0002] 中成药是以中医药理论为指导，以中药材为原料，按规定的处方和工艺加工而成 供临床使用的药物。目前，中成药的质量控制多以单一活性成分或指标成分作为质量控制 指标，用以判断中成药是否"合格"。但中药的作用并不是单一成分或几个活性成分简单相 加，中成药的疗效是多种成分协同作用的结果。显然模仿化学药用单一指标是难以解决中 药质量控制问题的。
[0003] 近年来也有很多研究关注到了这个问题，通过有效成分含量测定方法来建立中成 药质量标准，例如：
[0004] 申请号为200710187422.4的中国发明专利公开了一种参麦注射液的化合物成分 的制备及其在治疗心脑血管疾病中的应用，该发明同时也公开了一种参麦注射液的质量控 制方法，具体为对化合物VI、Vila、VIIb和活性化合物甲基麦冬二氢高异黄酮B、川麦冬枣皂 苷A以及人参阜苷Rbl进行定量控制。
[0005] 申请号为201410068578.0的中国发明专利公开了一种中药材多指标成分含量的 快速测定方法，其利用偏最小二乘回归方法建立水蛭或地龙药材的光谱铺其多指标(水分、 可溶性固形物、次黄嘌呤、总糖、多糖、有利氨基酸和多肽)化学值之间的近红外定量分析模 型，实现水蛭和地龙药材关键质控指标的快速测定。
[0006] 申请号为201410792758.3的中国发明专利公开了一种连翘药材多指标同时快速 检测方法，包括采集连翘药材，用高效液相色谱法测定连翘中芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的 含量，采集连翘药材粉末的近红外光谱数据并预处理，建立连翘药材中水分、浸出物、芦丁、 连翘酯苷A及连翘苷含量的快速监测模型，所建模型用于同时快速测定连翘要爱个质控指 标的含量，建立实时放行的定量标准。
[0007] 以上发明的中成药质控均采用了多种有效成分作为指标，但是其选取的指标基本 仍旧是依据药物中成分含量来决定的，但是由于分析技术和客观条件多种限制，这些成分 未经体内药代动力学研究，没有确切的体内时量-时效关系，仍不能全面控制中成药的质 量。因此现有技术的中成药的质控指标在一定程度上不够合理，在所选择的多种指标中，可 能存在一定的盲目性，即所选取多种指标在表征中成药临床药理、药效方面仍然存在明显 的不足。同时在选取指标时可能混入一些不合理的指标，造成了对中成药进行质检时工作 量大，耗时长，且成本高。
【发明内容】
[0008] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于体内过程的中成药质检指标辨析 方法。本发明方法通过对中成药中各化合物成分的体内过程研究(药时曲线、组织分布和累 积排泄），再进行PCA分析，从而得到中成药中具有代表性的化合物成分，并以这些化合物成 分作为中成药的质检指标。
[0009] 根据本发明方法选取的中成药质检指标准确度、合理性更高，且能够更加准确地 全面控制中成药的质量，能够更加充分地表征中成药临床药理、药效等方面。此外，由于排 除了原先多种质检指标中不可理的部分，使得中成药的质检指标更加精简，因此质检时工 作量小，耗时短，成本低。
[0010] 本发明的具体技术方案为：一种基于体内过程的中成药质检指标辨析方法，包括 以下步骤：
[0011] 1)、样品采集:选用实验鼠类作为样品采集对象，对实验鼠类注射中成药注射液， 分别采集实验鼠类的血浆样品、组织样品、尿样品、粪样品、胆汁样品；
[0012] 2)、样品检测：将步骤1)采集的每一种组织样品分别添加到生理盐水中在冰浴条 件下制备成组织匀浆，将部分粪样品加入生理盐水中在冰浴条件下制备成粪匀浆;选择所 述中成药注射液中的n个化合物成分作为定量检测目标，然后对血浆样品、各组织匀浆、尿 样品、粪匀浆、胆汁样品进行LC/MS/MS分析;其中所述n为大于1的自然数；
[0013] 3)、数据处理:根据LC/MS/MS分析中测得的各化合物成分的血药浓度-时间数据绘 制各化合物成分的平均药时曲线，采用药代动力学软件DAS2.1.1程序对数据进行处理，按 非房室模型法分析，进行药代动力学参数的计算;其中Tmax和Cmax均采用实测值，AUC采用 梯形法计算，tl/2根据药-时曲线末端消除相计算;根据AUC值绘制n种化合物成分在各脏器 的组织分布图；根据尿、粪、胆汁中药物浓度计算尿、粪、胆汁中累积排泄率，绘制各化合物 成分的评价累积排泄率-时间曲线；
[0014] 4)、数据分析:根据血药浓度-时间的数据得到数据矩阵P，根据血浆分布和各组织 分布的数据得到数据矩阵T，根据尿、粪、胆汁的累计排泄数据得到数据矩阵E，将矩阵P、矩 阵T、矩阵E标准化后合并成一个矩阵，然后进行PCA分析，建立scores图，根据scores图中各 化合物成分的分布，将各化合物成分分区，然后从每个分区中各筛选出代表成分，并将筛选 出的代表成分作为该中成药的质检指标。
[0015] 作为优选，在步骤4)中建立scores图后，根据scores图中各化合物成分的分布，计 算92-98%置信椭圆，画于scores图中，将各化合物成分分区。
[0016] 作为进一步的优选，在步骤4)中建立scores图后，根据scores图中各化合物成分 的分布，计算95%置信椭圆，画于scores图中，将各化合物成分分区。
[0017] 作为优选，在步骤4)中对scores图中的各化合物成分分区后，对每个分区中代表 成分的筛选方法为:选取同一分区中含量最高的化合物作为该分区的代表成分。这样的好 处是在后续测定含量时，含量较高的化合物测定相对容易，便于检测。
[0018]作为优选，所述实验鼠类为SD大鼠，且所述SD大鼠为雄性，SPF级，体重200-240g。 [0019]作为优选，所述n选自8-16的自然数。
[0020]作为优选，步骤1)中各样品的具体采集方法如下：
[0021]血浆样品采集:选择SD大鼠若干只，给药前禁食12h，自由饮水;对每只SD大鼠经尾 静脉注射给予中成药注射液5mL/kg，分别于给药前Oh和给药后的m个时间点对每只SD大鼠 自前眼底静脉丛取等量的血置于肝素化离心管，离心分取血浆，冷冻保存待测。
[0022]组织样品采集:选择SD大鼠若干只，随机分为112组，且每组数量相同，给药前禁食 12h，自由饮水;对每只SD大鼠经尾静脉注射给予中成药注射液10mL/kg，分别于给药前Oh和 给药后m-l个时间点取血后处死，其中每个时间点的处死对象为同一组的所有SD大鼠，处 死后立即分别解剖采集每只SD大鼠的脑、心、肝、脾、肺、胃、肾、脂肪、肌肉、睾丸、膀胱、大 肠、小肠，用生理盐水冲净采集物表面残留血液及内容物后，称重，冷冻保存。
[0023]尿、粪样品采集:选择SD大鼠若干只，给药前禁食12h，自由饮水;对每只SD大鼠经 尾静脉注射给予中成药注射液10mL/kg，分别于给药前12h-0h和给药后m个时间点收集每 只SD大鼠的尿、粪样品，分别称重、测量体积，冷冻保存。
[0024]胆汁样品采集:选择SD大鼠若干只，给药前禁食12h，自由饮水;用水合氯醛对每只 SD大鼠麻醉后，行胆插管手术，对每只SD大鼠经尾静脉注射给予中成药注射液10mL/kg后， 分别于给药前Oh和给药后n 4个时间点采集每只SD大鼠的胆汁样品，测量体积，冷冻保存。 [0025]作为优选，所述m选自8-16的自然数，所述n 2选自6-10的自然数，所述n3选自3-7的 自然数，所述m选自8-12的自然数，所述n 5选自5-9的自然数。
[0026] 作为优选，所述m为12,所述112为8,所述n3为5,所述n4为10;且m个时间点分别为 0.03h，0.1711，0.511，111，1.511，311，511，811，1211，2411，4811，7211;112-1个时间点分别为5111111， 15min，lh，2h，4h，24h和48h; n3个时间点分别为0_4h，4-10h，10-24h，24-48h，48-72h; ru个时 间点分别为 〇-lh