一种哌马色林中有机杂质的检测方法
【专利摘要】本发明提供了一种哌马色林中有机杂质的检测方法，包括：对哌马色林进行高效液相色谱检测，所述高效液相色谱检测过程中的流动相包括水相和有机相，所述水相为酸的水溶液，所述有机相为酸的有机溶液，所述水相中的酸和有机相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸；所述有机溶液中的溶剂包括甲醇或乙腈；所述有机杂质为式I所示结构的化合物。本发明提供的哌马色林中有机杂质的检测方法，对哌马色林进行高效液相色谱检测的过程中采用特定物质的水相和有机相组成流动相，这种流动相能够对有机杂质进行较好的分离，使本发明提供的方法能够准确检测出哌马色林中的有机杂质。此外，本发明提供的哌马色林中有机杂质的检测方法稳定、重复性好、专属性强。
【专利说明】
一种哌马色林中有机杂质的检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及哌马色林技术领域，尤其涉及一种哌马色林中有机杂质的检测方法。
【背景技术】
[0002] 目前全世界帕金森氏病患者约七百万到一千万，中国就有260万，居世界第一，每 年还要增加10万新发病患者。50%以上的帕金森氏病患者曾有过精神症状(PDP)。这些精神 症状主要表现为幻觉和妄想，这给帕金森氏病患者的治疗和护理带来更大挑战。阿卡迪亚 (Acadia Pharmaceuticals)是位于美国圣地亚哥的一家专注于为神经系统及相关的中枢 神经系统紊乱疾病研究新疗法的生物制药公司，哌马色林/匹莫范色林（通用名： Pimavanserin，商品名：Nuplazid)是阿卡迪亚制药公司自主研发的专利药，用于治疗帕金 森氏病精神症状，为非多巴胺神经递质类似物，可以选择性阻断5羟色胺2A受体而不影响多 巴胺的作用。哌马色林/匹莫范色林(Pimavanserin，Nuplazid)于2014年9月3日获美国食品 药品监督管理局(FDA)授予突破性疗法认证。突破性疗法认证是由H)A创建的，旨在加速开 发及审查治疗严重的或威胁生命的疾病的新药。阿卡迪亚(Acadia)制药公司将于2014年底 前向FDA递交哌马色林/匹莫范色林(Pimavanserin)的新药申请。
[0003] 药物中的杂质指任何影响药物纯度的物质，包括有机杂质、无机杂质和残留溶剂。 无机杂质和残留溶剂的研究及检测方法相对比较成熟，方法的通用性比较强，控制标准也 比较明确，从技术审评实践来看，无机杂质和残留溶剂在申报注册药物中已得到了较好的 研究与控制。与无机杂质及残留溶剂相比，有机杂质的研究与控制要复杂得多，在杂质的分 离鉴定、杂质来源分析、杂质安全性研究、杂质限度确定等方面，都需要结合药物的结构特 点、制备工艺、贮藏稳定性、临床应用特点等进行大量的深入细致的研究。
[0004] 哌马饵林药物牛产忖趕中
会引入县有式T所示结构的有机杂质：
[0006] 这种有机杂质的结构和哌马色林的结构极为相近，会严重影响到药品的纯度，是 决定药品合格与否的关键因素之一。因此，准确检测哌马色林中有机杂质的含量对于控制 药物产品质量具有重要的意义。
[0007] 目前，还未见对哌马色林中有机杂质进行检测的相关报道。
【发明内容】
[0008] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种哌马色林中有机杂质的检测方法，本发明 提供的方法能够准确检测出哌马色林中的有机杂质。
[0009] 本发明提供了一种哌马色林中有机杂质的检测方法，包括：
[0010] 对哌马色林进行高效液相色谱检测，得到哌马色林中有机杂质的含量;所述高效 液相色谱检测过程中的流动相包括水相和有机相，所述水相为酸的水溶液，所述有机相为 酸的有机溶液，所述水相中的酸和有机相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有机溶液 中的溶剂包括甲醇或乙腈;所述有机杂质为式I所示结构的化合物：
[0012]优选的，酸的水溶液的质量浓度为0.05%~0.15%。
[0013]优选的，所述酸的有机溶液的质量浓度为0.05%~0.15%。
[0014] 优选的，所述水相和有机相的质量比为(50~60): (50~40)。
[0015] 优选的，所述高效液相检测过程中流动相的流速为0.5mL/min~1.5mL/min。
[0016]优选的，所述高效液相色谱检测过程中采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱 柱，所述梯度洗脱的过程为：
[0017] 在〇~25min，水相在流动相中的质量含量由80%~90%降低到45%~55%，有机 相在流动相中的质量含量由10%~20%提高到45%~55% ;
[0018] 在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由45%~55%降低到10%~0,有机 相在流动相中的质量含量由45%~55%提高到90%~100% ;
[0019] 在35min~38min，水相在流动相中的质量含量保持10 %~0，有机相在流动相中的 质量含量保持90 %~100 % ;
[0020] 在38min~40min，水相在流动相中的质量含量由10 %~0提高到80 %~90 %，有机 相在流动相中的质量含量由90%~100%降低到10%~20% ;
[0021] 在4〇111111~45111111，水相在流动相中的质量含量保持80%~90%，有机相在流动相 中的质量含量保持10%~20%。
[0022] 优选的，所述高效液相色谱检测过程中使用的色谱柱为C8色谱柱或C18色谱柱。 [0023]优选的，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱柱温为25°C~45°C。
[0024]优选的，所述高效液相色谱检测过程中的检测器为紫外检测器。
[0025]优选的，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为200nm~240nm〇 [0026]本发明提供的哌马色林中有机杂质的检测方法，对哌马色林进行高效液相色谱检 测的过程中采用特定物质的水相和有机相组成流动相，这种流动相能够对有机杂质进行较 好的分离，使本发明提供的方法能够准确检测出哌马色林中的有机杂质。此外，本发明提供 的哌马色林中有机杂质的检测方法稳定、重复性好、专属性强。
【附图说明】
[0027] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据 提供的附图获得其他的附图。
[0028] 图1为本发明实施例1中哌马色林的制备工艺流程图；
[0029] 图2为本发明实施例1制备得到的哌马色林的核磁共振谱图；
[0030] 图3为本发明实施例2检测哌马色林后得到的高效液相色谱图；
[0031 ]图4为本发明实施例3检测哌马色林后得到的高效液相色谱图；
[0032] 图5为本发明实施例4检测哌马色林后得到的高效液相色谱图；
[0033] 图6为本发明比较例1检测哌马色林后得到的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0034] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0035] 本发明提供了一种哌马色林中有机杂质的检测方法，包括：
[0036] 对哌马色林进行高效液相色谱检测，得到哌马色林中有机杂质的含量;所述高效 液相色谱检测过程中的流动相包括水相和有机相，所述水相为酸的水溶液，所述有机相为 酸的有机溶液，所述水相中的酸和有机相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有机溶液 中的溶剂包括甲醇或乙腈;所述有机杂质为式I所示结构的化合物：
[0038] 本发明对哌马色林进行高效液相色谱检测。本发明对所述哌马色林的来源没有特 殊的限制，可由市场购买获得，也可采用本领域技术人员熟知的方法制备得到。在本发明的 实施例中，所述哌马色林的制备方法为：
[0039] 将式1所示结构的化合物和式2所示结构的化合物进行反应，得到哌马色林，所示 哌马色林具有式II所示的结构：
[0042] 在本发明的实施例中，式1所示结构的化合物和式2所示结构的化合物反应的温度 为20°C~30°C。在本发明的实施例中，式1所示结构的化合物和式2所示结构的化合物反应 的时间为1小时~2小时。在本发明的实施例中，式1所示结构的化合物和式2所示结构的化 合物的摩尔比为1:1。本发明对式1所示结构的化合物和式2所示结构的化合物的来源没有 特殊的限制，可由市场购买获得，也可按照本领域技术人员熟知的方法制备得到。在本发明 的实施例中，所述式1所示结构的化合物的制备方法为：
[0043] 将式3所示结构的化合物和式4所示结构的化合物进行反应，得到式1所示结构的 化合物：
[0045] 在本发明的实施例中，式3所示结构的化合物和式4所示结构的化合物反应的温度 为10°C~35°C。在本发明的实施例中，式3所示结构的化合物和式4所示结构的化合物反应 的时间为1小时~2小时。在本发明的实施例中，式3所示结构的化合物和式4所示结构的化 合物的质量比为1:1.3。本发明对式3所示结构的化合物和式4所示结构的化合物的来源没 有特殊的限制，可由市场购买获得。
[0046] 在本发明中，所述高效液相色谱检测以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有 不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相栗入装有固定相的色谱柱， 在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
[0047] 在本发明中，所述高效液相色谱检测过程中的流动相包括水相和有机相。在本发 明中，所述水相为酸的水溶液，所述水相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸。在本发明的实 施例中，所述水相中的酸包括甲酸或三氟乙酸;在另外的实施例中，所述水相中的酸包括三 氟乙酸。
[0048]在本发明的实施例中，所述酸的水溶液的质量浓度为0.05 %~0.15 % ;在其他的 实施例中，所述酸的水溶液的质量浓度为0.08%~0.12% ;在另外的实施例中，所述酸的水 溶液的质量浓度为〇. 1%。在本发明的实施例中，所述水相为质量浓度为〇. 1 %的三氟乙酸 水溶液。
[0049]在本发明中，所述有机相为酸的有机溶液，所述有机相中的酸包括甲酸、三氟乙酸 或磷酸，所述有机溶液中的溶剂包括甲醇或乙腈。在本发明中，所述有机相中的酸和水相中 的酸需采用同一种酸。在本发明的实施例中，所述有机溶液中的溶剂包括乙腈。在本发明的 实施例中，所述酸的有机溶液的质量浓度为0.05%~0.15% ;在其他的实施例中，所述酸的 有机溶液的质量浓度为0.08%~0.12% ;在另外的实施例中，所述酸的有机溶液的质量浓 度为0.1 %。在本发明的实施例中，所述有机相为质量浓度为0.1 %的三氟乙酸的乙腈溶液。 [0050]在本发明的实施例中，所述水相和有机相的质量比为(50~60): (50~40);在其他 的实施例中，所述水相和有机相的质量比为(52~58): (48~42);在其他的实施例中，所述 水相和有机相的质量比为(54~56): (46~44);在另外的实施例中，所述水相和有机相的质 量比为 55.5:45.5。
[00511在本发明的实施例中，所述高效液相检测过程中流动相的流速为0.5 mL /m i n~ 1.5mL/mi n;在其他的实施例中，所述高效液相检测过程中流动相的流速为0.8mL/mi n~ 1.2mL/min;在另外的实施例中，所述高效液相检测过程中流动相的流速为lmL/min。
[0052] 在本发明的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中可采用梯度洗脱的方式使流 动相通过色谱柱，以提高柱效、改善检测器的灵敏度。在本发明的实施例中，所述梯度洗脱 的过程为：
[0053] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由80%~90%降低到45%~55%，有机 相在流动相中的质量含量由10 %~20 %提高到45 %~55 % ;在25min~35min，水相在流动 相中的质量含量由45%~55 %降低到10 %~0,有机相在流动相中的质量含量由45%~ 55 %提高到90 %~100% ;在35min~38min，水相在流动相中的质量含量保持10 %~0，有机 相在流动相中的质量含量保持90%~100%;在38111；[11~401]1；[11，水相在流动相中的质量含量 由10%~0提高到80%~90%，有机相在流动相中的质量含量由90%~100%降低到10%~ 20 % ;在40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持80 %~90 %，有机相在流动相中的 质量含量保持10%~20%。
[0054]在其他的实施例中，所述梯度洗脱的过程为：
[0055] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由82%~88%降低到47%~53%，有机 相在流动相中的质量含量由12%~18%提高到47%~53% ;在25min~35min，水相在流动 相中的质量含量由47%~53%降低到8%~2%，有机相在流动相中的质量含量由47%~ 53 %提高到92%~98% ;在35min~38min，水相在流动相中的质量含量保持8 %~2%，有机 相在流动相中的质量含量保持92 %~98 % ;在38min~40min，水相在流动相中的质量含量 由8%~2%提高到82%~88%，有机相在流动相中的质量含量由92%~98%降低到12%~ 18 % ;在40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持82 %~88 %，有机相在流动相中的 质量含量保持12%~18%。
[0056] 在其他的实施例中，所述梯度洗脱的过程为：
[0057] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由84%~86%降低到49%~51 %，有机 相在流动相中的质量含量由14%~16%提高到49%~51 %;在25min~35min，水相在流动 相中的质量含量由49%~51 %降低到4%~6%，有机相在流动相中的质量含量由49 %~ 51 %提高到94%~96% ;在35min~38min，水相在流动相中的质量含量保持4%~6%，有机 相在流动相中的质量含量保持94%~96 % ;在38min~40min，水相在流动相中的质量含量 由4%~6%提高到84%~86%，有机相在流动相中的质量含量由94%~96%降低到16%~ 14% ;在40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持84%~86 %，有机相在流动相中的 质量含量保持14%~16%。
[0058]在另外的实施例中，所述梯度洗脱的过程为：
[0059] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由85 %降低到50 %，有机相在流动相中 的质量含量由15%提高到50% ;在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由50%降低 到0，有机相在流动相中的质量含量由50 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流动相中 的质量含量保持0，有机相在流动相中的质量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流动 相中的质量含量由〇提高到85 %，有机相在流动相中的质量含量由100 %降低到15 % ;在 40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持85 %，有机相在流动相中的质量含量保持 15%〇
[0060] 在本发明的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中使用的色谱柱为C8色谱柱或 C18色谱柱;在其他的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中使用的色谱柱为C18色谱柱。
[0061] 在本发明的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱柱温为25°C~45 °C;在其他的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱柱温为30°C~40°C;在另外 的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱柱温为32°C~38°C;在另外的实施例 中，所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱柱温为34°C~36°C;在另外的实施例中，所述高 效液相色谱检测过程中的色谱柱柱温为35°C。
[0062] 在本发明的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的检测器为紫外检测器。在 本发明的实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为200nm~240nm;在其他的 实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为210nm~230nm;在另外的实施例中， 所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为215mm~225nm;在另外的实施例中，所述高效 液相色谱检测过程中的检测波长为218nm~220nm〇
[0063] 在本发明的实施例中，所述哌马色林中有机杂质的检测方法为：
[0064] 对哌马色林进行高效液相色谱检测，得到哌马色林中有机杂质的含量;所述高效 液相色谱检测过程中的流动相中水相为质量浓度为0.1 %的三氟乙酸水溶液，有机相为质 量浓度为〇. 1 %的三氟乙酸的乙腈溶液，色谱柱为C18色谱柱，色谱柱温度为35°C，流动相流 速为lmL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为218nm，所述高效液相色谱检测过程中流动 相采用梯度洗脱的方式通过色谱柱，所述梯度洗脱的过程为：
[0065] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由85 %降低到50 %，有机相在流动相中 的质量含量由15%提高到50% ;在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由50%降低 到0，有机相在流动相中的质量含量由50 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流动相中 的质量含量保持〇，有机相在流动相中的质量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流动 相中的质量含量由〇提高到85 %，有机相在流动相中的质量含量由100 %降低到15 % ;在 40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持85 %，有机相在流动相中的质量含量保持 15%〇
[0066]按照2015版药典通则0512中的规定的方法，检测本发明提供的哌马色林中有机杂 质的检测方法的系统适应性，记录多次进样后测得的主峰保留时间、主峰面积、有机杂质峰 保留时间、有机杂质峰面积以及有机杂质的分离度;检测结果表明，本发明提供的哌马色林 中有机杂质的检测方法峰形好、稳定、重复性高、专属性强。
[0067]按照2015版药典通则9101中规定的方法，对本发明提供的哌马色林中有机杂质的 检测方法进行加标回收率实验，检测结果表明，本发明提供的哌马色林中有机杂质的检测 方法检测结果准确，能够准确的测定哌马色林中有机杂质的含量。
[0068]本发明以下实施例所用到的原料均为市售商品。
[0069] 实施例1
[0070]按照图1所示的工艺流程制备哌马色林，图1为本发明实施例1中哌马色林的制备 工艺流程图；
[0071 ]将摩尔比为1:1.3的式3所示结构的化合物和式4所示结构的化合物在25°C下进行 1.5小时的反应，得到式1所示结构的化合物；
[0072] 将摩尔比为1:1的式1所示结构的化合物和式2所示结构的化合物在25°C下进行1 小时的反应，得到哌马色林。
[0073] 对本发明实施例1制备得到的哌马色林进行核磁共振检测，检测结果如图2所示， 图2为本发明实施例1制备得到的哌马色林的核磁共振谱图，由图2可知，本发明实施例1制 备得到的哌马色林具有式II所示的结构。
[0074] 实施例2
[0075] 对本发明实施例1制备得到的哌马色林进行高效液相色谱检测，所述高效液相色 谱检测过程中的流动相中水相为质量浓度为0.1 %的三氟乙酸水溶液，有机相为质量浓度 为0.1 %的三氟乙酸的乙腈溶液，色谱柱为C18色谱柱，色谱柱温度为35°C，流动相流速为 lmL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为218nm，所述高效液相色谱检测过程中流动相采 用梯度洗脱的方式通过色谱柱，所述梯度洗脱的过程为：
[0076] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由85 %降低到50 %，有机相在流动相中 的质量含量由15%提高到50% ;在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由50%降低 到0，有机相在流动相中的质量含量由50 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流动相中 的质量含量保持〇，有机相在流动相中的质量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流动 相中的质量含量由〇提高到85 %，有机相在流动相中的质量含量由100 %降低到15 % ;在 40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持85 %，有机相在流动相中的质量含量保持 15%〇
[0077] 对哌马色林进行高效液相色谱检测后得到图3所示的液相色谱图，图3为本发明实 施例2检测哌马色林后得到的高效液相色谱图（图3表中的内容为色谱图对应的数据），由图 3可知，本发明实施例2提供的方法能够检测出哌马色林中具有式I结构的有机杂质，杂质峰 与哌马色林峰能够达到基线分离，峰形较好。
[0078] 按照上述技术方案所述的方法，检测本发明实施例2提供的哌马色林中有机杂质 的检测方法的系统适应性，检测结果如表1所示，表1为本发明实施例2提供的杂质检测方法 的系统适应性。
[0079] 表1本发明实施例2提供的杂质检测方法的系统适应性
[0080]
[0081] 由表1可知，本发明实施例2提供的哌马色林中有机杂质的检测方法稳定、重复性 高、专属性强。
[0082] 按照上述技术方案所述的方法，对本发明实施例2提供的哌马色林中有机杂质的 检测方法进行加标回收率实验，实验结果如表2所示，表2为本发明实施例2提供的杂质检测 方法的加标回收率。
[0083] 表2本发明实施例2提供的杂质检测方法的加标回收率
[0085] 注:表4中L、M、H表示加入有机杂质的量从低到高，1、2、3表示加入不同量的杂质平 行做3次。
[0086] 由表2可知，本发明实施例2提供的哌马色林中有机杂质的检测方法检测结果准 确。
[0087] 实施例3
[0088] 对本发明实施例1制备得到的哌马色林进行高效液相色谱检测，所述高效液相色 谱检测过程中的流动相中水相为质量浓度为0.1 %的甲酸水溶液，有机相为质量浓度为 0.1 %的甲酸的乙腈溶液，色谱柱为C18色谱柱，色谱柱温度为30°C，流动相流速为0.8mL/ min，检测器为紫外检测器，检测波长为210nm，所述高效液相色谱检测过程中流动相采用梯 度洗脱的方式通过色谱柱，所述梯度洗脱的过程为：
[0089] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由90 %降低到55%，有机相在流动相中 的质量含量由10 %提高到45% ;在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由55 %降低 到〇，有机相在流动相中的质量含量由45 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流动相中 的质量含量保持〇，有机相在流动相中的质量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流动 相中的质量含量由〇提高到90 %，有机相在流动相中的质量含量由100 %降低到10 % ;在 40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持90 %，有机相在流动相中的质量含量保持 10%〇
[0090]对哌马色林进行高效液相色谱检测后得到图4所示的液相色谱图，图4为本发明实 施例3检测哌马色林后得到的高效液相色谱图，由图4可知，本发明实施例3提供的方法能够 检测出哌马色林中具有式I结构的有机杂质，杂质峰与哌马色林峰能够达到基线分离，峰形 较好。
[0091]按照上述技术方案所述的方法，检测本发明实施例3提供的哌马色林中有机杂质 的检测方法的系统适应性，检测结果如表3所示，表3为本发明实施例3提供的杂质检测方法 的系统适应性。
[0092]表3本发明实施例3提供的杂质检测方法的系统适应性
[0094] 由表3可知，本发明实施例3提供的哌马色林中有机杂质的检测方法稳定、重复性 高、专属性强。
[0095] 按照上述技术方案所述的方法，对本发明实施例3提供的哌马色林中有机杂质的 检测方法进行加标回收率实验，实验结果如表4所示，表4为本发明实施例3提供的杂质检测 方法的加标回收率。
[0096] 表4本发明实施例3提供的杂质检测方法的加标回收率
[0097]
[0099] 注:表2中L、M、H表示加入有机杂质的量从低到高，1、2、3表示加入不同量的杂质平 行做3次。
[0100]由表4可知，本发明实施例3提供的哌马色林中有机杂质的检测方法检测结果准 确。
[0101] 实施例4
[0102] 对本发明实施例1制备得到的哌马色林进行高效液相色谱检测，所述高效液相色 谱检测过程中流动相中水相为质量浓度为0.1 %的磷酸水溶液，有机相为质量浓度为0.1 % 的磷酸的甲醇溶液，色谱柱为C8色谱柱，色谱柱温度为40°C，流动相流速为1.2mL/min，检测 器为紫外检测器，检测波长为230nm，所述高效液相色谱检测过程中流动相采用梯度洗脱的 方式通过色谱柱，所述梯度洗脱的过程为：
[0103] 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由80 %降低到45%，有机相在流动相中 的质量含量由20 %提高到55% ;在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由45 %降低 到〇，有机相在流动相中的质量含量由55 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流动相中 的质量含量保持〇，有机相在流动相中的质量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流动 相中的质量含量由〇提高到80%，有机相在流动相中的质量含量由100%降低到20% ;在 40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持80 %，有机相在流动相中的质量含量保持 20% 〇
[0104] 对哌马色林进行高效液相色谱检测后得到图5所示的液相色谱图，图5为本发明实 施例4检测哌马色林后得到的高效液相色谱图，由图5可知，本发明实施例4提供的方法能够 检测出哌马色林中具有式I结构的有机杂质，杂质峰与哌马色林峰能够达到基线分离，峰形 较好。
[0105] 按照上述技术方案所述的方法，检测本发明实施例4提供的哌马色林中有机杂质 的检测方法的系统适应性，检测结果如表5所示，表5为本发明实施例4提供的杂质检测方法 的系统适应性。
[0106] 表5本发明实施例4提供的杂质检测方法的系统适应性
[0107]
[0108] 由表1可知，本发明实施例4提供的哌马色林中有机杂质的检测方法稳定、重复性 高、专属性强。
[0109] 按照上述技术方案所述的方法，对本发明实施例4提供的哌马色林中有机杂质的 检测方法进行加标回收率实验，实验结果如表6所示，表6为本发明实施例4提供的杂质检测 方法的加标回收率。
[0110] 表6本发明实施例4提供的杂质检测方法的加标回收率
[0112] 注:表6中L、M、H表示加入有机杂质的量从低到高，1、2、3表示加入不同量的杂质平 行做3次。
[0113] 由表6可知，本发明实施例4提供的哌马色林中有机杂质的检测方法检测结果准 确。
[0114] 比较例1
[0115] 按照实施例2所述的方法对实施例1制备得到的哌马色林进行高效液相色谱检测， 与实施例2不同的是，采用摩尔浓度为20mmol/L的KH 2P〇4水溶液为水相，采用乙腈为有机相。
[0116] 对哌马色林进行高效液相色谱检测后得到图6所示的液相色谱图，图6为本发明比 较例1检测哌马色林后得到的高效液相色谱图，由图6可知，本发明比较例1提供的方法杂质 峰和哌马色林峰没有分开，无法检测出哌马色林的有机杂质。
[0117]由以上实施例可知，本发明提供了一种哌马色林中有机杂质的检测方法，包括:对 哌马色林进行高效液相色谱检测，得到哌马色林中有机杂质的含量;所述高效液相色谱检 测过程中的流动相包括水相和有机相，所述水相为酸的水溶液，所述有机相为酸的有机溶 液，所述酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有机溶液中的溶剂包括甲醇或乙腈;所述有机 杂质为式I所示结构的化合物。本发明提供的哌马色林中有机杂质的检测方法，对哌马色林 进行高效液相色谱检测的过程中，采用特定物质的水相和有机相组成流动相，这种流动相 能够对有机杂质进行较好的分离，使本发明提供的方法能够准确检测出哌马色林中的有机 杂质。此外，本发明提供的哌马色林中有机杂质的检测方法稳定、重复性好、专属性强。
【主权项】
1. 一种哌马色林中有机杂质的检测方法，包括： 对哌马色林进行高效液相色谱检测，得到哌马色林中有机杂质的含量;所述高效液相 色谱检测过程中的流动相包括水相和有机相，所述水相为酸的水溶液，所述有机相为酸的 有机溶液，所述水相中的酸和有机相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有机溶液中的 溶剂包括甲醇或乙腈;所述有机杂质为式I所示结构的化合物：2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸的水溶液的质量浓度为0.05% ~0.15%〇3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸的有机溶液的质量浓度为 0.05% ~0.15%〇4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述水相和有机相的质量比为（50~ 60):(50~40)。5. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相检测过程中流动相的流 速为 0 · 5mL/min~1 · 5mL/min〇6. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中采用梯 度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，所述梯度洗脱的过程为： 在0~25min，水相在流动相中的质量含量由80%~90%降低到45%~55%，有机相在 流动相中的质量含量由10%~20%提高到45%~55% ; 在25min~35min，水相在流动相中的质量含量由45 %~55 %降低到10 %~0，有机相在 流动相中的质量含量由45%~55%提高到90%~100% ; 在35min~38min，水相在流动相中的质量含量保持10 %~0，有机相在流动相中的质量 含量保持90 %~100 %; 在38min~40min，水相在流动相中的质量含量由10 %~0提高到80 %~90%，有机相在 流动相中的质量含量由90%~100%降低到10%~20% ; 在40min~45min，水相在流动相中的质量含量保持80 %~90 %，有机相在流动相中的 质量含量保持10%~20%。7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中使用的 色谱柱为C8色谱柱或C18色谱柱。8. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的色谱 柱柱温为25°C~45°C。9. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的检测 器为紫外检测器。10. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的检 测波长为200nm~240nm〇
【文档编号】G01N30/02GK105929030SQ201510958090
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2015年12月18日
【发明人】施雯, 严紫薇, 石功名, 贺耘
【申请人】重庆两江药物研发中心有限公司