β2-微球蛋白免疫层析定量检测试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型属于免疫检测领域，具体涉及一种高灵敏度β 2-微球蛋白免疫层析定量检测试纸条。
【背景技术】
[0002]β 2-微球蛋白(β 2-microglobulin，简称β 2-MG)是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，由99个氨基酸组成的单链多肽。广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。正常人β 2-微球蛋白的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，β 2-微球蛋白可以从肾小球自由滤过，99.9%在近端肾小管吸收，在局部被代谢降解为氨基酸，故而正常情况下β 2-微球蛋白的排出是很微量的，每天从肾小球滤过的约为340mg，但尿中每天最大排泄量只有370 μ g，仅占滤过总量的0.1 %。
[0003]血清β 2-微球蛋白的升高可反映肾小球滤过功能受损或滤过负荷是否增加的情况；而尿液中排出β 2-微球蛋白增高，则提示肾小管损害或滤过负荷增加；在急慢性肾盂肾炎时，因肾脏受损，故尿β 2-微球蛋白升高，而膀胱炎患者则β 2-微球蛋白正常；肾移植患者血、尿β 2-微球蛋白明显增高，提示机体发生排斥反应，因β2-微球蛋白合成加速，虽肾清除增多，而血β 2-微球蛋白仍增高。因此测定血、尿中β 2-微球蛋白可用于估计肝炎、肾炎、类风湿关节炎，以及恶性肿瘤、免疫性疾病等疾病的活动程度，并作为观察药物疗效的一项简便、精确而又敏感指标。故而β 2-微球蛋白的测定在临床上是有多种价值的。目前检测β 2-微球蛋白的常用方法有:
[0004]I颗粒增强免疫比浊法:
[0005]该法样品中的β 2-微球蛋白与包被胶乳颗粒上的抗人β 2-微球蛋白形成免疫复合物，产生的浊度与样品中的β 2-微球蛋白含量呈正比，用比浊法进行测定，从而求得样品中β 2-微球蛋白含量。该法简便、快速、准确。
[0006]2放射免疫分析法:
[0007]放射免疫分析技术是利用同位素标记的与未标记的抗原，同抗体发生竞争性抑制反应的方法。该法是一种灵敏度高、较简便的测量法，但其却需要具备尖端复杂的设备，且成本也不低。同时，该技术还需要特殊的预防措施，因为其要用到放射性物质，存在放射线辐射和污染等问题。因此，如今放射免疫分析法在很大程度上已经被ELISA所取代。
[0008]3酶联免疫吸附分析法:
[0009]该法用β 2-微球蛋白抗体包被微孔板制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入人β 2-微球蛋白，再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的β 2-微球蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物四甲基联苯胺(TMB)显色，颜色的深浅和样品中的β 2-微球蛋白呈正相关。该法具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点。
[0010]生物素-亲和素系统(b1tinavidin system，BAS)，是一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世，BAS很快被广泛应用于医学各领域。将该系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床快速诊断，并利于进行大规模流行病学调查，成为研宄免疫反应的有力工具。由于BAS检测系统经济快速，又无放射物质污染，不需复杂仪器，充分显示了此系统的巨大潜力和应用的可能性。
[0011]生物素-亲和素系统检测原理:BAS是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素与亲和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达ΙΟ1、—1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。利用生物素-亲和素系统研制β 2-微球蛋白检测试快速诊断试剂尚无报道。
【实用新型内容】
[0012]本实用新型的目的，在于提供一种β 2-微球蛋白免疫层析定量检测试纸条，其基于双抗体夹心法、荧光免疫侧向层析和生物素-链霉亲和素放大系统，提供高灵敏度β 2-微球蛋白免疫层析定量检测试纸条。使用本实用新型时，提高了检测灵敏度和检测稳定性，降低了非特异性结合，检测时间不大于10分钟，大大提高了诊断效率。
[0013]本实用新型解决其技术问题的解决方案是2-微球蛋白免疫层析定量检测试纸条，其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的β 2-微球蛋白单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定识别β 2-微球蛋白另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
[0014]作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。
[0015]作为上述技术方案的进一步改进，所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。
[0016]作为上述技术方案的进一步改进，还包括卡壳，所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内，所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗，卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。
[0017]作为上述技术方案的进一步改进，所述观察窗为矩形孔。
[0018]作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。
[0019]作为上述技术方案的进一步改进，所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
[0020]作为上述技术方案的进一步改进，所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
[0021]作为上述技术方案的进一步改进，所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳，所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。
[0022]本实用新型与现有技术相比，具有如下优点:
[0023](I)本实用新型将荧光蛋白作为标记物，此标记物稳定性良好，有利于提高检测稳定性。
[0024](2)本实用新型通过利用“链霉亲和素-生物素放大系统”，提高检测灵敏度，降低非特异性结合，有利于提高试剂盒性能。
[0025](3)利用本实用新型进行降钙素原的检测时间不大于10分钟，检测线性范围为0.10ng/ml?100.00ng/ml，极大地提高了检测效率。
[0026](4)本实用新型可通过荧光免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠的诊断结果。
[0027](5)本使用新型卡壳设有样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗，根据分析仪器判定结果，准确可靠。
[0028](6)本实用新型制作方便，体积小、便于携带。
[0029](7)本实用新型检测成本较低。
[0030](8)本实用新型可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断；易于保存，有利于基层单位推广。
【附图说明】
[0031]为了更清楚地说明本实用新型实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单说明。显然，所描述的附图只是本实用新型的一部分实施例，而不是全部实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他设计方案和附图。
[0032]图1是本实用新型实施例一的结构示意图；<