一种全缘马尾藻多糖的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体设及一种全缘马尾藻多糖的应用。
【背景技术】
[0002] 肺癌是导致全世界人群肿瘤相关的死亡最主要的原因，目前治疗的有效性严重受 限，平均每10万病患中就有30例死亡。其中，非小细胞型肺癌在所有类型的肺癌中占据了 80%的比例，而化学治疗法仍然是现在治疗的标准方法。虽然运些治疗策略极大地改善了 患者们的症状和生活质量，但是病患的总体存活率仍然很低。因此，寻找和开发新颖有效的 药物来预防和治疗肺癌的需求依旧非常迫切。
[0003] 血管生成是指从已有的毛细血管发展而形成新的血管的过程，其设及一系列相互 协调的内皮细胞的活动，包括:血管内皮细胞的激活、增殖、迁移、重排和管腔形成。目前已 证明血管生成是实体瘤生长的必备条件，因为肿瘤的侵袭和转移依赖于功能性的血管供给 系统的存在。因此，抗肿瘤血管生成成为了一种有广阔前景的抗癌策略，并且许多抗血管生 成药物已经进入了临床研究。但是目前大部分的抗肿瘤血管生成候选药物通常并不是特异 性针对肿瘤细胞并且常常导致健康组织中的血管内皮功能障碍W及肿瘤的抗性等一系列 副作用，因此对新颖高效的抗血管生成药物的持续寻找仍然在继续。
[0004] 海藻是生物活性物质的重要来源之一，运些海藻活性物质在医药、食品和生物医 药产业具有极大的发展潜力。按照含有的色素，海藻主要分为褐藻、绿藻和红藻=大类，其 中褐藻因为含有包括多糖和多酪在内的许多不同的生物活性物质而著称。
【发明内容】
[000引本发明针对现有技术的不足，提供一种全缘马尾藻多糖的应用。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为
[0007] -种全缘马尾藻多糖的应用，全缘马尾藻多糖作为制备抗癌药物或抗癌保健品中 的应用;或，全缘马尾藻多糖作为制备抗血管再生的药物或抗血管再生成保健品中的应用。
[0008] 所述全缘马尾藻多糖作为制备抗非小细胞型肺癌药物中的应用。
[0009] 所述全缘马尾藻多糖的获得是W全缘马尾藻原料采用热水提取法提取，而后过 滤、浓缩，浓缩后经醇沉、干燥，即得全缘马尾藻多糖。
[0010] 具体是，w全缘马尾藻原料采用11(TC、高压O.lMPa热水提取法提取，而后过滤、浓 缩，浓缩后经醇沉、干燥，即得全缘马尾藻多糖。
[0011] 所述全缘马尾藻多糖分子量范围为100~200W)a，主要组成单糖为岩藻糖和半乳 糖，两者的摩尔比例为1~10:1，硫酸根含量为15%~50%。
[0012] 所述全缘马尾藻来源于褐藻口，褐藻纲，墨角藻目，马尾藻科的马尾藻属。
[0013] 本发明所具有的优点为：
[0014] 本发明全缘马尾藻多糖应用抗癌和抗血管生成药物和保健品，能够诱导癌细胞调 亡，降低线粒体膜电位，阻滞G2/M细胞周期，抑制内皮细胞增殖，抑制HUVEC细胞迁移，抑制 HUVEC细胞的小管拟态的形成，从而对恶性肿瘤有一定的预防和治疗作用。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖的红外谱图。
[0016] 图2为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对肺癌A549细胞增殖活性 影响的柱状图。
[0017] 图3A为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对肺癌A549细胞核形态影 响图。
[0018] 图3B为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对肺癌A549细胞调亡的诱 导作用图。
[0019] 图3C为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对肺癌A549细胞各个调亡 时间细胞数的累积图。
[0020] 图4为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药诱导肺癌A549细胞线粒体 膜电位的降低图。
[0021] 图5A为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药诱导肺癌A549细胞活性氧 的产生图；
[0022] 图5B为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药诱导肺癌A549细胞活性氧 产生的定量分析图。
[0023] 图6A为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药诱导肺癌A549细胞G2/M细 胞周期阻滞图；
[0024] 图6B为本发明实施例1提供的各个细胞周期细胞数量的比例分析图。
[0025] 图7为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对肺癌A549细胞调亡相关 蛋白表达量的影响图。
[0026] 图8为为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对人厮静脉内皮细胞 HUVEC增殖活性影响的柱状图。
[0027] 图9为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖的划痕法(A)和Transwell法(B)检测 全缘马尾藻多糖体外给药对人厮静脉内皮细胞册VEC迁移活性的影响图；图9C划痕法和图 9D Transwell法实验结果定量分析图。
[0028] 图10为为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体外给药对人厮静脉内皮细胞 HUVEC管腔形成活性的影响图。
[0029] 图11为本发明实施例1提供的全缘马尾藻多糖体内给药对斑马鱼新生血管生成的 影响图。
【具体实施方式】
[0030] 本发明松藻多糖具有抗癌活性和抗血管生成活性，所述全缘马尾藻多糖的应用是 指具有抗癌活性和抗血管生成活性的全缘马尾藻多糖在制备抗癌药物或/和抗癌保健品中 的应用，抗血管生成药物药物或/和抗血管生成保健品中的应用。本发明首次发现全缘马尾 藻多糖对抗癌和抗血管具有显著的抑制作用，并公开了将全缘马尾藻多糖应用于制备抗癌 和抗血管生成药物和保健品，能够诱导癌细胞调亡，降低线粒体膜电位，阻滞G2/M细胞周 期，抑制内皮细胞增殖，抑制册VEC细胞迁移，抑制册VEC细胞的小管拟态的形成，从而对恶 性肿瘤有一定的预防和治疗作用。
[0031] 实施例1，全缘马尾藻多糖的制备
[0032] 取全缘马尾藻干品lOOg，用2500ml自来水在高压锅中于110°C，0.1 MPa提取4h，筛 絹过滤分离藻渣，娃藻±过滤，过滤提取液，滤液浓缩至400ml，加入4g氯化儀和100ml无水 乙醇去除褐藻胶，离屯、（400化pm, 15min)，除去沉淀，取上清液浓缩至200ml，将浓缩液装入 lOOODa的透析袋透析，而后经自来水或蒸馈水分别透析24h，透析后再将透析液浓缩至 50ml，浓缩液冷冻干燥，即得水提取的全缘马尾藻多糖(SPS)，产率为2.5 %。
[0033] 全缘马尾藻多糖的化学组分分析显示含有岩藻糖为29.44%，糖醒酸为4.88%，硫 酸根为37.26%;分子量显示为122.91d)a;单糖摩尔比为鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和岩 藻糖(0.06:0.19:0.58:0.17:1)。红外谱图（图1)在1221畑1-1和818畑1-1出现硫酸基特征吸收 峰，说明全缘马尾藻多糖为硫酸多糖。
[0034] 实施例2,全缘马尾藻多糖的制备
[00巧]向1500ml热水(70-80°C)中加入12.5ml优级盐酸，放入全缘马尾藻干品lOOg，揽 拌，浸泡提取2小时，筛絹过滤分离藻渣，氨氧化钢中和，娃藻±过滤，过滤提取液，滤液浓缩 至200ml，将浓缩液装入1000化的透析袋透析，而后经自来水或蒸馈水分别透析24h，透析后 再将透析液浓缩至50ml，浓缩液冷冻干燥，即得酸提取的全缘马尾藻多糖(SPS-A)，产率为 2.89%。
[0036] 全缘马尾藻多糖的化学组分分析显示含有岩藻糖为26.14%，糖醒酸为11.23%， 硫酸根为37.67%;分子量显示为115.化化;单糖摩尔比为鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和 岩藻糖(0.04:0.09:0.60:0.16:1)。红外谱图（图1)在1221cm-i和818cnfi出现硫酸基特征吸 收峰，也说明全缘马尾藻多糖为硫酸多糖。
[0037] 实施例3
[0038] SPS和SPS-A体外给药对肺癌A549细胞增殖活性的影响
[0039] MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的 班巧酸脱氨酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲琐并沉积在细胞中，而死细 胞无此功能。二甲基亚讽能溶解细胞中的甲琐，通过酶标仪测定其在540nm波长处光吸收 值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方 法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验W 及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
[0040] 实验方法
[0041] 取对数生长期的A549细胞，膜蛋白酶消化成单细胞悬液，细胞计数后，按照4X103 个/孔的密度接种于96孔细胞培养板，放入5 % C〇2、37 °C的细胞培养箱中培养;第二天，向96 孔板中加入终浓度为0,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9，1.0曰11(11.5111邑/1111的5口5，每组 浓度设6个复孔，放入培养箱中分别继续培养1化和24h;SPS处理之后，每孔加入20μ1的MTT 溶液(浓度为5mg/ml)，放入培养箱中再接着培养4h，而后倒掉96孔板中的培养上清，每孔加 入15化1的二甲基亚讽，摇床上振荡lOmin混匀，用酶标仪测定570皿处的吸光值;按照下方 的方法计算册VEC细胞的增殖抑制率:增殖抑制率（％ ) = (0D娜猫一0D胃)/0D娜猫X 100%。 实验重复Ξ次，数据WF+幻)表示，通过SPSS16,采