一键式核酸扩增仪及其应用_2

文档序号:9838432阅读:来源:国知局
三恒温部件中72 °C的温度下将样品温育60秒;
[0065]e)将步骤b)至步骤d)重复30次;以及
[0066]f)在第三恒温部件中保持7 2 °C的温度下将样品温育5分钟。
[0067]上述核酸扩增仪可以为专用于检测K-ras基因的核酸扩增仪。
[0068]本发明的另一个目的在于,提供一种检测特定靶标核酸的方法,所述方法包括使用上述一键式核酸扩增仪。
[0069]在本发明的一个优选的实施方式中,当所述恒温部件的个数为两个或两个以上时,通过所述位移部件将样品与一个恒温部件分离并置于另一恒温部件中为恒温部件静止,通过所述位移部件使得样品移动,或者为样品静止,通过所述位移部件使得恒温部件移动,并且
[0070]所述移动为直线移动或圆周移动。
[0071]在本发明的一个优选的实施方式中,所述特定靶标核酸为HPV病毒或尖锐湿疣,所述方法包括如下步骤:
[0072]a)在第一恒温部件中46-50 V的温度下将样品温育1_5分钟;
[0073]b)在第二恒温部件中92_97°C的温度下将样品温育2-6分钟;
[0074]c)在第二恒温部件中92_97°C的温度下将样品温育28-32秒;
[0075]d)在第二恒温部件中46_50°C的温度下将样品温育43-47秒;
[0076]e)在第三恒温部件中70_74°C的温度下将样品温育18_22秒;
[0077]f)将步骤c)至步骤e)重复28-32次;
[0078]g)在第二恒温部件中92_97°C的温度下将样品温育28-32秒;
[0079]h)在第四恒温部件中63-67 V的温度下将样品温育43_47秒;
[0080]i)在第三恒温部件中70_74°C的温度下将样品温育18-22秒;以及[0081 ]j)将步骤c)至步骤e)重复18-22次。
[0082]在本发明的一个优选的实施方式中,所述特定靶标核酸为HPV病毒或尖锐湿疣,所述方法包括如下步骤:
[0083]a)在第一恒温部件中48 V的温度下将样品温育2分钟;
[0084]b)在第二恒温部件中94°C的温度下将样品温育4分钟;
[0085]c)在第二恒温部件中94°C的温度下将样品温育30秒;
[0086]d)在第二恒温部件中48 0C的温度下将样品温育45秒;
[0087]e)在第三恒温部件中72°C的温度下将样品温育20秒;
[0088]f)将步骤c)至步骤e)重复30次;
[0089]g)在第二恒温部件中94°C的温度下将样品温育30秒;
[0090]h)在第四恒温部件中65 °C的温度下将样品温育45秒;
[0091]i)在第三恒温部件中72°C的温度下将样品温育20秒;以及[0092 ]j)将步骤c)至步骤e)重复2O次。
[0093]在本发明的一个优选的实施方式中,所述特定革El标核酸为K-ras基因,所述方法包括如下步骤:
[0094]a)在第一恒温部件中92_97°C的温度下将样品温育3-8分钟;
[0095]b)在第一恒温部件中92_97°C的温度下将样品温育28-32秒;
[0096]c)在第二恒温部件中53_57°C的温度下将样品温育43-47秒;
[0097]d)在第三恒温部件中70_74°C的温度下将样品温育58-62秒;
[0098]e)将步骤b)至步骤d)重复29-31次;以及
[0099]f)在第三恒温部件中保持70_74°C的温度下将样品温育2-8分钟。
[0100]在本发明的一个优选的实施方式中,所述特定革El标核酸为κ-ras基因,所述方法包括如下步骤:
[0101]a)在第一恒温部件中94°C的温度下将样品温育5分钟;
[0102]b)在第一恒温部件中94°C的温度下将样品温育30秒;
[0103]c)在第二恒温部件中55 °C的温度下将样品温育45秒;
[0104]d)在第三恒温部件中72 °C的温度下将样品温育60秒;
[0105]e)将步骤b)至步骤d)重复30次;以及
[0106]f)在第三恒温部件中保持7 2 °C的温度下将样品温育5分钟。
[0107]本发明的有益效果在于:本发明的单程序、一键式核酸扩增仪,可以实现核酸的快速扩增,具备控温精确、使用寿命长、不同温度之间转换快、价格低廉、一键式简单操作等特点。具体的,本发明的核酸扩增仪价格低廉,适用于一些购买力较弱的乡镇医院、县级医院、个人医院等。同时,本发明的核酸扩增仪一键式简单操作,无需专业培训。本发明的核酸扩增仪特别适用于检测特定靶标核酸,检测效果极佳。另一方面,本仪器还可按照任意体外诊断试剂中需要核酸样本扩增步骤的产品进行定制。
【具体实施方式】
[0108]下面结合非限制性的具体实施例对本发明作进一步说明,但本发明的保护范围并不局限于下述实施例。以下实施例所使用的检测样本为通过江苏省某医院采集得到,所用的各种试剂均为本领域常规的材料、试剂,均通过常规市售渠道购买得到。
[0109]实施例1
[0110]为了检测病人是否感染HPV病毒以及感染的HPV的具体型别,从宫颈脱落细胞中提取DNA,依次做好标记,向各PCR管中加入对应的DNA模板、DNA聚合酶、dNTP等,并混合均匀。将扩增混合液置于本发明的核酸扩增仪中,按下开始按钮。首先PCR管进入48°C温控模块温育2!!^11,其次进入94°(:温育41^11,然后进入(941€308,481€458,721€208)温育循环30次,之后进入(94°C30s,65°C45s,72°C20s)温育循环20次,反应结束,仪器结束铃声响起,取出,进行杂交检测,以检测病人是否感染HPV病毒以及感染的HPV的具体型别,并将检测结果与用其他方法得出的正确结果进行对比。0C 0C 0C 0C 0C 0C 0C 0C用100个样本上述实验重复100次,检测结果的正确率为97%,其中假阴性率为1%,假阳性率为2%。
[0111]实施例2
[0112]为了检测病人是否感染尖锐湿疣,从病人疣体上取样提取DNA,依次做好标记,向各PCR管中加入对应的DNA模板、DNA聚合酶、dNTP等,并混合均匀。将扩增混合液置于本发明的核酸扩增仪中,按下开始按钮,首先PCR管进入48°C温控模块温育2min,其次进入94°C温育 4min,然后进入(941€308,481€458,721€208)温育循环30次,之后进入(941€308,651€45s,72°C20s)温育循环20次,反应结束,仪器结束铃声响起,取出,进行杂交检测,以检测病人是否感染尖锐湿疣,并将检测结果与用其他方法得出的正确结果进行对比。用100个样本上述实验重复100次,检测结果的正确率为98%,其中假阴性率为1%,假阳性率为1%。
[0113]实施例3
[0114]为了检测κ-ras基因,从病人取样提取DNA样本,依次做好标记,向各PCR管中加入对应的DNA模板、DNA聚合酶、dNTP等,并混合均匀。将扩增混合液置于本发明的核酸扩增仪中,按下开始按钮,首先EP管或PCR管进入94°C温控模块温育5min,然后进入(94°C30s,55°C45s,72°Clmin)温育循环30次,之后进入72°C温育5min,反应结束,仪器结束铃声响起,取出,进行杂交检测,以检测病人的K-ras基因,并将检测结果与用其他方法得出的正确结果进行对比。用100个样本上述实验重复100次,检测结果的正确率为97%,其中假阴性率为1%,假阳性率为2%。
[0115]对比例I
[0116]其他条件与实施例3相同,不同之处仅在于,在EP管进入94°C温控模块温育5min之后,进入(941€308,501€458,72°(:11^11)温育循环30次,再进入72°(:温育51^11,即退火温度较低。将检测结果与用其他方法得出的正确结果进行对比。用100个样本上述实验重复100次,检测结果的正确率为57%,其中假阴性率为1%,假
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