一种生物酶固定用反胶束乳液及其固定生物酶的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物酶固定的技术领域，具体为一种生物酶固定用反胶束乳液及其固定生物酶的方法。
【背景技术】
[0002]生物酶尽管具有催化活性高、专一性强以及选择性好等特性，但其存在价格昂贵、不易回收以及容易团聚等缺点限制了其的应用。为了克服这一系列缺点，将生物酶固定于载体纳米磁性颗粒的研究受到科研人员越来越多的重视，该方法具有制备工艺简单、价格便宜以及便于回收等优点，其中载体代表有纳米Fe3O4磁性颗粒等。但是常规的固定方式通常是在水中进行，这种方法使生物酶与纳米磁性颗粒发生任意位点的结合，导致生物酶的活性降低。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是克服现有技术中使用纳米Fe3O4磁性颗粒固定生物酶后导致生物酶活性降低的技术缺陷;进而提供一种生物酶固定用反胶束乳液及其固定生物酶的方法。
[0004]为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案:
[0005]—种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0006]0P-10:5?20份
[0007]正辛醇:10?35份
[0008]异辛烷:30?60份
[0009]Tris-HCl 缓冲液:0.1 ?1.0 份
[0010]蒸饱水:0.1?8.0份。
[0011]进一步的，一种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0012]0P-10:15份
[0013]正辛醇:21份
[0014]异辛烷:48份
[0015]Tris-HCl 缓冲液:0.5份
[0016]蒸馏水:3.5份。
[0017]进一步的，一种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0018]0P-10:14份
[0019]正辛醇:22份
[0020]异辛烷:45份
[0021]Tris-HCl 缓冲液:0.8 份
[0022]蒸馏水:3.2份。
[0023]进一步的，一种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0024]OP-1O:12份
[0025]正辛醇:20份
[0026]异辛烷:46份
[0027]Tris-HCl 缓冲液:0.8份
[0028]蒸馏水:3.2份。
[0029]—种用生物酶固定用反胶束乳液固定生物酶的方法，包括以下几个步骤:
[0030]1)、将0P-10:5?20重量份、正辛醇:10?35重量份、异辛烷:30?60重量份、Tris-HCl缓冲液:0.1?1.0重量份、蒸馏水:0.1?8.0重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液；
[0031 ] 2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系；
[0032]3)、向2)所得的反胶束体系中加入待固定的生物酶I?10重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒5?20重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定；
[0033]4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。
[0034]进一步的，所述的步骤3)中的生物酶为假丝酵母脂肪酶。
[0035]进一步的，所述的步骤2)中的超声波处理时超声波的强度为0.5?1.2KW/m3，超声频率为18?40KHz。
[0036]进一步的，所述的步骤2)中的超声波处理的时间为0.5?2小时。
[0037]进一步的，所述的步骤3)中的纳米Fe304磁性颗粒的粒径为40?60nm。
[0038]本发明反胶束将表面活性剂分散于连续非极性溶剂中自发形成的一种纳米级稳定聚集体，其中由表面活性剂亲水基形成的球状极性核作为“水池”，不仅能够增溶一定数量的水或水溶液，而且可有效地限定其中分子或离子的存在状态和相互作用。以该反胶束体系为介质进行生物酶固定，使生物酶定向地存在于反胶束的油水界面处，其活性基团定向规则的朝向有机溶剂相中，而与纳米磁性颗粒的反应基团规则的朝向水池中，极大地避免了生物酶活性基的损失，固定后的生物酶具有高效的催化性能。另一方面，采用反胶束体系固定生物酶的方法工艺简单、环境友好和安全性高等优点，更为重要的是本方法避免了生物酶活性位点的减少，使其催化活性更加高效，同时反应完成后反胶束体系可以回收和重复使用，因此具有十分广阔的发展前景。
【附图说明】
[0039]附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中:
[0040]图1是不同固定酶对戊酸戊酯的催化合成率；
[0041]图2是实施例3中反胶束固定酶的重复使用性能；
[0042 ]图3是Fe 304磁性颗粒固定生物酶前后的磁性效果。
【具体实施方式】
[0043]以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0044]实施例1
[0045]—种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0046]OP-1O:15份
[0047]正辛醇:21份
[0048]异辛烷:48份
[0049]Tris-HCl 缓冲液:0.5 份
[0050]蒸馏水:3.5份。
[0051]该实施例生固定生物酶的方法，包括以下几个步骤:
[0052]I )、将0P-10:15重量份、正辛醇:21重量份、异辛烷:48重量份、Tris-HCl缓冲液:
0.5重量份、蒸馏水:3.5重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液；
[0053]2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系；超声波的强度为
0.5Kff/m3，超声频率为18KHz，处理的时间为2小时；
[0054]3)、向2)所得的反胶束体系中加入假丝酵母脂肪酶2重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒10重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定；纳米Fe3O4磁性颗粒的粒径为40nm；
[0055]4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。
[0056]实施例2
[0057]一种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0058]0P-10:14份
[0059]正辛醇:22份
[0060]异辛烷:45份
[0061 ]Tris-HCl 缓冲液:0.8份
[0062]蒸馏水:3.2份。
[0063]该实施例生固定生物酶的方法，包括以下几个步骤:
[0064]I )、将0P-10:14重量份、正辛醇:22重量份、异辛烷:45重量份、Tris-HCl缓冲液:
0.8重量份、蒸馏水:3.2重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液；
[0065]2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系；超声波的强度为
1.2Kff/m3，超声频率为40KHz，处理的时间为0.5小时；
[0066]3)、向2)所得的反胶束体系中加入假丝酵母脂肪酶5重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒10重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定；纳米Fe3O4磁性颗粒的粒径为60nm；
[0067]4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。
[0068]实施例3
[0069]—种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0070]0P-10:12份
[0071]正辛醇:20份
[0072]异辛烷:46份
[0073]Tris-HCl 缓冲液:0.8份
[0074]蒸馏水:3.2份。
[0075]该实施例生固定生物酶的方法，包括以下几个步骤:<