br>[0076]I )、将0P-10:12重量份、正辛醇:20重量份、异辛烷:46重量份、Tris-HCl缓冲液:0.8重量份、蒸馏水:3.2重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液；
[0077]2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系；超声波的强度为
0.8Kff/m3，超声频率为30KHz，处理的时间为I小时；
[0078]3)、向2)所得的反胶束体系中加入假丝酵母脂肪酶8重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒10重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定；纳米Fe3O4磁性颗粒的粒径为50nm；
[0079]4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。
[0080]实施例4
[0081]—种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0082]0P-10:5份
[0083]正辛醇:10份
[0084]异辛烷:30份
[0085]Tris-HCl 缓冲液:0.1份
[0086]蒸馏水:0.1份。
[0087]该实施例生固定生物酶的方法，包括以下几个步骤:
[0088]I)、将0P-10:5重量份、正辛醇:10重量份、异辛烷:30重量份、Tris-HCl缓冲液:0.1重量份、蒸馏水:0.1重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液；
[0089]2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系；超声波的强度为
0.8Kff/m3，超声频率为30KHz，处理的时间为1.2小时；
[0090]3)、向2)所得的反胶束体系中加入假丝酵母脂肪酶I重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒5重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定；纳米Fe3O4磁性颗粒的粒径为50nm；
[0091]4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。
[0092]实施例5
[0093]—种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分:
[0094]0P-10:20份
[0095]正辛醇:35份
[0096]异辛烷:60份
[0097]Tris-HCl缓冲液:I.0份
[0098]蒸馏水:8.0份。
[0099]该实施例生固定生物酶的方法，包括以下几个步骤:
[0100]I )、将0P-10: 20重量份、正辛醇:35重量份、异辛烷:60重量份、Tris-HCl缓冲液:I.0重量份、蒸馏水:8.0重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液；
[0101]2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系;超声波的强度为IKW/m3，超声频率为35KHz，处理的时间为1.4小时；
[0102]3)、向2)所得的反胶束体系中加入假丝酵母脂肪酶10重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒20重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定；纳米Fe3O4磁性颗粒的粒径为50nm；
[0103]4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。
[0104]将本发明实施例1-3的生物酶固定用反胶束乳液应用于戊酸戊酯的催化合成。将固定酶置于正戊醇、正戊酸以及环己烷混合溶液中，使其在37°C的搅拌条件下进行合成反应，测定不同时间下戊酸戊酯的合成率，并与在相同条件下使用水为反应介质的固定酶以及自由酶的活性进行对比，结果如图1所示，达到100%合成率的时间自由酶<实施例3<实施例2<实施例1<常规水为介质的固定化酶，且常规水为介质的固定化酶达到100%合成率的时间为35h左右，而本申请的实施例3仅需要16h左右，非常接近于自由酶，可见本发明所得的固定化酶的催化活性更加高效。
[0105]图2显示了实施例3中反胶束固定酶的重复使用性能，可见本发明的固定化酶可以重复使用，酶的稳定性高，重复使用5次之后，其催化合成率依然在85%以上。
[0106]图3可以看出，Fe3O4磁性颗粒固定生物酶前后的磁性变化不大，这说明Fe3O4磁性颗粒经过反胶束固定生物酶后仍能保持较高的磁性，有利于回收和再利用。
[0107]最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种生物酶固定用反胶束乳液，其特征在于，包括以下重量份数的各组分: OP-1O:5?20份 正辛醇:10?35份 异辛烷:30?60份 Tr i s-HCl缓冲液:0.I?I.0份 蒸馈水:0.1?8.0份。2.如权利要求1所述的生物酶固定用反胶束乳液，其特征在于，包括以下重量份数的各组分: 0P-10:15份 正辛醇:21份 异辛烷:48份 Tris-HCl缓冲液:0.5份 蒸馏水:3.5份。3.如权利要求1所述的生物酶固定用反胶束乳液，其特征在于，包括以下重量份数的各组分: 0P-10:14份 正辛醇:22份 异辛烷:45份 Tris-HCl缓冲液:0.8份 蒸馏水:3.2份。4.如权利要求1所述的生物酶固定用反胶束乳液，其特征在于，包括以下重量份数的各组分: 0P-10:12份 正辛醇:20份 异辛烷:46份 Tris-HCl缓冲液:0.8份 蒸馏水:3.2份。5.—种用如权利要求1所述的生物酶固定用反胶束乳液固定生物酶的方法，其特征在于，包括以下几个步骤: 1)、将0P-10:5?20重量份、正辛醇:10?35重量份、异辛烷:30?60重量份、Tris-HCl缓冲液:0.1?1.0重量份、蒸馏水:0.1?8.0重量份，混合搅拌均匀，得到混合乳液； 2)、对I)所得的混合乳液进行超声波处理，形成反胶束体系； 3)、向2)所得的反胶束体系中加入待固定的生物酶I?10重量份、纳米Fe3O4磁性颗粒5?20重量份，充分搅拌，使得纳米Fe3O4磁性颗粒将生物酶固定； 4)、用蒸馏水清洗步骤3)所得的产物，获得纳米Fe3O4磁性颗粒固定的生物酶。6.如权利要求5所述的用生物酶固定用反胶束乳液固定生物酶的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的生物酶为假丝酵母脂肪酶。7.如权利要求5所述的用生物酶固定用反胶束乳液固定生物酶的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的超声波处理时超声波的强度为0.5?1.2Kff/m3，超声频率为18?40KHz。8.如权利要求7所述的用生物酶固定用反胶束乳液固定生物酶的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的超声波处理的时间为0.5?2小时。9.如权利要求5所述的用生物酶固定用反胶束乳液固定生物酶的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的纳米Fe304磁性颗粒的粒径为40?60nm。
【专利摘要】本发明公开了一种生物酶固定用反胶束乳液，包括以下重量份数的各组分：OP-10：5～20份、正辛醇：10～35份、异辛烷：30～60份、Tris-HCl缓冲液：0.1～1.0份、蒸馏水：0.1～8.0份。本发明反胶束乳液将表面活性剂分散于连续非极性溶剂中，自发形成的一种纳米级稳定聚集体，以该反胶束体系为介质进行生物酶固定，使生物酶定向地存在于反胶束的油水界面处，其活性基团定向规则的朝向有机溶剂相中，而与纳米磁性颗粒的反应基团规则的朝向水池中，极大地避免了生物酶活性基的损失，固定后的生物酶具有高效的催化性能；同时反应完成后反胶束体系可以回收和重复使用，因此具有十分广阔的发展前景。
【IPC分类】C12N11/14, C12N11/08
【公开号】CN105602930
【申请号】CN201610063882
【发明人】易世雄, 高燕, 代方银, 孙胜
【申请人】西南大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月29日