50μΜ、25μΜ、12.5μΜ、6.25μ Μ、3.125μΜ及1.56μΜ 7个浓度，每个浓度3个重复孔加药，并设空白对照，DMS0对照及阳性对 照吉非替尼(Gef itinib))，24h后加入5mg/mL的ΜΤΤ(20μ!7孔），继续培养4. Oh;弃去培养上 清，按200yL/孔加入DMS0，用酶标仪在490nm测定每孔吸光度值，计算对肿瘤细胞抑制率。
[0139] 采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率（％):
[0140] 细胞抑制率=(实验组0D值-DMS0对照组0D值)/空白对照组0D值X 100% ; IC5Q值采 用SPSS 19.0计算。
[0141 ]表一.化合物对三种肿瘤细胞的抑制活性3
[0142]
[0143] a MTT测试，每次3个平行样，置信度95%。
[0144] 参见图1，图1为化合物1，2,3,4,6,7,8分别对A549，MDA-MB-231，HCT116三种细胞 株的抑制活性结果柱状图。横坐标表示化合物编号，纵坐标标识化合物的半数抑制浓度 (IC 5Q)，图1显示，化合物1，2，3，4，6，7，8都表现出了对肿瘤细胞的抑制活性。尤其是化合物7 和8对A549，HCT116和MDA-MB-231三种细胞系都表现出了较好的抑制活性，其半数抑制浓度 (IC 5Q)小于阳性对照吉非替尼。
[0145] 实施例8:对黄色葡萄球菌Mu50，金黄色葡萄球菌RN4220和金黄色葡萄球菌Newman WT的抑制活性
[0146] 1)从牛奶管中接菌，在培养基上划线，放入培养箱中过夜培养。
[0147] 2)从平板上挑取单克隆(Mu50、RN4220、Newman)接种到3mL TSB液体培养基，放入 摇床37°C，220rpm，摇菌3_4h。
[0148] 3)用紫外分光光度计测菌液0D值，液体LB培养基调零。测量后用液体TSB培养基调 菌液0D值，使0D为0.02。
[0149] 4)在96孔板内加入0D为0.02的菌液。第一列孔内加入198yL菌液，其余孔内均加入 1 OOyL菌液。在第一列中分别加入2yL( lmg/ml)待测化合物，吹吸混匀。
[0150] 5)从96孔板内第一列吹吸混匀后吸取100yL加入第二列，第二列吹吸混匀后吸取 100yL加入第三列，依次逐列梯度稀释。最后一列吸取100yL菌液后弃掉。
[0151] 7)用封口膜封好96孔板后，放入摇床37°C，220rpm过夜培养。
[0152] 8)第二天观察96孔板孔内菌体的生长情况，记录不长菌的孔数，最小抑制浓度即 为不长菌的孔所对应的浓度。
[0153] 9)空白对照DMS0，阳性对照药物万古霉素(Van)。
[0154] Table 2.化合物对黄色葡萄球菌Mu50,金黄色葡萄球菌RN4220和金黄色葡萄球菌 Newman WT抑制活性3
[0155]
[0156] a最小抑菌浓度大于lmg/ml的化合物均未列出。
[0157] 图2结果显示化合物8表现出了较好的抑菌活性，对黄色葡萄球菌Mu50,金黄色葡 萄球菌RN4220和金黄色葡萄球菌Newman WT都有抑制活性，其中对RN4220和Newman WT的最 小抑制浓度(MIC)小于阳性对照万古霉素。而对于Mu50的MIC值与万古霉素相当。其余化合 物的最小抑菌浓度均大于lmg/ml，对于大于lmg/ml的化合物未进行进一步的研究。
[0158] 总之，本发明基于天然产物的药效团进行新的骨架设计和合成，所得的化合具有 一定的抗肿瘤和抗菌活性，有进一步研究的价值。
[0159] 本发明所用的试剂均为商业可购买得到的试剂;本发明所要求保护的具体技术方 案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。
【主权项】
1. 吗I噪[I，2-a]喀晚[4,5-b]哇嘟-7,13-二酬类化合物，其特征在于，具有如式I中所示 的结构式：式I中，R为8-10位上n(n = 0-3)个各自独立的取代基，C曲，F，Cl，Br，N02;R2为l-4位上n (n = 0-3)个各自独立的取代基，C出，F，Cl，Br，N02 ;化为氧原子，-NN出，-NOH基团。2. 根据权利要求1所述的吗|噪[1，2-曰]喀晚[4,5-6]哇嘟-7，13-二酬类化合物的制备方 法，其特征在于，包括W下步骤： 步骤1，100mL烧瓶中加入2-氨基哇嘟-3-甲酸衍生物(式n)和溶剂，滴加二氯亚讽，揽 拌加热反应溫度为30~100°C，反应时间0.5~lOh，反应结束直接减压除去多余的二氯亚讽 和溶剂，再向烧瓶中加入吗I噪酿衍生物(式虹）和溶剂在5~150°C下反应0.5~1 Oh，反应溫 度为溶剂的沸点，式n所示的化合物和式m所示的化合物的物质的量之比为1:1~10,反应 结束后冷却过滤，滤饼用甲醇洗剂，得到黄色固体，即为吗I噪[l，2-a]喀晚[4,5-b]哇嘟-7， 13-二酬类化合物，即式I所示化合物，R为C出或F或Cl，或化或N02 ; 步骤2，50ml烧瓶中加入吗I噪[1，2-a]喀晚[4，5-b ]哇嘟-7，13-二酬类化合物和溶剂，然 后加入盐酸径胺或者水合阱W及催化量的乙酸，式I所示化合物与盐酸径胺或水合阱的物 质的量比为1:1~10,在10~l〇〇°C下反应，反应1~化后冷却，过滤，滤饼用甲醇洗，得浅黄 色固体，干燥后得到结构式为式I的化合物，Ri为NOH或NN出。3. 根据权利要求1所述的吗I噪[1，2-a ]喀晚[4，5-b ]哇嘟-7，13-二酬类化合物，具体结 构式如下： 当R=H,化= 0，R2 =邸寸，所述式I中的化合物为式1所示的衍生物；当R=9-F，Rl = 0，R2 =邸寸，所述的式忡的化合物为式2所示的衍生物；当R=9-C1，Rl = 0，R2 =邸寸，所述式忡的化合物为式3所示的衍生物；当R=9-化，Rl = O，R2 =邸寸，所述式I中的化合物为式4所示的衍生物；当R=9-C册，Rl = 0，R2 =邸寸，所述式I中的化合物为式5所示的衍生物；当R=8-C1，9-CH3，Rl = 0，R2 =邸寸，所述式忡的化合物为式6所示的衍生物；当R = 8，9-C1，R1 =0，R2 = H时，所述式I中的化合物为式7a所示的衍生物；当R = 9，10-Cl，R1 =0，R2 =邸寸，所述式I中的化合物为式化所示的衍生物；当1? = 8-(：1-9斗，1?1=0，1?2 =酣寸，所述式1中的化合物为式8曰所示的衍生物；当1? = 9斗-IO-Cl，Rl=O，R2 = H时，所述式I中的化合物为式8b所示的衍生物8b;当R=H，Rl =NN肥，R2 =邸寸，所述式I中的化合物为式9所示的衍生物；当R=H, Rl=NOH, R2 =邸寸，所述式忡的化合物为式10所示的衍生物；当R=9-N02，Rl = 0，R2 = H时，所述式I中的化合物为式11所示的衍生物；当R=H, Rl = 0，R2 = 2-即寸，所述式I中的化合物为式12所示的衍生物；当R=H, Rl = O, R2 = 2-C1时，所述式I中的化合物为式13所示的衍生物；当R=H，Rl = O，R2 = 2-化时，所述式I中的化合物为式14所示的衍生物；当R=H, Rl = 0，R2 = 2-C册时，所述式I中的化合物为式15所示的衍生物；4. 根据权利要求1所述的化合物为活性成分的药物组合物。5. 根据权利要求1所述化合物为原料药的药物制剂。6. 根据权利要求1所述的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。7. 根据权利要求1所述的化合物在制备治疗抗菌药物中的应用。8. 根据权利要求6所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、滴丸剂、微丸剂、 口服液、水针剂、输液剂、粉针剂或冻干粉针剂。
【专利摘要】吲哚[1,2-a]嘧啶[4,5-b]喹啉-7,13-二酮类化合物，具有如式Ⅰ中所示的结构式：制备方法为：结构式Ⅱ所示的化合物和结构式Ⅲ所示的化合物按照物质的量比1:1～10，反应0.5～10h，得到结构式为Ⅰ的化合物，R1为氧原子，即吲哚[2,1-b]嘧啶[4,5-b]喹啉-7,13-二酮结构；以吲哚[2,1-b]嘧啶[4,5-b]喹啉-7,13-二酮和盐酸羟胺或水合肼为原料，物质的量比为，化合物Ⅰ:盐酸羟胺或水合肼按照1:1～10的比例，反应1～5h，干燥后得到结构式为Ⅰ的化合物，R1为NOH或NNH2；应用抗肿瘤和抗菌组合药物中；原料廉价易得，产率高，操作简单；用于治疗肿瘤及杀菌。
【IPC分类】A61P35/00, A61P31/04, A61K31/519, C07D471/14
【公开号】CN105646490
【申请号】
【发明人】侯宝龙, 王翠玲, 梁海华, 刘建利
【申请人】西北大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月27日