[0045](I)通过优化纳米金颗粒(亦称“纳米金球”、“金纳米球”、“金纳米粒子”、“纳米金粒子”等)的大小，调控其光学波长在525-560nm之间，进而使其中纳米金颗粒的波长与试纸条读取仪光源波长达到最佳的耦合效果，并使检测大肠杆菌0157:H7的灵敏度最高(比传统胶体金试纸条检测大肠杆菌0157:H7的灵敏度提高至少2个数量级)，检测范围宽(12 ?107CFU/mL，优选在 12 ?105CFU/mL)；
[0046](2)通过优化纳米金颗粒的单分散性，使试纸条对于大肠杆菌0157:H7的检测灵敏度相应提高；
[0047](3)通过使用单分散性好的纳米金粒子，不仅具有散射光强，可提高试纸条的灵敏度，还可大幅减少非特异性反应，降低假阳性，有效增强试纸条的检测稳定性达成双重增强检测灵敏度的效果；
[0048](4)通过优化免疫层析反应，免去了将胶体金喷在结合垫上的步骤，免疫学反应结果更加稳定，定量检测时变异系数减小，非特异性降低。
【附图说明】
[0049]图1是本发明一典型实施方案之中使用免疫层析试纸条(胶体金试纸条)检测阴性样本的示意图；
[0050]图2是本发明一典型实施方案之中使用免疫层析试纸条检测阳性样本的示意图。
【具体实施方式】
[0051]本发明主要是通过优化纳米金粒子的光学性能和分散度，实现光学理论上能与试纸条读取仪光源达到最佳的波长共轭效果，提高胶体金试纸条对大肠杆菌0157:H7的检测性能。
[0052]进一步的讲，本发明是根据胶体金试纸条的检测原理，纳米金粒子标记的抗体I与大肠杆菌0157:H7结合后，再分别与检测线和控制线上抗体2和抗体3相结合的结果，通过判断检测线上纳米金粒子聚集的颜色变化(肉眼辨认)或检测线上的光强变化(试纸条读取仪的光学信号)来定性或定量检测大肠杆菌0157:H7。检测线上纳米金的颜色或光学信号变化的核心来源纳米金粒子的光学性质，因此，精确调控纳米金粒子的光学性质以及调控纳米金光学信号与试纸条读取仪光源信号的共轭效果，可以最大限度地提高胶体金试纸条的检测灵敏度。
[0053]例如，在本发明的一典型实施案例中，本发明可通过如下技术方案实现:
[0054](I)制备具有不同等离子光学性能的纳米金球:将合适浓度的，例如2.5X10 4MHAuCl4水溶液与合适浓度的，例如0.1% (W/W)柠檬酸三钠溶液在100-150°C恒温回流，使纳米金粒子均匀生长，液颜色从浅黄一浅紫色一红色一酒红色，得到粒子分散度优良的纳米金球(静态光散射测试的粒子分散度PDI为0.20)。调整金离子溶液与柠檬酸钠的比例，得到不同大小(18-60nm)具有不同等离子光学波长(520-560(^1)的纳米金球。
[0055](2)制备具有不同单分散度的纳米金球:取合适浓度的，例如，例如10mL2.5X10 4M HAuCl4溶液煮沸，加入合适浓度的，例如ImL I %柠檬酸三钠溶液，溶液颜色从浅黄一蓝色一深蓝一红色，当溶液的颜色完全变为透明的红色时，停止加热，冷却至室温，得到单分散度PDI为0.65的纳米金颗粒。然后与步骤(I)具有相同光学波长单分散度roi为0.20的纳米金混合，调整不同比例混合，可以得到粒子单分散度PDI在0.20-0.65之间的不同纳米金球。
[0056](3)纳米金的标记:取一定量的，例如3mL纳米金溶液,调节pH,加入一定量的,例如0.3mL大肠杆菌0157:H7单克隆抗体，搅拌lh，加入1.5mL2% BSA封闭0.5h，加入1.5mL5% PEG20000封闭0.5h,9000r/min离心30min，去上清，以一定量的，例如0.3mL复溶液复溶，并将获得的金标抗体于4°C存放备用。
[0057](4)制作免疫层析试纸条:将大肠杆菌0157:H7兔多抗和驴抗鼠二抗喷到检测垫(可选用硝酸纤维膜)上分别作为检测线和质控线，浓度均为1.0?2.0mg/mL，37°C真空干燥过夜，将样本垫、检测垫、吸水纸、滤纸依次粘贴在基板(例如PVC底板)上，贴好后将其切成合适尺寸的，例如4_宽的试纸条，装入卡中。将制备好的试纸条置于锡箔袋中，加入干燥剂后密封并置于干燥缸保存备用。
[0058](5)利用双抗夹心法对样品进行目测和使用仪器测定结果:取一定量的，例如4 μ L制备好的金标抗体颗粒滴加到ELISA孔板中，将一定量的，例如100 μ L稀释好的不同浓度梯度的菌液加入有金标抗体的ELISA孔板中，取出金-抗体-菌复合物滴加到试纸条的样品孔中，1min后用肉眼观察试纸条颜色变化，并用试纸条读取仪读取，记录T、C值和τ/c的值。
[0059](6)检测结果的判定:大肠杆菌0157:Η7兔多克隆抗体包被在硝酸纤维膜上形成检测线，驴抗鼠二抗包被在硝酸纤维膜上作为质控线。当待测样品中不含大肠杆菌0157:Η7时，金标抗体将不与检测线上的抗体作用，只与质控线上的抗体结合，可通过肉眼(检测线不显色，质控线显色)和试纸条读取仪(检测线无信号，质控线有信号)，判断其为阴性(见图1)。若样品中含有一定浓度的大肠杆菌0157:H7时，大肠杆菌0157:H7先与金标抗体结合，形成大肠杆菌0157:H7-抗体-纳米金复合物，由于免疫学反应原理形成抗体一抗原(大肠杆菌0157:H7)—纳米金抗体复合物而富集在检测线上,多余的纳米金-抗体标记物继续移动到质控线位置，可通过肉眼(检测线显色，质控线显色)和试纸条读取仪(检测线无信号，质控线有信号)，判断其为阳性(见图2)。如果质控线处没有颜色或者没有明显信号，说明试纸条有质量问题，测试无效。
[0060]以下结合若干较佳实施例对本发明的技术方案作进一步的解释说明，但其中的实验条件和设定参数不应视为对本发明基本技术方案的局限。并且本发明的保护范围不限于下述的实施例。
[0061]实施例1:使用单分散度好的纳米金对牛奶中大肠杆菌0157:H7的检测
[0062]1.制备纳米金-M 10mL 2.5X10 4mol/mL HAuCl4 溶液加热至 100-150。。，加入1mL I %柠檬酸三钠溶液，溶液颜色从浅黄一浅紫色一浅红色一酒红色，当溶液的颜色完全变为透明的酒红色时，继续回流1min后停止加热，冷却至室温，4°C保存，得到分散度PDI为0.20的纳米金颗粒，紫外光谱吸收波长为526nm。
[0063]2.纳米金的标记:取3mL上述纳米金溶液，调节pH，加入0.3mL大肠杆菌0157:H7单克隆抗体，搅拌lh，加入1.5mL2 % BSA封闭0.5h，加入1.5mL 5 % PEG20000封闭
0.5h, 9000r/min离心30min,去上清,0.3mL复溶液复溶，4°C备用。
[0064]3.取25mL灭过菌的牛奶加入到225mL培养基中，接种一定浓度的大肠杆菌0157:H7，温度在36°C 土 1°C，时间为8?18h，震荡培养。
[0065]4.制作大肠杆菌0157:H7免疫层析试纸条:将大肠杆菌0157:H7兔多抗和驴抗鼠二抗喷到硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线，浓度均为1.0?2.0mg/mL,喷量均为
1.0?2.5 μ L/cm, 37°C真空干燥过夜，将样本垫、硝酸纤维膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上，贴好后将其切成4_宽的试纸条，装入卡中。将制备好的试纸条置于锡箔袋中并加入干燥剂密封，置于干燥缸保存备用。
[0066]5.利用双抗夹心法对样品进行目测和使用仪器测定结果:将2中制备的金标记抗体加入ELISA板中，将培养大肠杆菌0157:H7的牛奶100 μ L滴加到孵育纳米金抗体的酶标板中，将复合物加入试纸条加样孔中，1min后用肉眼判读并用试纸条读取仪读取，记录Τ、C值和Τ/C的