0057] 在制备为100mM、pH10.5(关于C肥S缓冲液，仅为P朋.0和pHlO.5)的各缓冲液30ml 中添加 Savinase酶液lOOyL而制成分解液，将剪切成2cmX2cm(120mg)的聚乳酸膜进行浸 溃，W45°C、100巧m使之振动16小时。在16小时后取出膜而W70°C使其干燥3小时，设为膜的 初期重量-分解后重量=分解量(mg)。
[005引聚乳酸膜的制作
[0化9]使用Labo Plasto Mill(株式会社东洋精机制作所制）W21(TC将聚乳酸 (Na化reworks公司制）制膜为厚度100皿的聚乳酸膜。
[0060]使用的生物分解性树脂分解酶如下所述。
[0061 ] Savinase 酶液
[0062] 使用Savinase 16.0L(novozymes 公司）。
[0063] 使用W下缓冲液。
[0064] (i)Tris 缓冲液(7.0 ~9.0pKa = 8.06)
[0074] (vi)Tricine(S径甲基甘氨酸)缓冲液(7.2~9.1地曰1 = 2.3地曰2 = 8.15)
[0075]
[0076] 对于上述(i i )C肥S缓冲液，准备p朋.0和pHlO. 5运巧巾，对于其它缓冲液，使用调节 为抑10.5的缓冲液。
[0077](实施例 1-1)
[0078] 在制备为lOOmM、抑10.5的Tris缓冲液30ml中添加 Savinase酶液10化L而制成分解 液，将剪切成2cmX2cm(120mg)的聚乳酸膜进行浸溃，W45°C、100巧m使之振动16小时。在16 小时后取出膜而W70°C使其干燥3小时，设为膜的初期重量-分解后重量=分解量(mg)。
[00巧](实施例1-2)
[0080]除了设为将缓冲液制备为100mM、p朋.0的CHES缓冲液W外，与实施例1-1同样地进 行。
[00川（比较例1-1)
[0082] 除了将缓冲液设为憐酸缓冲液W外，与实施例1-1同样地进行。
[0083] (比较例 1-2)
[0084] 除了将缓冲液设为Bicine缓冲液W外，与实施例1-1同样地进行。
[00财（比较例1-3)
[0086] 除了将缓冲液设为TAI^缓冲液W外，与实施例1-1同样地进行。
[0087] (比较例 1-4)
[0088] 除了将缓冲液设为Tricine缓冲液W外，与实施例1-1同样地进行。
[0089] (比较例 1-5)
[0090] 除了将CHES缓冲液的抑设为10.5W外，与实施例1-2同样地进行。
[0091] 将实施例1-1~1-2和比较例1-1~1-5中的聚乳酸膜的分解的结果示于下述的表1 和图1。
[0092] 根据运些结果可理解，使用了本申请规定的缓冲液的实施例1-U1-2可高度地分 解聚乳酸膜。
[0093] [表1]
[0094] 表 1 Γ00951
[0096] 2.对根据本发明的第2方式的生物分解性膜的酶分解试验
[0097] 在添加 Savinase、Esperase或Proteinase Κ(蛋白酶Κ)酶液且制成分解液的lOOmM CHES缓冲液(p朋.0)30ml中浸溃剪切成2cmX 2cm( 120mg)的聚乳酸膜，W45°C、lOOrpm使之 振动16小时。在16小时后取出膜而W70°C使其干燥3小时，设为膜的初期重量-分解后重量 =分解量(mg)。制成在纵轴设为分解量(mg)/初期膜表面积(8cm2 )=单位面积的分解量、在 横轴设为初期酶浓度(mg/mU/初期膜表面积(8cm2) =单位面积的初期酶添加量的图，在将 最佳浓度的存在的酶设为0、将除此W外的酶设为X、将在最佳浓度的分解量设为100 % 时，将可看到60% W上的分解量的浓度设为〇,将小于60%的情况设为X。
[0098] 聚乳酸膜的制作
[0099] 使用Labo Plasto Mill(株式会社东洋精机制作所制）W210°C将聚乳酸 (Na化reworks公司制）制膜为厚度100皿的聚乳酸膜。
[0100] 使用的生物分解性树脂分解酶如下所述。
[0101] (i)Savinase 酶液
[0102] 使用 Savinase 16.0L(novozymes 公司）。
[0103] (ii)Esperase 酶液
[0104] 使用Esperase 8.0L(novozymes公司）。
[0105] (iii)p;roK(P;roteinase K)酶液
[0106] 使来自TritiracMum a化um的ProteinaseK粉末20mg溶解于含有50w/w%甘油的 0.05M Tris-HCl缓冲液(P册.0) 1ml，制成proK(ProteinaseK)酶液而使用。
[0107] (实施例2-1)
[010引添加 Savinase酶液50μ1，在lOOmM C皿S缓冲液(P朋.0)30ml中浸溃剪切成2cmX 2cm( 120mg)的聚乳酸膜，W45°C、100巧m使之振动16小时。在16小时后取出膜而W70°C使其 干燥3小时，设为膜的初期重量-分解后重量=分解量(mg)。
[0109] (实施例2-2~2-6、比较例2-1~2-18)
[0110] 采用与实施例2-1同样的缓冲液、乳酸膜和分解条件，如下述表2所示地改变酶液 及其量而进行酶分解试验。
[0111] 将各实施例和比较例的试验条件和分解试验的结果示于W下的表2和图2~4。
[0112] [表 2]
[0113] 表2
[0114]
[0115] 由图2、3可理解，对于作为本申请的第2方式规定的分解酶的Savinase和 Esperase，若使单位表面积的酶浓度发生改变，则存在生物分解性树脂的分解成为最大的 最佳浓度。与此相对，如图4所示，在作为W往的分解方法中主要使用的酶的蛋白酶K的情况 下，不存在生物分解性树脂的分解成为最大的最佳浓度。此外，W往即使在假定使用具有最 佳浓度的生物分解性树脂分解酶的情况下，也没有认识到W生物分解性树脂的单位表面积 的酶浓度为基准而存在分解峰，在无法得到高度分解的酶浓度条件下进行了分解。本发明 的第2方式是发现在将生物分解性树脂在缓冲液中分解的条件下规定的酶具有最佳浓度运 样的性质用于提高分解率而得到的。
【主权项】
1. 一种方法，是在含有最佳pH为7.5以上的生物分解性树脂分解酶的缓冲液中分解生 物分解性树脂的方法，所述缓冲液在其缓冲的平衡式的单侧不存在来自缓冲成分的阴离 子，且其pH被调整为给予平衡向不存在所述阴离子的一侧移动的条件的pH区域内。2. 如权利要求1所述的方法，其中，缓冲液的缓冲成分为三氨基甲烷或2-环己基氨基乙 烷磺酸。3. -种方法，其特征在于，是在含有具有最佳浓度的生物分解性树脂分解酶的酶反应 液中分解生物分解性树脂的方法，将在最佳浓度的生物分解性树脂分解率设为1〇〇 %时，在 设为60%以上的生物分解性树脂分解率的酶浓度的反应液中进行分解。4. 如权利要求1~3中任一项所述的方法，其中，生物分解性树脂分解酶为碱性蛋白酶。5. 如权利要求1~4中任一项所述的方法，其中，生物分解性树脂含有聚乳酸系树脂。6. 如权利要求1~5中任一项所述的方法，其中，生物分解树脂为颗粒、膜、粉末、单层纤 维、芯鞘纤维或胶囊的形态。
【专利摘要】本发明的目的在于提供一种有效率地分解生物分解性树脂的方法。尤其是，本发明涉及一种方法，其是在含有最佳pH为7.5以上的生物分解性树脂分解酶的缓冲液中分解生物分解性树脂的方法，上述缓冲液在其缓冲的平衡式的单侧不存在来自缓冲成分的阴离子，且其pH被调整为给予平衡向不存在上述阴离子的一侧移动的条件的pH区域内。进而，本发明涉及一种方法，其是在含有具有最佳浓度的生物分解性树脂分解酶的酶反应液中分解生物分解性树脂的方法，其特征在于，将在最佳浓度的生物分解性树脂分解率设为100％时，在设为60％以上的生物分解性树脂分解率的酶浓度的反应液中进行分解。
【IPC分类】C12M1/00, C08J11/18, C12Q1/37
【公开号】CN105683271
【申请号】
【发明人】片山传喜
【申请人】东洋制罐集团控股株式会社
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年9月25日