专利名称：滨梅细胞工程苗大规模繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物细胞工程技术领域。
滨梅(Prunus maritima)是一种沙生灌木果树，它能在干旱(包括很低的土壤含水量)、瘠薄、大风、扬沙、不稳定基质和高盐分的环境中适应生存。但由于种子萌发周期长，种子萌发率很低，难以大规模繁殖推广。
目前国内外尚无滨梅细胞工程苗大规模生产技术及滩涂引种的成套技术研究及相关报道。
愈伤组织的继代培养是决定其能否顺利进入分化的关键。通过调整改善光照、激素条件、琼脂类别、氮源和有机化合物等因子，在遏止愈伤组织的褐化方面取得了成功，促使其继代增殖的正常进行，从而获得绿色致密的胚性愈伤组织。
本发明建立了滨梅优质胚性细胞系，从绿色致密的胚性愈伤组织转入分化，植株再生频率为100％。
在以上研究的基础上，本项发明建立了滨梅组织培养再生苗的繁殖方法如下(1)在添加2，4-D和IBA激素条件下由滨梅外植体(幼胚)诱导愈伤组织；(2)在添加2，4-D、NAA、BA、ZT等激素条件下，进行愈伤组织的继代培养；(3)在添加BA和ZT等激素条件下，诱导培养再生植株；(4)在添加IBA、KT和AC等激素条件下，培养出完整的(生根的)再生植株；该繁殖方法性能稳定，试验重复性好，试管再生苗分化、丛生性状良好，优质试管再生苗年生产能力为100万株。
(5)混株群体自交去杂——决选单株混合，硫酸脱绒后的种子经卡那霉素浸种，营养钵播种育苗去杂苗，保留子叶正常绿色的棉苗。当棉苗长到3叶1心，移入基础种繁殖田，在初花期根据大田性状去异型株，保留株型与原品种基本一致的单株，人工自交，在吐絮期混收自交花。
(6)自交种冰箱保存备用——自交种硫酸脱绒晒干，在冰箱或冷库-5℃左右温度条件下保存备用。
(7)生产原种——每年按需要取适量自交种，重复苗床去杂步骤，大田繁殖得核心种；核心种开放授粉繁殖得基础种；基础种繁殖即为抗虫棉原种，抗虫棉原种繁殖得生产用的原种一代。
有关本实施例的试验研究情况如下1、国内外抗虫棉品种纯度对比用107单位/L浓度的卡那霉素浸种，分析目前国内在生产上推广使用的6个抗虫棉品种的黄斑率，结果见表1。由表可见，4个国产抗虫棉，其中GK22的品种纯度为100％，GK14为91.78％，JK103为83.12％，双价抗虫棉SGK321的品种纯度为98.52％，平均抗虫性纯度为93.2％；而美国2个抗虫棉32B、33B的品种纯度均为100％，平均抗虫性纯度为100％。可见，目前国产抗虫棉纯度不如国外品种，急需加强良种保纯力度。
表1国产抗虫棉与国外抗虫棉抗虫性纯度比较
<p>通过体细胞胚的诱导培养研究，大规模生产滨梅的细胞工程苗，并用细胞工程等技术改良滨梅的农艺品质，以利于推广开发。如有足够投资，用此技术方案，可年生产滨梅试管苗100万株以上，每年从细胞工程苗可获直接经济收入200万元。滨梅在春季展现的艳丽的花朵，无疑是美化景观的优良树种；而秋季直径为1.5cm的滨梅果实则可以收获用来加工果酱和蜜饯。兼有美化环境和恢复沙生植被的特点，使之在海滨发展可持续的果树系统的需求方面将有所作为。
盐土农业非常适合我国的国情，有利于解决我国地少人多、食物和蛋白质短缺的问题，开发海滩盐土非但不占良田，还可增加农业用地；因此，充分利用盐土和海水资源，大力开发耐盐耐海水植物资源，有望为我国的海洋产业创造巨大的新增效益。
权利要求
1.一种滨梅细胞工程苗快繁方法，其特征是利用滨梅幼胚进行愈伤组织诱导培养，培养出完整的滨梅试管苗，其繁殖方法为(1)添加2，4-D和I BA激素条件下由滨梅外植体幼胚诱导愈伤组织；(2)在添加2，4-D、NAA、BA、ZT等激素条件下，进行愈伤组织的继代培养；(3)在添加BA和ZT等激素条件下，诱导培养再生植株；(4)在添加IBA、KT和AC等激素条件下，培养出完整的滨梅试管苗；
2.一种滨梅试管苗移栽方法，其特征是用权利要求1产出的优质滨梅试管苗转移至无土栽培苗床，配以锯木屑碳渣疏松型培养基，二者体积比为10∶1，间隔浇灌海水性营养液，无土栽培2-3个月，生产出优质苗木。
全文摘要
本发明属于植物细胞工程技术领域。运用滨梅组培细胞工程苗快繁技术和滨梅再生苗扩繁技术，大规模生产滨梅耐盐优质细胞工程苗，以克服该植物萌发周期长、种子萌发率低，阻滞大规模繁殖推广的弊端，适应我国海岸带耐盐木本植物引种开发的迫切需要，从而推动我国盐土农业的可持续发展。
文档编号A01H4/00GK1425278SQ03112698
公开日2003年6月25日 申请日期2003年1月17日 优先权日2003年1月17日
发明者郑丽屏, 钦佩, 龚津平, 赵福庚, 谢民 申请人:南京大学