一种解淀粉芽孢杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus?amyloliquefaciens）SZ-60，其特征在于，其保藏号为CGMCC?No.8277。所述菌株在牛肉膏蛋白胨（NB）培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆起、表面湿润、半透明；镜检呈杆状，大小为0.3～0.4×3.2～3.3μm，具鞭毛，G﹣，有芽孢在含有2%～5%的NaCl的牛肉膏蛋白胨（NB）培养基上均能生长；所述的牛肉膏蛋白胨（NB）培养基的配方为：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂17g，水1000ml，pH?6.8～7.2。解淀粉芽孢杆菌（Bacillus?amyloliquefaciens）SZ-60对引起人参根腐病、疫病、菌核病、锈腐病、黑斑病和立枯病的主要病原菌具有显著拮抗作用。本发明还提供解淀粉芽孢杆菌SZ-60在防治植物真菌病害中的应用，或在制备防治植物真菌病害的微生物制剂中的应用。
【专利说明】一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其应用。
【背景技术】
[0002]人参(Panax ginseng C.A.Mey)为五加科人参属多年生宿根阴性双子叶药用植物，是我国的名贵药材，有“百草之王”的美誉。人参在中国、韩国、朝鲜、俄罗斯等国家有大面积种植，其中，中国东北是人参的主产区，已成为当地的重要支柱产业之一。人参的长期人工种植和品种选育难度大导致人参种质退化、病害严重、质量差、产量低。化学农药的大量使用，导致农药残留和环境污染，降低了人参药材的安全性和商品价值。病害防控问题已成为制约人参产业可持续发展的重大问题之一。
[0003]人参病害约有20~40种，其中，以下6类病原菌是导致人参常见病害并限制人参产业发展的主要病原菌:由腐皮镰孢菌(Fusarium solani)导致的人参根腐病一般发病率在30%左右，六年生人参根腐病造成的死亡率可达50%~80%，主要危害幼苗根部和根茎部(地表以下茎部)，腐烂的参根呈黑褐色湿腐状，后期糟朽状，仅存中空的根皮；恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)导致的人参疫病发病率可达70%,其症状为发病轻时叶片上产生不规则的暗绿色斑，重者茎叶枯萎，根部腐烂，植株成片枯死，减产严重；人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)导致的人参菌核病主要危害3年生以上参根，发病部位为芽苞、根和根茎，参根被害后，初期在表面生少许白色绒状菌丝体，以后，内部迅速腐败、软化，细胞全部被消解殆尽，只留下坏死的外表皮，表皮内外形成许多鼠粪状的菌核；人参链格孢菌(Alternaria panax)导致的人参黑斑病一般发病率20%_30%，严重时达到100%，造成早期落叶，植株枯萎，不结实，参根和参籽减产；立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)导致的人参立枯病是人参苗期主要病害之一，在低温湿度大的条件下，发展蔓延极为迅速，一般发病率为8~30%，严重者可达40%左右，病菌使幼苗在地面3~5厘米干湿土交界面的茎部缢缩、腐烂，切断输导组织，致使幼苗倒伏；毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)导致的人参锈腐病严重时发病率达70%以上，该病发生于根的各部位，病斑呈铁锈色，由点至面扩散至全根，土壤湿度大、透气不好、腐殖质层厚，发病重。
[0004]长期以来通过使用化学农药等化学防治措施来防治人参病害远远未达到人们预想的效果，而且过量使用化学农药会破坏土壤的微生态环境，加重环境污染，也使有毒物质在参根内大量积累，降低人参的使用安全性和商品价值，因此，人们把防治重点逐步转向生物防治措施和农业防治措施上。在农作物植物保护领域，利用作物根际土壤筛选对病原菌具有显著拮抗效果的土壤微生物，并制成微生物制剂是生物防控研究的重要手段，也是有益微生物资源开发的重要途径。
[0005]生物防治是以生态学原理为基础，利用生物物种间的相互作用，以一种或一类生物抑制另一种或另一类生物。生物防治最大的优点是不污染环境，没有农药残留，这是农药等非生物方法防治病虫害所无法比的。利用拮抗微生物防治病原微生物是生物防治技术的重要组成部分，它避免了化学农药使用带来的一系列植保、环境和能源方面的问题，避免了农药残留对人畜的危害，更重要的是促进了农业的可持续发展。美国已有GB03、MBI600、QsT713和解淀粉枯草芽孢杆菌变种等4株枯草芽孢杆菌生防菌株获得环保局商品化或有限商品化生产应用许可。在德国解淀粉枯草芽孢杆菌变种FZB24被商业化生产，用于控制粮食作物的不同真菌病害。
[0006]芽孢杆菌(Bacillus)是植物病害生物防治研究中的重要微生物之一，其种类多分布广，是土壤和植物微生态的优势种群。该类微生物通过分泌抗生物质和生长竞争，在防治植物病害方面发挥多种有益作用。目前利用解淀粉芽孢杆菌防治人参真菌性病害未见报道。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于:针对人参生产中的主要真菌性病害，尤其是人参土传病害发生面积日益扩大，化学药剂防治除易造成环境污染和农药残留外，防效也不理想的实际情况，提出一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株SZ-60及其在分别引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病和菌核病的腐皮镰孢菌(F.solani)、毁灭柱孢菌(C.destructans)、人参链格抱菌(A.panax)、立枯丝核菌(Rh.solani)、恶疫霉菌(Ph.cactorum)和人参核盘菌(S.schinseng) 6种病原菌防控上的应用。
[0008]本发明提供了一种对上述引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病和菌核病的6种病原菌均具有良好防控作用的解淀粉芽孢杆菌SZ-60，该菌株的保藏名称为解淀粉芽孢杆菌SZ-60,分类命名为Bacillus amyloliquefaciensSZ-60,保藏单位为:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期:2013年9月25日，保藏编号:CGMCC N0.8277，其 16SrDNA 序列长度为 1436bp，具体如 SEQ ID No:l 所示。应用 BLAST软件和DNAMAN软件等进行分析，将SZ-60菌株的16SrDNA序列通过BLAST比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。与SZ-60菌株相似性最高的是Bacillusamyloliquefaciens,同源性达到99%。根据MEGA5.10Beta2软件以UPGMA法构建系统发育树发现，SZ-60与Bacillus amyloliquefaciens同属一个遗传分枝,亲缘关系十分接近,亲源性达到了 100%。结合形态学和生理生化性状的鉴定结果，可以确认本发明的菌株SZ-60为解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)o
[0009]本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60在牛肉膏蛋白胨(NB)培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆起、表面湿润、半透明；镜检呈杆状，大小为0.3~0.4X3.2~3.3 iim，具鞭毛，G -，有芽孢；其能在25°C~40°C的温度下生长，其最适生长温度为32°C ;其生长pH范围为6.5~8.0，最适生长pH为7.2 ;需氧生长；硝酸盐还原反应生成红色化合物；接触酶测定为阳性；脂肪酶反应为阴性；酪蛋白、酪氨酸反应呈阴性；不能利用D-葡萄糖、D-木糖；淀粉水解试验镜检有糊精生成；明胶液化试验呈阳性；柠檬酸盐利用试验培养基呈酸性(绿色)；V-P(pH 7.0)测定生成红色化合物；L-阿拉伯糖、甘露醇检测呈阳性；在含有2%~5%的NaCl的牛肉膏蛋白胨(NB)培养基上均能生长。所述的牛肉膏蛋白胨(NB)培养基的配方为:牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaC15.0g，琼脂17g，水1000mL, pH 6.8 ~7.2。
[0010]本发明还涉及解淀粉芽孢杆菌SZ-60在防治植物真菌病害中的应用，或在制备防治植物真菌病害的微生物制剂中的的应用，所述植物优选为人参，所述真菌优选为引起人参根腐病的腐皮镰孢菌(F.solani)、引起人参锈腐病的毁灭柱孢菌(C.destructans) ><71起人参黑斑病的人参链格孢菌(A.panax)、引起人参立枯病的立枯丝核菌(Rh.solani)、弓丨起人参疫病的恶疫霉菌(Ph.cactorum)和引起人参菌核病的人参核盘菌(S.schinseng)这6种病原菌中的一种或多种。本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60对人参还具有促生长的作用。
[0011]本发明还涉及含有解淀粉芽孢杆菌SZ-60的全培养液培养物和解淀粉芽孢杆菌SZ-60的孢子的微生物制剂，其可通过以下制备方法制备得到:
[0012](1)将解淀粉芽孢杆菌SZ-60试管种接种于用1000mL三角瓶装的300mL营养肉汤酵母膏(NBY)培养液中，在180转/min，30°C下培养36小时，获得发酵菌液；
[0013](2)将发酵菌液在以种子罐体积20%接种于种子罐中的发酵培养液中发酵培养，溶氧量为18~20%，搅拌速度200rpm，种子罐的温度30~34°C，接种发酵菌液4小时后，每隔2小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测，直到发酵液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时，获得发酵菌种，种子罐中的发酵时间为12~16小时；
[0014](3)将种子罐中发酵菌种的10%接种于发酵罐中的NBY培养液中发酵培养，溶氧量为18~20%，搅拌速度200rpm，发酵罐的温度30~34°C，接种发酵菌种4小时后，每隔2小时对发酵罐中的发酵液进行发酵质量检测，观察菌含量，直到发酵罐发酵液中的最终培养物(包括菌和芽孢)生物量为109cfu/ml以上、芽孢含量大于或等于90%时，立即将发酵液出罐，进行分装，获得SZ-60微生物制剂；发酵罐中的发酵时间为24~36小时。
[0015]NBY培养液的配方为:牛肉膏3.5g，蛋白胨l0.0g，酵母浸膏5.0g，麦芽浸膏10g，葡萄糖5.0g，水1000mL，pH6.8~7.2 ;制备方法为:称取牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、麦芽浸膏、葡萄糖放入1000mL水中，充分混匀后将pH调整至6.8~7.2，1000mL三角瓶中装量为300mL培养液，用双层封口膜封好三角瓶口，121°C湿热灭菌30分钟，冷却后备用。发酵培养液的配方以重量百分比计为:大豆粉2.0%，豆饼粉1.5%，淀粉0.5%，酵母膏0.2%，玉米浆
0.2%，NaCl0.1%，Ca(HCO3)20.2%，余量为水，ρΗ7.0~7.2 ;制备方法为在种子罐中加入所需的水，按比例加入大豆粉、豆饼粉、淀粉、酵母浸膏、玉米浆、NaCUCa(HCO3)2，充分搅拌，将发酵培养液PH调整到7.0~7.2，密封加料孔，用高温蒸汽灭菌2小时，冷却后立即接种。
[0016]在种子罐或发酵罐的发酵过程中，当出现较多泡沫时，可以加入消泡剂，所述的消泡剂为有机娃，加入量以种子te或发酵te中的泡沫不&出为准；发酵中发酵完成后，在发酵罐中加入占罐中液体总体积万分之二的苯甲酸防腐剂，搅拌均匀，再出罐进行分装。
[0017]通过上述发酵工艺得到的发酵液即为一种微生物杀菌剂。本发明的微生物制剂可以以稀释液的形式均匀地施加到土壤中，微生物制剂与水的稀释体积比为1:100。另外，稀释液中还可以添加助剂有机硅，有机硅与稀释液的体积比为1:5000。
[0018]本发明的优点在于，保藏号为CGMCC N0.8277的解淀粉芽孢杆菌SZ-60对分别引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病和菌核病的腐皮镰孢菌(F.solani)、毁灭柱孢菌(C.destructans)、人参链格抱菌(A.panax)、立枯丝核菌(Rh.solani)、恶疫霉菌(Ph.cactorum)和人参核盘菌(S.schinseng) 6种病原菌均具有良好的防治效果,对人参具有促生长作用，无毒无致病性，对人畜安全，不污染环境；同时，生防菌剂稀释后直接施加到土壤中对植物进行灌根处理即可发挥其杀菌作用，能显著改善人参根际环境中微生物群落的合理结构，形成一个生物多样化的人参根际土壤微生态环境，从而有效地、持久地控制人参真菌性病害的流行。【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1:本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对毁灭柱孢菌(CyI indrocarpondestructans)菌丝的生长平板抑制作用。
[0020]图2:本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对腐皮镰孢菌(Fusarium solani)菌丝的生长平板抑制作用。
[0021]图3:本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对人参链格孢菌(Alternaria panax)菌丝的生长平板抑制作用。
[0022]图4:本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对人参核盘菌(Sclerotiniaschinseng)菌丝的生长平板抑制作用。
[0023]图5:本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)菌丝的生长平板抑制作用。
[0024]图6:本发明的解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)菌丝的生长平板抑 制作用。
[0025]图7:SZ-60对人参的促生长作用(A:空白，B:浇注SZ-60菌悬液)。
[0026]图8:SZ-60对毁灭柱孢菌引起的人参锈腐病的防治效果(A:空白，B:浇注SZ-60菌悬液)。
[0027]图9:SZ_60对恶疫霉菌引起的人参疫病的防治效果(A:空白，B:浇注SZ-60菌悬液)。
[0028]图10:SZ-60对人参核盘菌引起的人参菌核病的防治效果(A:空白，B:烧注SZ-60菌悬液)。
[0029]图11:SZ-60对腐皮镰孢菌引起的人参根腐病的防治效果(A:空白，B:烧注SZ-60菌悬液)。
[0030]图12:SZ_60对人参链格孢菌引起的人参黑斑病的防治效果(A:空白，B:浇注SZ-60菌悬液)。
[0031]图13:SZ-60对立枯丝核菌引起的人参立枯病的防治效果(A:空白，B:烧注SZ-60菌悬液)。
【具体实施方式】
[0032]实施例1
[0033]解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) SZ-60菌株的分离和保藏
[0034]该菌株自吉林省抚松县万良镇人参栽培地多年生人参根际周围30cm以内的土壤分离得到。采集上述土壤样品，风干后过筛。称取样品10g，放入装有玻璃珠和90mL无菌水的三角瓶中，充分振荡10-30min，使样品与无菌水混合均匀，制得样品悬液，静置5min。在无菌条件下取ImL上清液，加入9mL0.05%SDS水溶液(十二烷基硫酸钠水溶液)，40°C保温20min，取lmL，加入9mL无菌水，按梯度依次制成10' 10_4、10_5的稀释液。分别吸取100 u L各稀释液加入到牛肉膏蛋白胨(NB)平板上，采用平板稀释法均匀涂布，每处理3次重复，34°C培养箱培养I~2天。挑选单菌落转接到NB平板培养，长出菌落后，用接种环进行划线分离纯化，纯化菌株于4°C保存。牛肉膏蛋白胨(NB)培养基的配方为:牛肉膏3.0g、蛋白胨 10.0g、NaC15.0g，琼脂 17g，水 1000mL, pH6.8 ~7.2。
[0035]该菌株在NB培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆起、表面湿润、半透明；镜检呈杆状，大小为0.3~0.4X3.2~3.3iim，具鞭毛，G -，有芽孢；其能在25°C~40°C的温度下生长，其最适生长温度为32°C;其生长pH范围为6.5~8.0，最适生长pH为7.2 ;需氧生长；硝酸盐还原反应生成红色化合物；接触酶测定为阳性；脂肪酶反应为阴性；酪蛋白、酪氨酸反应呈阴性；不能利用D-葡萄糖、D-木糖；淀粉水解试验镜检有糊精生成；明胶液化试验呈阳性；柠檬酸盐利用试验培养基呈酸性(绿色)；V-P(pH 7.0)测定生成红色化合物；L-阿拉伯糖、甘露醇检测呈阳性；在含有2%~5%的NaCl的NB培养基上均能生长。
[0036]该菌株于2013年9月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.8277。
[0037]该菌株我们命名为SZ-60，分类命名为:解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。
[0038]实施例2
[0039]解淀粉芽孢杆菌SZ-60菌株对人参真菌病害病原菌生长的抑制作用
[0040]采用滤纸片法测定菌株SZ-60对人参真菌病害病原菌的拮抗作用:用直径8mm的打孔器将活化好的人参病原菌菌落制成相应尺寸的菌饼，无菌接种至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板(直径90mm)的正中央，同时将4片直径为Icm的灭菌滤纸圆片粘于距平板中心25mm处的4个角点上。将菌株SZ-60制成菌悬液(浓度约为108cfu/mL)，其中3片滤纸圆片每片点接20 y L菌悬液，I片滤纸圆片点接20 y L无菌水，作为处理组，每个处理重复3次；另在一块平板的4个角点的4片滤纸圆片上均分别点接20 y L无菌水，作为对照组，均置于28°C培养箱培养6~7天，待对照组病原菌菌落长满平板，测量处理组病原菌菌落直径(单位:mm)，并按照如下公式计算抑菌率。每种病原菌重复3次，结果取平均值。
[0041 ]抑菌率(%) = [ (A — B) / (A — 8) ] X 100%
[0042]注:A为对照组病原菌菌落直径，即90mm ；B为处理组病原菌菌落直径。
[0043]马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基的制备方法:称取去皮马铃薯200g、葡萄糖20g，加入水1000mL,调节pH为7.0。在沸水浴上加热20min，纱布过滤后定容到1000mL,加琼脂22g熔化后分装湿热灭菌(12rC，30min)。
[0044]上述菌悬液的制备方法:保藏的菌株SZ-60通过平板划线方式活化2天后，用接种环取3~4块直径Icm的细菌菌落，接入到200mL含50mL牛肉膏蛋白胨(NB)培养液的三角锥形瓶中，摇床32°C，180r/min培养48h后制成浓度约为108cfu/mL的细菌菌悬液。NB培养液的配方为:牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g, NaC15.0g，水1000mL, pH6.8~7.2。
[0045]结果如表1所示，菌株SZ-60对分别引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、疫病和菌核病的腐皮镰孢菌(F.solani)、毁灭柱孢菌(C.destructans)、人参链格孢菌(A.panax)、立枯丝核菌(Rh.solani)、恶疫霉菌(Ph.cactorum)和人参核盘菌(S.schinseng) 6种病原菌均具有明显的抑制作用。特别是对引起人参疫病的恶疫霉菌和引起人参锈腐病的毁灭柱孢菌的抑菌率达到了 90%以上，对引起黑斑病的人参链格孢菌、弓丨起人参根腐病的腐皮镰孢菌和引起人参菌核病的人参核盘菌的抑菌率为71~82%，对引起人参立枯病的立枯丝核菌的抑菌率也达到了 46.4%，反映出菌株SZ-60对人参6种主要病原菌的防治作用具有广谱性。
[0046]表1菌株SZ-60对人参病原真菌的抑制作用
[0047]
【权利要求】
1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SZ_60,其特征在于,其保藏号为 CGMCC N0.8277。
2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SZ-60，其特征在于，该菌株在牛肉膏蛋白胨(NB)培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落不规则、乳白色、中心稍隆起、表面湿润、半透明。镜检呈杆状，大小为0.3~0.4X3.2~3.3 μ m，具鞭毛，G -，有芽孢。其能在25°C~40°C的温度下生长，其最适生长温度为32°C。其生长pH范围为6.5~8.0，最适生长pH为7.2。需氧生长；硝酸盐还原反应生成红色化合物。接触酶测定为阳性；脂肪酶反应为阴性；酪蛋白、酪氨酸反应呈阴性。不能利用D-葡萄糖、D-木糖。淀粉水解试验镜检有糊精生成。明胶液化试验呈阳性；柠檬酸盐利用试验培养基呈酸性(绿色)。V-P(pH7.0)测定生成红色化合物；L_阿拉伯糖、甘露醇检测呈阳性；在含有2%~5%的NaCl的牛肉膏蛋白胨(NB)培养基上均能生长。 所述的牛肉膏蛋白胨(NB)培养基的配方为:牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g, NaC15.0gJlC月旨 17g，水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.2。
3.如权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌SZ-60在防治植物真菌病害中的应用，或在制备防治植物真菌病害的微生物制剂中的应用。 优选地，所述植物为人参。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述真菌为腐皮镰孢菌(Fusariumsolani)、毁灭柱抱菌(Cylindrocarpon destructans)、人参链格抱菌(Alternariapanax)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)和人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)中的一种或多种。
5.—种微生物制剂，其特征在于，含有权利要求1的解淀粉芽孢杆菌SZ-60的全培养液培养物和解淀粉芽孢杆菌SZ-60的孢子。
6.如权利要求5所述的微生物制剂，其特征在于，其是通过以下制备方法制备得到的: (1)将如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SZ-60试管种接种于用1000mL三角瓶装的300mL营养肉汤酵母膏(NBY)培养液中，在180r/min，30°C下培养36小时，获得发酵菌液； (2)将发酵菌液在以种子罐体积20%接种于种子罐中的发酵培养液中发酵培养，溶氧量为18~20%，搅拌速度200rpm，种子罐的温度30~34°C，接种发酵菌液4小时后，每隔2小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测，直到发酵液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时，获得发酵菌种，种子罐中的发酵时间为12~16小时； (3)将种子罐中发酵菌种的10%接种于发酵罐中的NBY培养液中发酵培养，溶氧量为18~20%，搅拌速度200rpm，发酵罐的温度30~34°C，接种发酵菌种4小时后，每隔2小时对发酵罐中的发酵液进行发酵质量检测，观察菌含量，直到发酵罐中发酵液中的最终培养物(包含菌和芽孢)生物量为109cfu/ml以上、芽孢含量大于或等于90%时，立即将发酵液出罐，进行分装，获得SZ-60微生物制剂；发酵罐中的发酵时间为24~36小时。 优选地，所述的NBY培养液的配方为:牛肉膏3.5g，蛋白胨10.0g，酵母浸膏5.0g，麦芽浸膏10g，葡萄糖5.0gjK lOOOmL，pH6.8~7.2 ;所述的发酵培养液的配方以重量百分比计为:大豆粉2.0%，豆饼粉1.5%，淀粉0.5%，酵母浸膏0.2%，玉米浆0.2%，NaCl0.1%，Ca(HCO3)20.2%，余量为水，ρΗ7.0 ~7.2。 更优选地，所述的NBY培养液是这样配制的:称取牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、麦芽浸膏、葡萄糖放入1000mL水中，充分混匀后将pH调整至6.8~7.2，1000mL三角瓶中装量为300mL培养液，用双层封口膜封好三角瓶口，121°C湿热灭菌30分钟，冷却后备用； 所述的发酵培养液是这样配制的:在种子罐中加入所需的水，按比例加入大豆粉、豆饼粉、淀粉、酵母浸膏、玉米浆、NaCl、Ca (HCO3)2，充分搅拌，将发酵培养液pH调整到7.0~7.2，密封加料孔，用高温蒸汽灭菌2小时，冷却后立即接种。
7.如权利要求6所述的微生物制剂，其特征在于:在种子罐或发酵罐的发酵过程中，当出现较多泡沫时，加入消泡剂，所述的消泡剂为有机硅，加入量以种子罐或发酵罐中的泡沫不溢出为准；发酵罐中发酵完成后，在发酵罐中加入占罐中液体总体积万分之二的苯甲酸防腐剂，搅拌均匀，再出罐进行分装。
8.如权利要求5-7中任一项所述的微生物制剂在防治人参真菌病害中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述真菌为腐皮镰孢菌(Fusariumsolani)、毁灭柱抱菌(Cylindrocarpon destructans)、人参链格抱菌(Alternariapanax)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)和人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)中的一种或多种。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，在人参真菌病害发病初期，将所述微生物制剂的稀释液均匀地施加到土壤中，所述稀释液中微生物制剂与水的稀释体积比为1:100。 优选地，所述的稀释液中还添加了助剂有机硅，所述助剂有机硅与稀释液的体积比为1:5000。
【文档编号】A01N63/02GK103789234SQ201410017081
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年1月15日 优先权日:2014年1月15日
【发明者】杨利民, 孙卓, 韩梅, 林红梅 申请人:吉林农业大学