巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物肥料制备的技术领域，具体说是一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法。
【背景技术】
[0002]巨大芽孢杆菌为革兰氏阳性菌及好氧菌，不但能分解有机磷物质，而且也能分解难溶性磷化合物，并将有机磷物质和磷化合物转化成易被植物吸收的磷，从而提高土壤磷素的利用率，达到提高植物磷素营养的目的。因此，巨大芽孢杆菌在农业上可用于制造磷细菌肥料。同时有些巨大芽孢杆菌的菌株可产生抑菌物质，对棉花立枯病菌等多种病原真菌具有明显的抑制作用。
[0003]在实际的使用中巨大芽孢杆菌是以固体粉状形态存在的，而现有的巨大芽孢杆菌菌粉的制备过程相对较为复杂，不利于规模化的生产，而且菌粉中菌体的存活率较低。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法。
[0005]本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是:
本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤:
(1)菌种活化:
将4°C斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37°C、培养
24h ；
菌种来源:巨大芽孢杆菌，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为 CGMCC N0.1.223 ；
(2)种子培养:
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37°C、200r/min摇床培养20h ;
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分:
葡萄糖10-12g/L，磷酸氢二钾5-6 g/L，磷酸二氢钾2-3 g/L，尿素1-1.5 g/L，酵母粉5-6 g/L，硫酸镁 0.35-0.41 g/L, PH7.0 ；
(3)上罐发酵培养:
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照5-10%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为上述种子培养基，通风比1:1，37°(:，30(^/1^11，培养2111后收集菌液；
(4)喷雾干燥:
将菌液利用喷雾干燥，采用5-10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为:进风口温度110-150°C，出风口温度60-90°C，进料速度为8_15ml/min。
[0006]本发明还可以采用以下技术措施:
所述的菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
[0007]喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为:进风口温度110°C，出风口温度为60°C，菌体保护剂为10%，进料速度为10ml/min。
[0008]喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为:进风口温度130°C，出风口温度为80°C，菌体保护剂为8%，进料速度为8ml/min。
[0009]喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为进风口温度150°C，出风口温度为90°C，菌体保护剂为5%，进料速度为15ml/min。
[0010]本发明具有的优点和积极效果是:
本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法中，利用喷雾干燥技术制备菌粉，由于巨大芽孢杆菌能产生芽孢，而芽孢对高温、高压干燥、氧化、酸碱和毒物等不良因素抵抗力较强，因此巨大芽孢杆菌具有耐高温耐挤压及耐酸碱等特性，通过本发明制得的菌粉菌体存活率高，为后续肥料制备打下基础，适合规模化工业生产，所得菌粉它可以施于土壤中，提高土壤中微生物数量，提高植物的抗病能力。
【具体实施方式】
[0011]实施例1:本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤:
(1)菌种活化:
将4°C斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37°C、培养
24h ；
菌种来源:巨大芽孢杆菌，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为 CGMCC N0.1.223 ；
(2)种子培养:
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37°C、200r/min摇床培养20h ;
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分:
葡萄糖10g/L，磷酸氢二钾6g/L，磷酸二氢钾2g/L，尿素lg/L，酵母粉6 g/L，硫酸镁
0.41 g/L, PH7.0 ；
(3)上罐发酵培养:
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照5%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为与上述种子培养基相同，通风比1:1，37°(:，30(^/1^11，培养2111后收集菌液；
(4)喷雾干燥:
将菌液利用喷雾干燥，采用10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为:进风口温度110°C，出风口温度60°C，进料速度为10ml/min。
[0012]菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
[0013]实施例2:本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤:
(1)菌种活化:
将4°C斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37°C、培养
24h ；
菌种来源:巨大芽孢杆菌，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为 CGMCC N0.1.223 ； (2)种子培养:
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37°C、200r/min摇床培养20h ;
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分:
葡萄糖12g/L，磷酸氢二钾5 8/1，磷酸二氢钾2.5 g/L，尿素1.3g/L，酵母粉5 g/L，硫酸镁 0.35g/L，PH7.0 ；
(3)上罐发酵培养:
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照8%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为与上述种子培养基相同，通风比1:1，37°(:，30(^/1^11，培养2111后收集菌液；
(4)喷雾干燥:
将菌液利用喷雾干燥，采用8%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为:进风口温度130 °C，出风口温度80 V，进料速度为8ml/min。
[0014]菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
[0015]实施例3:本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤:
(1)菌种活化:
将4°C斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37°C、培养
24h ；
菌种来源:巨大芽孢杆菌，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为 CGMCC N0.1.223 ；
(2)种子培养:
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37°C、200r/min摇床培养20h ;
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分:
葡萄糖llg/L，磷酸氢二钾5.5g/L，磷酸二氢钾3g/L，尿素1.5g/L，酵母粉5.5g/L，硫酸镁 0.38g/L，PH7.0 ；
(3)上罐发酵培养:
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照10%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为与上述种子培养基相同，通风比1:1，37°(:，30(^/1^11，培养2111后收集菌液；
(4)喷雾干燥:
将菌液利用喷雾干燥，采用5%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为:进风口温度150°C，出风口温度90°C，进料速度为15ml/min。
[0016]所述的菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
[0017]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例公开如上，然而，并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当然会利用揭示的技术内容作出些许更动或修饰，成为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。
【主权项】
1.一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤: (1)菌种活化: 将4°C斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37°C、培养24h ； 菌种来源:巨大芽孢杆菌，购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为 CGMCC N0.1.223 ； (2)种子培养: 挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37°C、200r/min摇床培养20h ; 上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分: 葡萄糖10-12g/L，磷酸氢二钾5-6 g/L，磷酸二氢钾2-3 g/L，尿素1-1.5 g/L，酵母粉5-6 g/L，硫酸镁 0.35-0.41 g/L, PH7.0 ； (3)上罐发酵培养: 将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照5-10%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为上述种子培养基，通风比1:1，37°(:，30(^/1^11，培养2111后收集菌液； (4)喷雾干燥: 将菌液利用喷雾干燥，采用5-10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为:进风口温度110-150°C，出风口温度60-90°C，进料速度为8_15ml/min。2.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于:菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。3.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于:喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为:进风口温度110°c，出风口温度为60°C，菌体保护剂为10%，进料速度为 10ml/mino4.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于:喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为:进风口温度130°C，出风口温度为80°C，菌体保护剂为8%，进料速度为8ml/min。5.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于:喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为进风口温度150°C，出风口温度为90°C，菌体保护剂为5%，进料速度为15ml/min。
【专利摘要】一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括菌种活化、种子培养、上罐发酵培养、喷雾干燥的步骤，在进风口温度110-150℃，出风口温度60-90℃，进料速度为8-15ml/min的条件下，采用5-10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，由于巨大芽孢杆菌能产生芽孢，而芽孢对高温、高压干燥、氧化、酸碱和毒物等不良因素抵抗力较强，因此巨大芽孢杆菌具有耐高温耐挤压及耐酸碱等特性，通过本发明制得的菌粉菌体存活率高，为后续肥料制备打下基础，适合规模化工业生产，所得菌粉它可以施于土壤中，提高土壤中微生物数量，提高植物的抗病能力。
【IPC分类】C12R1/11, C12N1/20
【公开号】CN105385635
【申请号】CN201510886820
【发明人】乔长晟, 任友花, 李雪, 王羿超, 李洪
【申请人】天津北洋百川生物技术有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月7日