专利名称：一种南美白对虾抗菌肽制剂及其在水产养殖中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含有南美白对虾抗菌肽的制剂，属于动物营养学领域。
背景技术：
水产动物疾病的防治是长期以来困扰水产养殖者的难题，特别是传统鱼病学上 行之有效的一些药物纷纷被禁用或限用，以及化学消毒剂和抗生素等药物的广泛和长期 使用，许多病原产生了抗药性和药物耐受现象。因此，开发一种全新的抗病药物已成为 鱼病学研究的热点。根据抗菌肽结构和生物活性等方面的特点可以看出，这些肽类具有 广谱抗菌 作用，并且抗菌机理独特，病原菌不易对抗菌肽产生耐药性，属无毒副作用， 无残留的一类环保型制剂。本发明的目的是提供一种新型绿色环保饲料免疫添加剂，它能有效地增强水产 养殖动物机体免疫功能，提高水产养殖动物抗病能力。
发明内容
本发明南美白对虾抗菌肽制剂其抗菌肽为Pen-3a，Genbank序列号为Y14926， 其mRNA基因序列如序列表所示。本发明南美白对虾抗菌肽制剂，抗菌肽效价为400mg/g，以玉米蛋白为载体。
具体实施例方式本发明的目的是这样实现的饲料中添加的南美白对虾抗菌肽被对虾吸收后， 主要储存在大颗粒血细胞(LGH)的细胞质颗粒中。当血细胞受微生物刺激，抗菌物质就 从血细胞的细胞质颗粒中释放出来，这样通过对抗菌肽经胞吐作用从对虾颗粒血细胞中 释放的过程进行调控，能够提高微生物与血细胞接触部位血浆的抗菌活性，从而防止微 生物感染。本发明因从动物营养免疫学角度，提高水产养殖动物免疫抗病能力，起到预防 疾病的作用，因而无需使用抗生素类药物，减少药物残留。实施例1以大肠杆菌为实验菌种，采用制片扩散法和液体生长抑制法测定南美白对虾抗 菌肽抗菌活性。结果表明，抗菌肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有不同程度的抗菌 活性，对氨苄青霉素不敏感的强致病性细菌，如枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和绿脓 杆菌等都有很好的抗菌活性，对抗氨苄青霉素的大肠杆菌也具抑菌活性，且随抗菌肽含 量的提高抑菌效果不断加强。实施例2在南美白对虾的养殖实验中，进行本抗菌肽制剂与金霉素的对比研究，结果显 示，养殖100天后，添加抗菌肽制剂4mg/kg组较添加0.5mg/kg金霉素组成活率增加 13.3%,收获量增加12.8%，添加4mg/kg抗菌肽制剂组较添加10mg/kg金霉素组成活率增加16.7%。表明南美白对虾抗菌肽能显著提高对虾的成活率、提高对虾产量。南美白对虾抗菌肽(Pen_3a)mRNA序列表<110>山东省淡水水产研究所<120>—种南美白对虾抗菌肽制剂及其在水产养殖中的应用<141>2009-09-15<160>1<210>1 <211>703<212>RNA<213> 南美白对虫下(Penaeus vannamei)<400>tcgagcctcacctgcagagaccgacgctccgagcccgggttccctcctgcgtccgccatg 60cgcctcgtggtctgcctggtcttcttggcctccttcgccctggtctgccaaggccaagtg 120tacaagggcggttacacgcgcccgatacccaggccaccacccttcgtgagacctttgcca 180ggagggcctattggtccatacaacggttgccctgtctcatgccggggaatttccttctca 240caagcgcgttcttgctgctcccggttagggcgttgctgtcacgtgggaaagggatattcc 300ggttgatggagaacacgatgaaaacctcgcttgacaacctgttgattgatacttgtatgt 360gaagagactgtgatcctgattttgcactgtgttttctcgttcaatattcttactctggct 420tgtggaatggatgtagttatttgaccctatgtttttttttaagacttttccatgaatgca 480cgatgaatgaaagcttgcgtgatatgaatgagtgcatccacttttcaacgtcccagcagg 540tggcgccgtattcatgatttgtgacacacgaggaagtaaatccatgccatctgcctttcg 600ttgtaatttttagtgagtatggatctgtgtgtgggtgatttttacaaatctctcaaagga 660cttttagaaatgttactcctttacaaataaaattggtatcttg70权利要求
1.一种南美白对虾抗菌肽制剂，抗菌肽效价为400mg/g，以玉米蛋白为载体。
2.按照权利要求1所述制剂，其中抗菌肽为Pen-3a，分子大小为5.48 6.62KU(1U= IDa),是一类富含阳离子的分子，等电点为9.34 9.84。其氨基酸序列为pE VYKGGYTRPIPRPPPFVRPLPGGPIGPYNGCPVSCRGISFSQARSCCSRLGRCCHV GKGYS*注“*”代表C端酰胺化；pE代表焦谷氨酸；“P” “C”分别代表脯氨酸和半胱氨酸残基。
3.按照权利要求2中所述抗菌肽氨基酸序列，Pen-3a的N端有一个富含脯氨酸的区 域，同时存在焦谷氨酸，C端以酰胺化形式存在，由三个分子内二硫键来维持稳定。
全文摘要
本发明公布一种南美白对虾抗菌肽制剂及其在水产养殖中的应用。南美白对虾抗菌肽制剂是通过将南美白对虾抗菌肽的基因克隆到载体上，然后进入酵母细胞中表达、发酵制备而成。本发明南美白对虾抗菌肽制剂能促进南美白对虾生长，提高南美白对虾免疫抗病能力。可做为绿色、环保的新型饲料免疫添加剂，减少乃至消除抗生素在水产品中的蓄积，提高水产品质量。
文档编号A23K1/18GK102018101SQ200910018200
公开日2011年4月20日 申请日期2009年9月15日 优先权日2009年9月15日
发明者周嗣泉, 宋理平, 师吉华, 张延华, 潘晓玲, 王爱英, 胡斌, 轩子群, 马国红, 马汝芳 申请人:山东省淡水水产研究所