专利名称：银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及动物微生态制剂的制备，特别涉及饲用微生物发酵制备饲料用添加 剂。
背景技术：
银耳(Tremella fuciformis Berk)又称白木耳，为担子菌纲银耳科植物的子实 体，作为药用已有悠久历史。银耳是具有滋补调养功能、可用于治疗虚证的珍贵药物。目前 除人工栽培银耳子实体供药用外，还进行银耳孢子的深层发酵培养，将其发酵液经提取、纯 化后所获得的银耳多糖供药用。初步临床试验证明，银耳多糖对一些呼吸系统疾病如慢性 支气管炎、肺心病等有一定疗效，研究发现其可代替人工栽培银耳子实体作为药用。我国目前批准的可应用的12种动物微生态制剂的饲用微生物添加剂有干酪乳 杆菌、植物乳杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、嗜酸乳 杆菌、乳链球菌、啤酒酵母菌、产脱假丝酵母、沼泽红假单胞菌。本发明银耳孢子是一类酵母型细胞，其本身可作为饲用微生物添加剂(即饲用微 生态制剂)，其发酵主要代谢产物多糖又可作为聚糖类饲料添加剂，是两者兼得的新型的绿 色饲料添加剂。本发明是利用药食两用真菌——银耳，从其子实体中分离出银耳孢子，经深层发 酵培养生产银耳孢子发酵液，再进一步制备成银耳孢子发酵物生物活性添加剂。将其使用 于猪、奶牛等动物饲料中喂饲，可增强动物免疫功能，促进动物生长，提高奶牛的产奶量及 动物对饲料养分的利用。促生长和提高饲料利用的效果可与抗生素相当，有望作为抗生素 的取代物。本发明具有生物活性功能的银耳孢子发酵物作为使用于动物饲料添加剂至今未 见有关专利和相关文献报导。另外，银耳孢子是一类酵母型细胞，如同啤酒酵母菌，产朊假丝酵母一样，将其作 为饲用微生物添加剂(即饲用微生态制剂)至今也未见专利及相关文献报导。
发明内容
发明人采用从人工栽培的银耳或从自然界天然野生的银耳子实体中分离银耳孢 子，利用发酵技术大规模生产银耳发酵液，其方法如下一、银耳孢子的分离采集与保存从人工栽培银耳子实体或自然界天然野生的银耳子实体中分离采集银耳孢子。银 耳孢子接种于土豆汁琼脂斜面上，25°C 士 1°C培养7-10天后待用。二、纯种银耳孢子的制备取少许银耳孢子于l_2ml无菌生理盐水中，经适当稀释后涂布于载有土豆汁琼脂 培养基的9厘米培养皿上，25°C 士 1°C培养，待肉眼在培养皿上能观察到小白点样菌落时， 无菌取样，在显微镜下能观察到类似于酵母样的孢子细胞时，并接种于土豆汁琼脂斜面上，25 0C 士 1°C培养7-10天后待用。三、种子培养基及发酵培养基的选择与制备发明人根据酵母菌发酵的一般条件及原理，设定了四种培养基的组成进行了培养 基的筛选研究A培养基4%可溶性淀粉，2%葡萄糖，2%黄豆粉，0. 玉米浆，0.05%磷酸盐， PH自然。B培养基4%可溶性淀粉，2%葡萄糖，2%酵母硒粉，0. 玉米浆，0.05%磷酸 盐，PH自然。C培养基新鲜土豆100g/L，4%葡萄糖，0.3%玉米浆，0.05%磷酸盐，pH自然。D培养基新鲜土豆100g/L，4%葡萄糖，0. 3%玉米浆，酵母硒粉，0.05%磷酸 盐，PH自然。将上述4种培养基分装于三角瓶中，121°C灭菌30分钟，备用。将前述的制备的纯 种银耳孢子接种于上述四种培养基，25°C 士 1°C生长培养7天观察其生长情况。研究试验结果表明D培养基明显优于其它3种培养基，分别在B和D培养基中加 入特殊酵母硒粉均显现有利于银耳孢子发酵物的产生。发明人最终综合各种因素考虑选择C培养基作为种子培养基，D培养基作为发酵
培养基。四、工业化生产的研究1、种子罐生长培养从生长良好的银耳孢子接种于上述C培养基灭菌的种子罐中，25°C 士 1°C生长培 养3-4天，即为银耳孢子培养液。2、发酵罐生长培养A、培养基制备同上述D培养基制备方法。B、取上述培养良好的银耳孢子培养液3% 接种量，接种于发酵罐容器中，通 气流量1 1，转速150-200rpm，25°C 士 1°C培养6-8天。取样后，银耳孢子经计数达到 3 X 108-6 X 108/ml，停止发酵生长，即为银耳孢子发酵液。五、银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂产品的制备将上述银耳孢子3X 108-6X 108/ml发酵液5kg加Ikg麦麸比例混合，(65°C烘箱 中烘干，将烘干物粉碎，过筛，即为最终银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂干粉产品。添加剂干粉产品的组成添加剂干粉，水分每克添加剂干粉含银耳孢子数13 X 108-26 X 108/g添加剂干粉银耳孢子发酵物占12士添加剂干粉辅料麦麸占78 士 1 %。六、本发明专利添加剂用途和效果银耳孢子发酵物生物活性添加剂0.4%，目前应用于猪动物的饲料中，增重 10-15%，并可取代抗生素，达到与抗生素同样的效果；不仅如此，还能改善动物肠道内菌群 数量，增强动物免疫功能。银耳孢子发酵物发酵原液500-600ml (或115克-135克添加剂干粉)，目前应用于奶牛动物的饲料中，增加奶产量，每头每天增产0. 5-1. Okgo将来逐步扩大可应用于羊、兔、鸡、鸭、鱼等饲料中。
具体实施例方式实施例1银耳孢子的分离采集和纯化发明人采用从人工栽培的银耳或从自然界天然野生的银耳子实体中分离银耳孢 子，利用发酵技术大规模生产银耳发酵液，其方法如下一、银耳孢子的分离采集从人工栽培银耳子实体或自然界天然野生的银耳子实体中分离采集银耳孢子。二、纯种银耳孢子的制备取少许银耳孢子于l_2ml无菌生理盐水中，经适当稀释后涂布于载有土豆汁琼脂 培养基的9厘米培养皿上，25°C 士 1°C培养，待肉眼在培养皿上能观察到小白点样菌落时， 无菌取样，在显微镜下能观察到类似于酵母样的孢子细胞时，并接种于土豆汁琼脂斜面上， 25 0C 士 1°C培养7-10天后待用。三、种子培养基及发酵培养基的选择与制备发明人根据酵母菌发酵的一般条件及原理，设定了四种培养基的组成进行了培养 基的筛选研究A培养基4%可溶性淀粉，2%葡萄糖，2%黄豆粉，0. 玉米浆，0.05%磷酸盐， PH自然。B培养基4%可溶性淀粉，2%葡萄糖，2%酵母硒粉，0. 玉米浆，0.05%磷酸 盐，PH自然。C培养基新鲜土豆100g/L，4%葡萄糖，0.3%玉米浆，0.05%磷酸盐，pH自然。D培养基新鲜土豆100g/L，4%葡萄糖，0. 3%玉米浆，酵母硒粉，0.05%磷酸 盐，PH自然。将上述4种培养基分装于三角瓶中，121°C灭菌30分钟，备用。将前述的制备的纯 种银耳孢子接种于上述四种培养基，250C 士 1°C生长培养7天观察其生长情况，结果见表1。表1银耳孢子在不同培养基中生长状况
培养基孢子数生长外观生物量 10ml，10 分 4000rpmA1-2 XlOVml稀2/10mlB1-2 XlOVml稀稠3/10mlC0. 5-1 XlOVml稠4.5/10mlD3. 5-7XlOVml粘稠6/10ml研究试验结果表明D培养基明显优于其它3种培养基，分别在B和D培养基中加 入特殊酵母硒粉均显现有利于银耳孢子发酵物的产生。发明人最终综合各种因素考虑选择C培养基作为种子培养基，D培养基作为发酵培养基。实施例2银耳孢子发酵液的制备1、种子罐生长培养从生长良好的银耳孢子接种于上述C培养基灭菌的种子罐中，25°C 士 1°C生长培 养7天，即为银耳孢子培养液。2、发酵罐生长培养A、培养基制备同上述D培养基制备方法。B、取上述培养良好的银耳孢子培养液3% 接种量，接种于发酵罐容器中，通 气流量1 1，转速150-200rpm，25°c 士 1°C培养6-8天。取样后，银耳孢子经计数达到 3 X 108-6 X 108/ml，停止发酵生长，即为银耳孢子发酵液。实施例3银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂产品的制备将上述银耳孢子3X 108-6X 108/ml发酵液5kg加Ikg麦麸比例混合，(65°C烘箱 中烘干，将烘干物粉碎，过筛，即为最终银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂干粉产品。添加剂干粉产品的组成添加剂干粉，水分每克添加剂干粉含银耳孢子数13 X 108-26 X 108/g添加剂干粉银耳孢子发酵物占12士添加剂干粉辅料麦麸占78 士 1 %。实施例4银耳孢子发酵物在断奶仔猪上的适宜添加剂量及其对断奶仔猪生产性 能和肠道菌群的影响。试验动物选用杜洛克X (长白X大白)三元杂交28日龄断奶仔猪40头。银耳孢子发酵物分为0. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5% 4个处理组。试验结果见表2、表3:表2不同水平银耳孢子发酵物对断奶仔猪生产性能的影响
权利要求
1.一种银耳孢子发酵液的制备方法，其步骤是先从野生或人工培养的银耳子实体中 分离获得银耳孢子，分离纯化后，经孢子接种在新鲜土豆100g/L，4%葡萄糖，0. 3%玉米浆，酵母硒粉，0. 05%磷酸盐，pH自然的培养基中生长发酵，制备获得银耳孢子发酵液。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于发酵培养基加入酵母硒粉。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于生长发酵的温度控制在25°C士 1°C。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于银耳孢子发酵液含银耳孢子数 3X 108-6X 108/mL·
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所得的银耳孢子发酵液按Ikg麦麸+5kg 银耳孢子发酵液(1 5)比例混合，<65°C烘干制备获得银耳孢子发酵物生物活性饲料添 加剂产品，每克添加剂干粉含银耳孢子数13X 108-26X 108/克，添加剂干粉银耳孢子发酵 物占12 士 1%。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂可 广泛应用于猪、奶牛等家禽动物的饲料中喂饲，并可取代动物饲料中的抗生素。
全文摘要
本发明公开了一种银耳孢子发酵液的制备方法，其步骤是先从野生或人工培养的银耳子实体中分离获得银耳孢子，分离纯化后，经孢子接种在新鲜土豆100g/L，4％葡萄糖，0.3％玉米浆，1％酵母硒粉，0.05％磷酸盐，pH自然的培养基中，生长发酵，制备获得银耳孢子发酵液。本发明还公开了所得的银耳孢子发酵液按1kg麦麸+5kg银耳孢子发酵液(1∶5)比例混合，≤65℃烘干制备获得银耳孢子发酵物生物活性饲料添加剂产品，每克添加剂干粉含银耳孢子数13×108-26×108/克，添加剂干粉银耳孢子发酵物占12±1％。
文档编号C05G1/00GK101990822SQ200910164208
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月20日 优先权日2009年8月20日
发明者吴访其, 王康宁 申请人:吴访其;绵阳禾本生物工程有限公司;王康宁