专利名称：哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂的方法
技术领域：
本发明属于生物肥料领域，特别涉及哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座 果制剂的方法。
背景技术：
木霉(Trichoderma. Spp)属于半知菌类的丛胞菌纲，丛梗孢目丛梗孢科，广泛存 在于土壤、植物根围、种子、叶缘和腐烂木材等生态环境中。出于木霉菌的广泛适应性、广谱 性及多机制性，根据本发明专利申请者长期研究结果表明，木霉不仅一直是植物病生防学 家研究重点对象，而且通过物理学方法有目的的改造(如N+束、紫外线、射线照射等技 术)，从腐烂木材分离筛选出的木霉突变株(H-13)。化学肥料和有机农药(含植物生长调节剂)对生态环境的污染，推动人们对农产 品安全性的重视。我国加入WT0后农产品的卫生质量问题尤为突出。当前无公害农产品的 生产和消费热潮正在兴起，随着化学物质在农业生产中的应用限制越来越严，对于农业生 产中发挥重要增产作用的植物生长促进剂无疑提出了更高的要求，各国研究者正在寻找天 然微生物肥料和生物源农药。化学肥料在使用过程中破坏了土壤结构和微生物生长环境， 影响土壤微生物对营养物质的分解与利用，不利于植物对营养物质的吸收。由木霉产生的 植物生长调节物质能促进作物生长，并能改善因长期使用化学肥料而使土壤结构破坏、污 染农产品及危害人畜的状况，是化学合成调节剂的极具潜力的替代之一。
发明内容
为了弥补现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种哈茨木霉固体 发酵制造促旱生作物授粉和座果制剂的方法。本发明的另一目的在于提供一种上述方法制备的哈茨木霉固体发酵制造促旱生 作物授粉和座果制剂。本发明的又一目的在于提供上述哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果 制剂的应用。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种哈茨木霉固体发酵制造促旱 生作物授粉和座果的制剂的方法，包括以下操作步骤(1)配制固体培养基将质量百分数90%的晒干磨碎的甘蔗渣粉或秸秆粉，与质 量百分数2%的培养液混合拌勻，加入质量百分数5%的鸡粪和质量百分数3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制湿度为70% 75%，于120 123°C高温和1. 05 1. 35大气压条件下蒸 汽消毒40 60分钟，得到固体培养基；(2)在固体培养基中以每升含19. 5 20. 5万个孢子的量接种哈茨木霉H_13孢 子，充分拌勻，得到发酵基料；(3)将发酵基料盖上塑料布，送入经过过滤的空气中，在温度26 30°C条件下，发
5酵5 7天，发酵过程中以每分钟65 80rpm的搅拌速度进行翻动，每隔30分钟 2小时 置换经过过滤的空气，湿度保持在72 78% ；(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至质量百分含量10 15%，烘 干后，再粉碎成粒状发酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制剂。步骤(2)所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数1 % 5%木糖+蔗糖或纤维素二糖+葡萄 糖作为碳源，再添加质量百分数0. 2% 7%的畜禽血粉、质量体积比7. 5 19. Omg/L的 硼酸钠、质量体积比20 30mg/L的硫酸锌(ZnS04)、质量百分数0. 02% 0. 3%的磷酸二 氢钾(KH2P04)、质量百分数0.05% 0.5%的磷酸氢二钾(K2HP04)、质量百分数0.05% 0. 4%的硫酸镁(MgS04)和水，混合拌勻，控制湿度为72% 78%，调pH至5. 7 6. 5后高 压灭菌，得到液体培养液；按照每升液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉 H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉H-13孢子，发酵温度设为25 40°C，发酵时间为5 7 天，得到种子发酵液；所述木糖+蔗糖中的木糖和蔗糖以质量比2 1混合；所述纤维素二 糖+葡萄糖中的纤维素二糖和葡萄糖以质量比21混合。步骤(2)所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液优选按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数2. 0% 4. 5%的木糖+蔗糖或纤维素二 糖+葡萄糖作为碳源，再添加质量百分数1. 5% 3. 5%的畜禽血粉、质量体积比8. 0 17. Omg/L的硼酸钠、质量体积比20 30mg/L的硫酸锌、质量百分数0. 02% 0. 2%的磷酸 二氢钾、质量百分数0. 05 % 0. 1 %的磷酸氢二钾、质量百分数0. 05 % 0. 4 %的硫酸镁和 水，混合拌勻，控制湿度为72% 78%，调pH至6. 0 6. 2后高压灭菌，得到液体培养液； 按照每升液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入 哈茨木霉H-13孢子，发酵温度设为26 28°C，发酵时间为6 8天，得到种子发酵液；所 述木糖+蔗糖中的木糖和蔗糖以质量比2 1混合；所述纤维素二糖+葡萄糖中的纤维素 二糖和葡萄糖以质量比2 1混合。步骤(1)所述甘蔗渣粉或秸秆粉为180目；所述秸秆粉为玉米秸秆粉、黄豆秸秆 粉、高山野草秸秆粉或高粱秸秆粉；步骤(1)所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成碳源粉 5%
畜禽血粉0. 2%--7%
硼酉堯钠7. 5 19. Omg/L
硫酉堯锌20 30mg/L
磷酉I二氢钾0. 02% 0. 3%
磷酉I氢二钾0. 05% 0. 5%
硫酉堯镁0. 05% 0. 4%
水^^ 革:o步骤(1)所述培养液优选由以下按质量百分数计的组分配制而成碳源粉2.0% 4. 5%畜禽血粉 1. 5 % 3. 5 %硼酸钠8. 0 17. Omg/L
硫酸锌20 30mg/L磷酸二氢钾0. 02% 0. 2%磷酸氢二钾 0. 05% 0. 1%硫酸镁 0. 05% 0. 4%水 余重步骤(1)所述培养液更加优选由以下按质量百分数计的组分配制而成碳源粉 3%畜禽血粉 2%硼酸钠17. 2mg/L硫酸锌25. lmg/L
磷酸二氢钾0. 1% 磷酸氢二钾0. 15% 硫酸镁 0. 2%水余重所述碳源粉为马铃薯全粉、山芋全粉、麦麸水煎液溶解物或米糠水煎液溶解物； 所述畜禽血粉的制备按以下操作步骤将鸡、鸭、鹅、猪或牛屠宰的鲜血经质量百分比浓度 为0. 3%的柠檬酸钠抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉淀物体积 的10%的水破坏红血球，再用醋酸或含醋酸质量百分比浓度15%的食用醋调pH至4. 6 4. 8，沉淀蛋白，用200 240目尼龙布过滤沉淀物，用沉淀物质量20 %的体积百分比浓度为 95%的酒精洗涤2 3次，然后在40 45°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。所述碳源粉为麦麸水煎液溶解物时，麦麸水煎液溶解物的制备和加入按以下步 骤称取33. 3 166. 5mg麦麸，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得滤液，然后将滤液、畜禽 血粉、硼酸钠、硫酸锌、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和水混合配制成培养液，培养液定 容为1升；所述碳源粉为米糠水煎液溶解物时，米糠水煎液溶解物的制备和加入按以下步 骤称取33. 3 166. 5mg米糠，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得滤液，然后将滤液、畜禽 血粉、硼酸钠、硫酸锌、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和水混合配制成培养液，培养液定 容为1升。一种根据上述方法制备的促旱生作物授粉和座果的制剂。上述的促旱生作物授粉和座果的制剂应用于促进旱生作物及油茶早开花传粉、提 高座果率和抗土传病。可应用本发明中哈茨木霉H-13种子发酵液经发酵后的发酵液与已在作物种植拐 角所堆积并经发酵的杂草混合，使杂草堆保持30% 45%的湿度，盖好双层塑料布，四周 用碎石压好，挖沟排水，密闭发酵4 5天后，翻堆，再发酵5天，即可掀开塑料布，取出发酵 物即为可就地使用的木霉促作物开花和座果率的有机肥。若有条件，可就地粉碎分级装袋 制成有机农家肥。本发明制剂经蒸馏水浸提并提取出的发酵液经江苏省疾病预防控制中心进行毒 性试验(试验编号20020571)，大鼠急性经口 LD50 > 4640mg/kg，属低毒级。本发明制剂作为作物促授粉和座果率使用，作为基肥每亩40公斤施入作物基部，于开花前15天使用时与杂草混合埋于作物根下，上盖表土 ；若土地较干，适量浇水；也可采 用重量比1 5自来水浸提后过滤，取滤液进行叶面喷施。本发明与现有技术相比具有如下的优势(1)本发明制剂原料来源广，购买方便，价格低廉，对环境无公害，作为有机肥料既 能提高传粉率和座果率，还使作物提前开花；特别是秋末冬初开花的油茶等，开花均在寒露 至小雪之后，传粉昆虫较少，影响产量；若于秋分前施用该肥料即可使开花时间提前15 20天，使亩产提高15%左右，甚至可翻一番；本制剂可使蔬菜增产20%，玉米增产15%，黄 瓜增产28%，水稻增产5. 3%，小麦在尿素对每亩耕地减少1/2量增施该固体肥料，小麦增 产10%以上，油茶现状每亩增产一倍(长江以南原每亩20Kg，而沿江江南丘陵山区每亩仅 3_5kg)。(2)本发明固体培养基兼顾产孢量和菌丝体分解土壤基料能力作为自身生长的 基础，培养基的玉米杆子、高粱秆、夏秋之交的杂草自发发酵物和甘蔗楂粉为最大的基础基 质，不仅提供碳素和降解对象，起优化土壤结构、抑制其它杂菌生长，而且保护自身菌落的 形成。(3)本发明制剂制备过程中具有氧气分压、空气净化和温度最优发酵条件，发酵效 果好。(4)孢子生成量与碳源种类紧密相关，而本发明采用经筛选的木糖/蔗糖或纤维 素二糖/葡萄糖为初始直接碳源，这两个碳源的组合要以四种秸秆中的糖份种类而定，哪 种组分高，即那种组合；(5)本发明选取芳香味，同时含微量元素较高的鸡粪、鸭粪，以改善环境，防止恶臭。(6)本发明制剂活性稳定，若在0 5°C保藏一年，其活性仍可保持95%以上，并对 土传病相关菌物有较强防治作用。
具体实施例方式下面结合具体的实例对本发明作进一步详细的叙述，但本发明的实施方法灵活， 不仅仅限于此例所述的具体操作方式。实施例1(1)配制固体培养基将质量百分数90%的晒干磨碎的甘蔗渣粉或秸秆粉，与质 量百分数2%的培养液混合拌勻，加入质量百分数5%的鸡粪和质量百分数3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制湿度为75%，于122°C高温和1. 25大气压条件下蒸汽消毒45分钟，得到
固体培养基；
所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成
马铃薯全粉1%
畜禽血粉7%
硼酸钠7. 5mg/L
硫酸醉25mg/L
磷酸B 二氢钾0. 02%
磷酸B氢二钾0. 05%
硫酸镁0.4%水余重；所述畜禽血粉的制备按以下操作步骤将鸡屠宰的鲜血经质量百分比浓度为 0. 3 %的柠檬酸钠抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉淀物体积的 10%的水破坏红血球，再用醋酸或含醋酸质量百分比浓度15%的食用醋调pH至4. 8，沉淀 蛋白，用210目尼龙布过滤沉淀物，用沉淀物质量20%的体积百分比浓度为95%的酒精洗 涤2次，然后在43°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。(2)在固体培养基中以每升含19. 5万个孢子的量接种哈茨木霉H-13孢子，充分拌 勻，得到发酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数 5%木糖+蔗糖作为碳源，再添加质 量百分数0. 2% 7%的畜禽血粉、质量体积比7. 5 19. Omg/L的硼酸钠、质量体积比20 30mg/L的硫酸锌(ZnS04)、质量百分数0. 02% 0. 3%的磷酸二氢钾(KH2P04)、质量百分数 0. 05% 0. 5%的磷酸氢二钾(K2HP04)和质量百分数0. 05% 0. 4%的硫酸镁(MgS04)，余 量加水，混合拌勻，控制湿度为72%，调pH至5. 7后高压灭菌，得到液体培养液；按照每升 液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，发酵温度设为25°C，发酵时间为7天，得到种子发酵液；所述木糖+蔗糖中的木 糖和蔗糖以质量比2 1混合。(3)将发酵基料盖上塑料布，送入经过过滤的空气中，在温度29°C条件下，发酵7 天，发酵过程中以每分钟70rpm的搅拌速度进行翻动，每隔30分钟置换经过过滤的空气，湿 度保持在73%。(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至质量百分含量14%，烘干后， 再粉碎成粒状发酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制剂。实施例2(1)配制固体培养基将质量百分数90%的晒干磨碎的甘蔗渣粉或秸秆粉，与质 量百分数2%的培养液混合拌勻，加入质量百分数5%的鸡粪和质量百分数3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制湿度为70%，于121°C高温和1. 15大气压条件下蒸汽消毒50分钟，得到 固体培养基；所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成山芋全粉3%
畜禽血粉2%
硼酉堯钠17. 2mg/L
硫酉堯锌25. lmg/L
磷酉I二氢钾0. 1%
磷酉I氢二钾0. 15%
硫酉堯镁0. 2%
水余重； 所述畜禽血粉的制备按以下操作步骤将鸡、鸭、鹅、猪或牛屠宰的鲜血经质量百 分比浓度为0. 3%的柠檬酸钠抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉 淀物体积的10%的水破坏红血球，再用醋酸或含醋酸质量百分比浓度15%的食用醋调pH至4. 6，沉淀蛋白，用220目尼龙布过滤沉淀物，用沉淀物质量20%的体积百分比浓度为 95%的酒精洗涤2次，然后在43°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。(2)在固体培养基中以每升含20. 5万个孢子的量接种哈茨木霉H-13孢子，充分拌 勻，得到发酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数 5%纤维素二糖+葡萄糖作为碳源， 再添加质量百分数0. 2% 7%的畜禽血粉、质量体积比7. 5 19. Omg/L的硼酸钠、质量体 积比20 30mg/L的硫酸锌(ZnS04)、质量百分数0. 02%~ 0. 3%的磷酸二氢钾(KH2P04)、 质量百分数0. 05% 0. 5%的磷酸氢二钾(K2HP04)和质量百分数0. 05% 0. 4%的硫酸镁 (MgS04)，余量加水，混合拌勻，控制湿度为78%，调pH至6. 5后高压灭菌，得到液体培养液； 按照每升液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入 哈茨木霉H-13孢子，发酵温度设为40°C，发酵时间为5天，得到种子发酵液；所述纤维素二 糖+葡萄糖中的纤维素二糖和葡萄糖以质量比21混合。(3)将发酵基料盖上塑料布，送入经过过滤的空气中，在温度28°C条件下，发酵6 天，发酵过程中以每分钟75rpm的搅拌速度进行翻动，每隔2小时置换经过过滤的空气，湿 度保持在78%。(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至质量百分含量12%，烘干后， 再粉碎成粒状发酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制剂。实施例3(1)配制固体培养基将质量百分数90%的晒干磨碎的甘蔗渣粉或秸秆粉，与质 量百分数2%的培养液混合拌勻，加入质量百分数5%的鸡粪和质量百分数3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制湿度为72%，于123°C高温和1. 35大气压条件下蒸汽消毒40分钟，得到 固体培养基；所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成麦麸水煎液溶解物3%畜禽血粉0.2%硼酸钠19. Omg/L硫酸锌30mg/L磷酸二氢钾0.3%磷酸氢二钾0.5%硫酸镁0.05%水 余重；所述畜禽血粉的制备按以下操作步骤将鸡、鸭、鹅、猪或牛屠宰的鲜血经质量百 分比浓度为0. 3%的柠檬酸钠抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉 淀物体积的10%的水破坏红血球，再用醋酸或含醋酸质量百分比浓度15%的食用醋调pH 至4. 7，沉淀蛋白，用240目尼龙布过滤沉淀物，用沉淀物质量20%的体积百分比浓度为 95%的酒精洗涤2次，然后在45°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉；所述碳源粉为麦麸水煎液溶解物时，麦麸水煎液溶解物的制备和加入按以下步 骤称取lOOmg麦麸，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得滤液，然后将滤液、畜禽血粉、硼酸 钠、硫酸锌、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和水混合配制成培养液，培养液定容为1升。
(2)在固体培养基中以每升含20万个孢子的量接种哈茨木霉H-13孢子，充分拌 勻，得到发酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数1 % 5%纤维素二糖+葡萄糖作为碳源， 再添加质量百分数0. 2% 7%的畜禽血粉、质量体积比7. 5 19. Omg/L的硼酸钠、质量体 积比20 30mg/L的硫酸锌(ZnSO4)、质量百分数0. 02% 0. 3%的磷酸二氢钾(KH2PO4)、 质量百分数0. 05% 0. 5%的磷酸氢二钾(K2HPO4)和质量百分数0. 05% 0. 4%的硫酸镁 (MgSO4)，余量加水，混合拌勻，控制湿度为75%，调pH至6. O后高压灭菌，得到液体培养液； 按照每升液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入 哈茨木霉H-13孢子，发酵温度设为30°C，发酵时间为6天，得到种子发酵液；所述纤维素二 糖+葡萄糖中的纤维素二糖和葡萄糖以质量比21混合。(3)将发酵基料盖上塑料布，送入经 过过滤的空气中，在温度30 0C条件下，发酵5 天，发酵过程中以每分钟SOrpm的搅拌速度进行翻动，每隔30分钟置换经过过滤的空气，湿 度保持在75%。(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至质量百分含量15%，烘干后， 再粉碎成粒状发酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制剂。实施例4(1)配制固体培养基将质量百分数90%的晒干磨碎的甘蔗渣粉或秸秆粉，与质 量百分数2%的培养液混合拌勻，加入质量百分数5%的鸡粪和质量百分数3%的蔗糖，力口 水充分拌勻，控制湿度为75%，于120°C高温和1. 05大气压条件下蒸汽消毒60分钟，得到 固体培养基；所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成米糠水煎液溶解物5%畜禽血粉5%硼酸钠9.5mg/L硫酸锌22mg/L磷酸二氢钾0.1%磷酸氢二钾0.4%硫酸镁0.2%水余重；所述畜禽血粉的制备按以下操作步骤将鸡、鸭、鹅、猪或牛屠宰的鲜血经质量百 分比浓度为0. 3%的柠檬酸钠抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉 淀物体积的10%的水破坏红血球，再用醋酸或含醋酸质量百分比浓度15%的食用醋调pH 至4. 6，沉淀蛋白，用200目尼龙布过滤沉淀物，用沉淀物质量20%的体积百分比浓度为 95%的酒精洗涤2次，然后在40°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉；所述碳源粉为米糠水煎液溶解物时，米糠水煎液溶解物的制备和加入按以下步 骤称取166. 5mg米糠，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得滤液，然后将滤液、畜禽血粉、 硼酸钠、硫酸锌、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和水混合配制成培养液，培养液定容为1 升。(2)在固体培养基中以每升含19. 5万个孢子的量接种哈茨木霉H-13孢子，充分拌勻，得到发酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数 5%木糖+蔗糖作为碳源，再添加质量百分数0. 2% 7%的畜禽血粉、质量体积比7. 5 19. Omg/L的硼酸钠、质量体积比20 30mg/L的硫酸锌(ZnSO4)、质量百分数0. 02% 0. 3%的磷酸二氢钾(KH2PO4)、质量百分数 0. 05% 0. 5%的磷酸氢二钾(K2HPO4)和质量百分数0. 05% 0. 4%的硫酸镁(MgSO4)，余 量加水，混合拌勻，控制湿度为76%，调pH至5. 9后高压灭菌，得到液体培养液；按照每升 液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，发酵温度设为35°C，发酵时间为6天，得到种子发酵液；所述木糖+蔗糖中的木 糖和蔗糖以质量比2 1混合。(3)将发酵基料盖上塑料布，送入经过过滤的空气中，在温度26°C条件下，发酵7 天，发酵过程中以每分钟65rpm的搅拌速度进行翻动，每隔1小时置换经过过滤的空气，湿 度保持在78%。(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至质量百分含量10%，烘干后， 再粉碎成粒状发酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制剂。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂的方法，其特征在于包括以下操作步骤(1)配制固体培养基将质量百分数90％的晒干磨碎的甘蔗渣粉或秸秆粉，与质量百分数2％的培养液混合拌匀，加入质量百分数5％的鸡粪和质量百分数3％的蔗糖，加水充分拌匀，控制湿度为70％～75％，于120～123℃高温和1.05～1.35大气压条件下蒸汽消毒40～60分钟，得到固体培养基；(2)在固体培养基中以每升含19.5～20.5万个孢子的量接种哈茨木霉H-13孢子，充分拌匀，得到发酵基料；(3)将发酵基料盖上塑料布，送入经过过滤的空气中，在温度26～30℃条件下，发酵5～7天，发酵过程中以每分钟65～80rpm的搅拌速度进行翻动，每隔30分钟～2小时置换经过过滤的空气，湿度保持在72～78％；(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至质量百分含量10～15％，烘干后，再粉碎成粒状发酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制剂。
2.根据权利要求1所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂 的方法，其特征在于步骤(2)所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数1 % 5 %木糖+蔗糖或纤维素二糖+葡萄糖 作为碳源，再添加质量百分数0. 2% 7%的畜禽血粉、质量体积比7. 5 19. Omg/L的硼酸 钠、质量体积比20 30mg/L的硫酸锌、质量百分数0. 02% 0. 3%的磷酸二氢钾、质量百 分数0. 05% 0. 5%的磷酸氢二钾和质量百分数0. 05% 0. 4%的硫酸镁，余量加水，混合 拌勻，控制湿度为72% 78%，调pH至5. 7 6. 5后高压灭菌，得到液体培养液；按照每升 液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，发酵温度设为25 40°C，发酵时间为5 7天，得到种子发酵液；所述木糖+蔗 糖中的木糖和蔗糖以质量比2 1混合；所述纤维素二糖+葡萄糖中的纤维素二糖和葡萄 糖以质量比2 1混合。
3.根据权利要求1所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂 的方法，其特征在于步骤(2)所述哈茨木霉H-13孢子的种子发酵液按如下方法配制配制液体PDA培养基，添加质量百分数2. 0 % 4. 5 %的木糖+蔗糖或纤维素二糖+葡 萄糖作为碳源，再添加质量百分数1. 5% 3. 5%的畜禽血粉、质量体积比8. 0 17. Omg/L 的硼酸钠、质量体积比20 30mg/L的硫酸锌、质量百分数0. 02% 0. 2%的磷酸二氢钾、 质量百分数0. 05% 0. 的磷酸氢二钾、质量百分数0. 05% 0. 4%的硫酸镁和水，混合 拌勻，控制湿度为72 % 78 %，调pH至6. 0 6. 2后高压灭菌，得到液体培养液；按照每升 液体培养液中接入9个直径为9cm的培养皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，发酵温度设为26 28°C，发酵时间为6 8天，得到种子发酵液；所述木糖+蔗 糖中的木糖和蔗糖以质量比2 1混合；所述纤维素二糖+葡萄糖中的纤维素二糖和葡萄 糖以质量比2 1混合。
4.根据权利要求1所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂 的方法，其特征在于步骤(1)所述甘蔗渣粉或秸秆粉为180目；所述秸秆粉为玉米秸秆 粉、黄豆秸秆粉、高山野草秸秆粉或高粱秸秆粉；步骤(1)所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成碳源粉 5%畜禽血粉 0.2% 7% 硼酸钠 7. 5 19. Omg/L 硫酸锌 20 30mg/L 磷酸二氢钾 0.02% 0.3% 磷酸氢二钾 0. 05 % 0. 5 % 硫酸镁 0.05% 0.4% 水余重。
5.根据权利要求4所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂 的方法，其特征在于步骤(1)所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成碳源粉 2.0% 4. 5% 畜禽血粉 1.5% 3. 5% 硼酸钠8. 0 17. Omg/L硫酸锌20 30mg/L磷酸二氢钾 0.02% 0.2% 磷酸氢二钾 0.05% 0.1% 硫酸镁0.05% 0.4%水余重。
6.根据权利要求4所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂 的方法，其特征在于步骤(1)所述培养液由以下按质量百分数计的组分配制而成碳源粉3%畜禽血粉 2% 硼酸钠17. 2mg/L硫酸锌25. lmg/L磷酸二氢钾 0.1% 磷酸氢二钾 0. 15% 硫酸镁0.2%水余重。
7.根据权利要求4 6任一项所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座 果的制剂的方法，其特征在于所述碳源粉为马铃薯全粉、山芋全粉、麦麸水煎液溶解物或米糠水煎液溶解物； 所述畜禽血粉的制备按以下操作步骤将鸡、鸭、鹅、猪或牛屠宰的鲜血经质量百分比 浓度为0. 3%的柠檬酸钠抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉淀 物体积的10%的水破坏红血球，再用醋酸或含醋酸质量百分比浓度15%的食用醋调pH至 4. 6 4. 8，沉淀蛋白，用200 240目尼龙布过滤沉淀物，用沉淀物质量20%的体积百分比 浓度为95%的酒精洗涤2 3次，然后在40 45°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。
8.根据权利要求4所述的一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂 的方法，其特征在于所述碳源粉为麦麸水煎液溶解物时，麦麸水煎液溶解物的制备和加入按以下步骤称取33. 3 166. 5mg麦麸，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得滤液，然后将滤液、畜禽血粉、 硼酸钠、硫酸锌、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和水混合配制成培养液，培养液定容为1 升；所述碳源粉为米糠水煎液溶解物时，米糠水煎液溶解物的制备和加入按以下步骤称 取33. 3 166. 5mg米糠，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得滤液，然后将滤液、畜禽血粉、 硼酸钠、硫酸锌、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和水混合配制成培养液，培养液定容为1升。
9.一种根据权利要求1 7任一项所述方法制备的促旱生作物授粉和座果的制剂。
10.根据权利要求9所述的促旱生作物授粉和座果的制剂应用于促进旱生作物及油茶 早开花传粉、提高座果率和抗土传病。
全文摘要
本发明公开了一种哈茨木霉固体发酵制造促旱生作物授粉和座果的制剂及其方法和应用。该方法的步骤包括(1)配制固体培养基；(2)在培养基中接种哈茨木霉孢子，拌匀得到发酵基料；(3)将发酵基料盖上塑料布，再输入经过过滤的空气，于26～30℃下发酵5～7天，发酵过程中进行翻动，定时置换过滤空气，湿度保持在72～78％；(4)打开塑料布，凉至室温，通风干燥，使含水量降至10～15％后烘干粉碎成粒状发酵物，即得到促旱生作物授粉和座果的有机肥料。该制剂可使蔬菜增产20％，玉米增产15％，黄瓜增产28％，水稻增产5.3％，在每亩耕地尿素施用量减半时增施该固体肥料，能使小麦增产10％以上，油茶现状每亩增产一倍。
文档编号C05F17/00GK101870596SQ201010201299
公开日2010年10月27日 申请日期2010年6月12日 优先权日2010年6月12日
发明者罗曼, 蒋立科 申请人:暨南大学