专利名称：一种山羊超数排卵方法
一种山羊超数排卵方法本发明涉及超数排卵技术领域，尤其涉及一种山羊超数排卵的方法。 [背景技术]超数排卵技术是应用外源性促性腺激素诱发卵巢多个卵泡发育，并排出具有受精 能力的卵子的方法，简称“超排”。该技术结合胚胎移植技术，能够大大提高优良种畜的生 产、扩繁能力，生产和科研中已经广泛应用。传统山羊超排始于上世纪80年代年(Armstrong DT, Pfitzner AP, Warnes GM, Seamark RF. Superovulation treatments and embryo transfer in Angora goats.J Reprod Fertil 1983 ；67 :403-10. ；Tervit HR, Goold PG, McKenzie RD, Clarkson DJ, DrummondJ. Embryo transfers in Angora and Saanen goats. N Z Vet J 1985 ；33 78-80)，该方法一直延续到现在，具体方法是用孕酮栓在母畜体内放置12 18天，在撤栓 前4 开始用FSH的超排处理，通过这种处理，可以获得10 20枚胚胎。国内外普遍使用 的超排方案，取得了一定的经济效益。能够稳定获得一定数量的卵母细胞或胚胎。上世纪90年代，哺乳动物卵巢卵泡动力学和生殖内分泌研究的发展，为超数排卵 的方案提供了新的思路。哺乳动物发情周期中一般有多个卵母细胞同时发育，但仅有1 2枚最终发育成熟并排卵，在正常发情周期中，由于有优势卵泡的存在使其抑制了其他卵母 细胞的发育，造成单胎动物的形成(Sirois J,Fortune JE. Ovarian follicular dynamics during the estrous cycle in heifers monitored by real-time ultrasonography. Biol Reprod 1988 ；39 :308-17. ；Savio JD, Keenan L, Boland MP, Roche JF.Pattern of growth of dominant follicles during the oestrous cycle of heifers. J Reprod Fertil 1988 ；83 :663-71.)，在传统超排方案中，家畜处在不同的卵巢周期会获得不同超 排的结果(Guilbault LA, Grasso F，Lussier JG, Rouillier P，Matton P. Decreased superovulatory responses in heifers superovulated in the presence of a dominant follicle. J eprod Fertil 1991 ；91 :81-9. ；Huhtinen M，Rainio V，Aalto J，Bredbacka P，Ma.. ki—Tanila A. Increased ovarian responses in the absence of a dominant follicle in superovulated cows. Theriogenology 1992 ；37 :457-63. ；Nasser LFiAdams GPjBo GAiMapletoft RJ. Ovarian superstimulatory response relative to follicular wave emergence in heifers. Theriogenology 1993 ;40 :713-24.)，这主要是由于卵巢上 优势卵泡的存在，在超排过程中抑制其他小卵泡的生长，影响了卵泡募集和超排反应，从而 造成超排效率的低下(Menchaca AiPinczak A,Rubianes E. Follicular recruitment and ovulatory response to FSHtreatment initiated on day O or day 3postovulation in goats. Theriogenology 2002 ；58 :1713-21. )D根据卵泡波的理论，利用孕酮栓诱导 发情方法将优势卵泡排出，在下一个卵泡波幵始前进行超排可以获得更好的超排效果，同 时超排卵母细胞或胚胎数量上及胚胎质量上均有所提高(Menchaca，Α.，Vilarifio，Μ.， Crispo，M.，Pinczak，A.，and Rubianes,Ε. Day O protocol :Superstimulatory treatmentinitiated in the absence of a large follicle improves ovarian response and embryo yield in goats. Theriogenology2007 :68，1111-1117)。这些方法的使用均需要 孕酮栓进行前期抑制发情或诱导发情处理，处理时间为5-14天，这使实验的随机性受到限 制，同时由于孕酮栓为国外进口或国内生产，国外进口阴道栓价格较为昂贵，在生产中和实 验中使用提高了成本，而国内的孕酮栓质量不够过关，常常造成阴道粘连和阴道炎症。我们 设想，正常发情的母羊会排出优势卵泡，排卵后在合适的卵泡发生时期进行超数排卵处理， 可以获得较好的效果。本发明要解决的技术问题是提供一种能提高母羊超数排卵效率，缩短超排处理时 间，提高超排数量，降低超排费用的山羊超数排卵方法。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，以自然发情母羊为对象，首次 发情时记为第0天，分别在第四天、第五天、第六天、第七天，早晚各注射一次促卵泡素，第 七天早晚同时注射氯前列烯醇，第八天注射促黄体素，注射时间为首次注射氯前列烯醇后 32-40小时，第九天进行腹腔镜输精输精时间为促黄体素注射后12-18小时，第十天取原核 胚或第十六天取桑椹胚。作为优选，第四天注射的促卵泡素购买于宁波市三生药业有限公司，规格100IU/ 支，每次注射剂量为30-34IU。作为优选，第五天注射的促卵泡素购买于宁波市三生药业有限公司，规格100IU/ 支，每次注射剂量为^_30IU。作为优选，第六天注射的促卵泡素购买于宁波市三生药业有限公司，规格100IU/ 支，每次注射剂量为22-26IU。作为优选，第七天注射的促卵泡素购买于宁波市三生药业有限公司，规格100IU/ 支，每次注射剂量为18-22IU。作为优选，第七天注射的氯前列烯醇购买于上海计划生育研究所，规格 0. ang/aiil，每次注射剂量为0. 08mg。作为优选，第八天注射的促黄体素购买于宁波市三生药业有限公司，规格200IU/ 支，每次注射剂量为100IU。对于供体母羊的选择，其年龄、发情周期和生殖系统有一定的标准。要选择年龄 在10个月以上，体重在45斤以上，但不宜过肥，膘情达到中上即可；有1-2次稳定的发情周 期；供体母羊无生殖系统疾病、无传染性疾病。本发明的有益效果是，取消了常规超排方法羊放置孕酮栓的过程，在羊自然发情 后3-5天进行超数排卵，缩短了生产时间，降低了生产费用，同时该方法可以获得与常规超 排方法一样的超排效率，每个批次的实验结果为每只羊平均能获得胚胎8-30枚，胚胎发育 效率与常规超排方案相同。
具体实施方式
步骤如下所用材料
促卵泡素(FSH)，购买于宁波市三生药业有限公司，规格为100IU/支；氯前列烯醇(PG)，购买于上海计划生育研究所，规格为0. 2mg/2ml ；促黄体素(LH)，购买于宁波市三生药业有限公司，规格为200IU/支。1、发情羊的鉴定选取超排用羊，在实验期间在早中晚分三次进行试情，即选用输精管结扎后公羊， 放入母羊圈中，其中接受跨爬的母羊视为发情，并做记录。2、发情羊的超排每只母羊发情时为第0天(早、中、晚观察到发情均可)，分别在第四天、第五天、第 六天、第七天，早晚各注射一次促卵泡素注射，第七天早晚同时注射氯前列烯醇，第八天注 射促黄体素。在本实施方式中，我们得出的最佳方案如表1 母羊首次发情视为第0天(发情被 观察为早中晚均可)，第四天上午6时开始首次注射促卵泡素，注射剂量为32IU，第二、三、 四、五、六、七、八次促卵泡素注射剂量分别为30IU、28IUJ6IU、24IU、22IU、20IU、18IU，第七 天早6:00和晚18:00分别注射氯前列烯醇0. Smg0第八天晚20:00注射促黄体素，第九天 15:00进行腹腔输精(或第九天早7:00和晚17:00点进行人工授精或本交)。第十天8:00 取原核胚或第十六天取桑椹胚。表1
权利要求
1.一种山羊超数排卵方法，步骤如下以自然发情母羊为对象，首次发情时计为第0天，分别在第四天、第五天、第六天、第七 天，早晚各注射一次促卵泡素，第七天早晚同时注射氯前列烯醇，第八天注射促黄体素，注 射时间为首次注射氯前列烯醇后32-40小时，第九天进行腹腔镜输精输精时间为促黄体素 注射后12-18小时，第十天回收原核胚或第十六天回收桑椹胚。
2.根据权利要求1所述的山羊超数排卵方法，第四天注射的促卵泡素购买于宁波市三 生药业有限公司，规格100IU/支，每次注射剂量为30-34IU。
3.根据权利要求2所述的山羊超数排卵方法，第五天注射的促卵泡素购买于宁波市三 生药业有限公司，规格100IU/支，每次注射剂量为^-30iu。
4.根据权利要求3所述的山羊超数排卵方法，第六天注射的促卵泡素购买于宁波市三 生药业有限公司，规格100IU/支，每次注射剂量为22-26IU。
5.根据权利要求4所述的山羊超数排卵方法，第七天注射的促卵泡素购买于宁波市三 生药业有限公司，规格100IU/支，每次注射剂量为18-22IU。
6.根据权利要求5所述的山羊超数排卵方法，第七天注射的氯前列烯醇购买于上海计 划生育研究所，规格0. ang/aiii，每次注射剂量为0.08mg。
7.根据权利要求6所述的山羊超数排卵方法，第八天注射的促黄体素购买于宁波市三 生药业有限公司，规格200IU/支，每次注射剂量为100IU。
全文摘要
本发明公开了一种山羊超数排卵方法，其步骤是选取可以用于超数排卵的雌性山羊，每天早晚试情，以观察到首次发情作为第0天，分别在第四、第五、第六、第七天早晚各注射一次促卵泡素，第七天早晚同时注射氯前列烯醇，第八天注射促黄体素，第九天进行腹腔镜输精，第十天通过手术法回收原核胚或第十六天收集桑椹胚。本发明取消了山羊常规超排方法中需放置孕酮栓的过程，缩短了生产时间，降低了生产费用，同时该方法可以获得与常规超排方法一样的超排效率，每个批次的实验结果为每只羊平均能获得胚胎8-30枚。
文档编号A61D19/00GK102068322SQ20111004274
公开日2011年5月25日 申请日期2011年2月22日 优先权日2011年2月22日
发明者丁建平, 刘亚, 刘晓蕊, 周娜汝, 季索菲, 张子军, 张宇, 张运海, 张远亮, 曹鸿国, 李运生, 杨盼, 桂涛, 焦明慧, 章孝荣, 章美玲, 贾晴, 陶勇, 随刘才, 韩春杨 申请人:安徽农业大学