专利名称：一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法
技术领域：
本发明涉及一种萝卜新品种的选育方法，具体是一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法。
背景技术：
萝卜是我国深受大众喜爱的蔬菜之一，常年栽培面积在153万公顷左右，仅次于大白菜，排名第二。萝卜一年四季都可以栽培，目前在我国基本实现了萝卜周年生产、周年供应，萝卜除可以鲜食、熟食外还可以腌制加工。过去萝卜加工部分主要是根部，叶子加工味道差一般很少加工。我国每年加工萝卜栽培面积占萝卜栽培总面积的10%以上，可估算每年就有15. 3万公顷面积，5725. 5万吨(以每公顷27. 5吨重量计算)的萝卜叶子被丢弃， 不仅浪费资源，也使农民减少了一个增产增效的机会。因此培育一个根叶两用的加工型萝
卜新品种，已成为相关领域极为关注和极具前瞻性的研究课题。
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种地上部叶片类似雪里蕻，且腌制风味独特；地下部为萝卜，且萝卜产量高、水分含量低、营养成分丰富、适宜腌制的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，本发明是采用以下技术方案来解决的一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其通过原生质体融合方式将萝卜体细胞与芥菜体细胞融合形成融合细胞；所述融合细胞培养发育成体细胞杂种植株；所述体细胞杂种植株通过定向选育方式获得新品种。优选的，所述新品种与雄性不育系萝卜杂交配制杂交一代。优选的，所述萝卜体细胞选用高产、抗病、水分低、花叶的大青萝卜制备。优选的，所述芥菜体细胞选用花叶芥菜制备。优选的，所述花叶芥菜为雪里蕻。本发明提供的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，将芥菜与萝卜进行原生质体融合获得地上叶子类似雪里蕻，风味独特，营养丰富，富含维生素A、维生素B、维生素B2、 维生素C、钙、磷、铁、蛋白质等，其中维生素A含量是动物肝脏的3倍，维生素B含量高于豆类，维生素B2含量是牛奶的2 3倍，维生素C的含量是桔子的2 3倍。根叶两用加工型萝卜新品种的水分含量较目前主栽的加工品种武青一号低，为 92.观％，糖分及维生素含量高于武青一号，而且在产量和商品性上均由于武青一号，特别是在综合经济效益高，节约土地，每亩较单种雪里蕻增产1.2倍，较单种加工萝卜增长0.9 倍，市场开发前景广阔。
图1为本发明实施例选育系谱图。
具体实施例方式以下结合通过附图和实验例以及实施例对本发明进行阐述，然而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所属技术领域的普通技术人员依据本发明公开的内容，均可实现本发明的目的。实施例一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，包括以下步骤1、叶肉原生质体的制备分别将高产、抗病、水分低、花叶的大青萝卜和武汉本地品种雪里蕻(狮子头品种)的种子用体积比为70%酒精表面消毒lmin，然后用体积比为3% NattO溶液浸泡消毒 30min,最后用无菌水冲洗3次，接种到MS培养基上，置于组培室发芽，取充分展开的叶片 (一般10天左右)用于原生质体的分离；将体积-质量比分别为纤维素酶，0. 8%果胶酶，9%甘露醇，0. 4% CaCl2, PH值 5. 6配置酶原液；将叶片用刀片切成细条状置于25°C的酶原液中，黑暗条件振荡(lOOr/min)酶解 3 4小时，收集原生质体时先用200目不锈钢滤网粗滤去渣质，收集滤液至IOml玻璃离心管中，600r/min离心5min，去上清液，沉淀物加入^iil W5培养基(或原生质体清洗液)， 悬浮原生质体，用胶头滴管吸出，沿管壁轻轻地加入到另一含有2 3mL 20%蔗糖+MES的 IOmL离心管中，离心(500r/min)10min，小心收集环型带状的原生质体至IOmL离心管中，再加入W5溶液离心(500r/min) 5min。2、原生质体融合在原生质体对称融合的过程中供体和受体均不经过任何处理。融合方法为将一滴融合液滴于小培养皿底部，在倒置显微镜下以手工制备的毛细微吸管吸取亲本的原生质体各一个置于融合液中，通过手工轻轻移动两原生质体，使之接触与粘连，然后将已紧密粘连的原生质体转于清洗液中清洗，最后转入培养基中。另一种方法为大量融合法先将融合液滴于培养皿底部，再将两亲本的原生质体混合均勻，将混合液轻轻滴加其上，静置30min， 再加W5培养基或原生质体清洗溶液清洗，离心收集，接种于培养基。植物原生质体融合技术是借鉴于动物细胞融合的研究成果，在原生质体分离培养的基础上建立起来的，以植物的原生质体为材料，通过物理、化学等因素的诱导，使两个原生质体融合在一起以致形成融合细胞的技术。它不是雌雄孢子之间的结合，而是具有完整遗传物质的体细胞之间的融合，是2种原生质体间的杂交，通过原生质体融合可以把带有不同的基因组的两个细胞结合在一起，与有性杂交相比，无疑可以使“杂交”亲本组合的范围扩大，不但可以利用细胞核内基因资源，还可以利用包含在细胞质中的诸如叶绿体和线粒体DNA的遗传资源。3、将各类型融合细胞分别继代、培养发育成体细胞杂种植株。首先将原生质体置于脱分化培养基上进行脱分化培养，培养条件约是25°C黑暗静置培养，两周后添加稀释培养基，每周添加一次直至生长出愈伤组织，且大小约l_2mm左右，再将愈伤组织转至扩增培养基，让其继续生长，直至愈伤组织生长至5mm大小后再将其转移至分化培养基，此时培养条件是25°C光照培养，待愈伤组织生长出小苗且茎长在5mm 以上时进而转入生根培养基诱导生根，最后待其生根完全取出练苗后转移至大田。
4、将融合程度不同的融合细胞培养发育而成的体细胞杂种植株进行营养成分测定及相关对比，获得适合腌制加工的根叶两用加工型萝卜的新品种。5、将根叶两用加工型萝卜的新品种与雄性不育系萝卜杂交，获得具有雄性不育特征且整齐一致的根叶两用加工型萝卜新品种。营养成分对比
品种名称水分(％)维生素C (mg/Kg 鲜重)蛋白质 (%干重)糖 (%干重)纤维素 (%干重)根叶两用品种(根)92.28432.580.5616.641.099才艮叶两用品种(叶)91.27938.820.613.170.414武青一号 (根)CK92.66499.620.7312.220.978 以上对本发明所提供的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法进行了详细介绍， 本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式
及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
权利要求
1.一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其特征在于 通过原生质体融合方式将萝卜体细胞与芥菜体细胞融合形成融合细胞； 所述融合细胞培养发育成体细胞杂种植株；所述体细胞杂种植株通过定向选育方式获得新品种。
2.根据权利要求1所述的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其特征在于所述新品种与雄性不育系萝卜杂交配制杂交一代。
3.根据权利要求1所述的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其特征在于所述萝卜体细胞选用高产、抗病、水分低、花叶的大青萝卜制备。
4.根据权利要求1所述的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其特征在于所述芥菜体细胞选用花叶芥菜制备。
5.根据权利要求1所述的根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其特征在于所述花叶芥菜为雪里蕻。
全文摘要
本发明涉及萝卜新品种的选育方法，具体公开了一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其通过原生质体融合方式将萝卜体细胞与芥菜体细胞融合形成融合细胞；所述融合细胞培养发育成体细胞杂种植株；所述体细胞杂种植株通过定向选育方式获得新品种。本发明将芥菜与萝卜进行原生质体融合获得地上叶子类似雪里蕻，风味独特，营养丰富，适合加工，特别是在综合经济效益高，节约土地，在经济效益方面每亩较单种雪里蕻增收1.2倍，较单种加工萝卜增收0.9倍，市场开发前景广阔。
文档编号A01H1/02GK102415331SQ201110248258
公开日2012年4月18日 申请日期2011年8月24日 优先权日2011年8月24日
发明者张小康, 张雪清, 熊秋芳 申请人:武汉市蔬菜科学研究所