专利名称：一种扩繁豌豆潜蝇姬小蜂的方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种扩繁豌豆潜蝇姬小蜂的方法。
背景技术：
斑潜蝇是一类严重危害蔬菜生产的害虫，主要包括美洲斑潜蝇、南美斑潜蝇和三叶草斑潜蝇等。危害保护地和大棚蔬菜，其中以豆科、茄科和葫芦科受害最重。该类害虫的成虫取食植物汁液造成取食孔并将卵产于叶片内，孵化后的幼虫在叶片中取食叶肉，会在叶片上造成很多潜道，幼虫老熟后大多咬破表皮钻出叶片或掉落土表化蛹。幼虫潜道和成虫取食孔不仅对某些观赏植物造成严重的损害，而且很大程度地影响植物光合作用，导致蔬菜叶片枯萎，产量降低、品质下降，甚至整株死亡。豌豆潜蝇姬小蜂是转化性寄生多种潜叶蝇类害虫的优良寄生蜂,应用这种寄生蜂控制潜叶蝇具有很多优点，最重要的是能替代化学农药，达到防控潜叶蝇危害的目的，生产绿色农产品。此外，该寄生蜂还有其他优点，主要包括(1)它可适用于多种作物(菜豆、豌豆、油菜、番茄、黄瓜等)；(2)它可寄生多种潜叶蝇(美洲斑潜蝇、美洲斑潜蝇、南美斑潜蝇、三叶草斑潜蝇等)；(3)它的发育速率快于潜叶蝇，种群可以快速地增长和定殖；(4)它控害效果好，能快速、有效地阻止潜叶蝇幼虫的为害；(5)它的蛹和成虫都能在田间很容易用肉眼观察到；(6)它不仅能寄生潜叶蝇幼虫，还能吸食低龄幼虫。因此,豌豆潜蚬姬小蜂(Diglyphus isaea Walker)是防控斑潜蚬的优良寄生蜂，可在害虫体内产卵，孵化后在害虫体内发育，吸取害虫营养从而杀死害虫，此外，这种寄生蜂的成蜂还能直接刺吸害虫致其死亡。在欧洲南部的许多国家，不论在温室还是田间，豌豆潜蝇姬小蜂都是蔬菜和观赏植物上潜叶蝇的重要寄生蜂。在俄罗斯、意大利、以色列、希腊等国家，豌豆潜蝇姬小蜂对当地为害严重的南美斑潜蝇、三叶草斑潜蝇、番茄斑潜蝇都起着重要的控制作用。鉴于该寄生蜂的优良生防能力，总结筛选高效扩繁技术，大量生产天敌昆虫产品，对于防控我国蔬菜、园艺、农业、林业上的潜叶蝇类害虫具有重大的意义。我国对豌豆潜蝇姬小蜂等寄生蜂的研究工作起步较晚。1996年，中国农业科学院生物防治研究所首次从荷兰引进豌豆潜蝇姬小蜂来防治美洲斑潜蝇，室内试验防治效果较好
发明内容
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本发明的一个目的是提供一种扩繁豌豆潜蝇姬小蜂的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤I)将带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗放入养虫容器中，接入待产卵的豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂,在所述寄主幼虫体内产卵后培养至所述寄主幼虫发育为蛹状,得到带有蛹的植物A ;2)取出所述带有蛹的植物A进行出蜂培养，收集豌豆潜蝇姬小蜂，实现扩繁。上述方法中，步骤I)中，所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主为美洲斑潜蝇，
所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫为2-3周龄的美洲斑潜蝇。所述接入豌豆潜蝇姬小蜂为接入豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂。上述方法中，步骤I)中，所述接入豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂和所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的个数比为I: (15-25)。上述方法中，步骤I)中，所述接入豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂和所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的个数比为1:25。上述方法中，步骤I)中，所述植物为豆科植物，所述豆科植物具体为菜豆；所述植物幼苗具体为生长13-17天的菜豆幼苗；所述菜豆幼苗具体为生长13天的菜豆幼苗；所述生长13天的菜豆幼苗为菜豆种子播种后培育13天得到的菜豆幼苗，自种子播种起记作第I天。所述生长13天的菜豆幼苗的真叶面积为O. 01-0. 02m2。上述方法中，步骤2)中，所述出蜂培养为将取出的所述植物A的叶片在出蜂容器中培养3-6天。上述方法中，步骤2)中，所述出蜂培养为将取出的所述植物A的叶片在出蜂容器中培养3-6天。上述方法中，在步骤I)前，还包括制备带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗的步骤向放有所述生长13天的菜豆幼苗的养虫容器中接入成对美洲斑潜蝇，产卵，培养，得到带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗。上述方法中，所述制备带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗的步骤中，所述美洲斑潜蝇按照每平方米所述养虫容器接250对美洲斑潜蝇接入。也可以按照每株所述生长13天的菜豆幼苗接种25对美洲斑潜蝇接入。上述方法中，所述制备带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗的步骤中，所述培养为在所述产卵后2h移除所述美洲斑潜蝇，培养卵2周-3周，自产卵日起记作第I天。上述方法中，步骤2)中，所述收集豌豆潜蝇姬小蜂为如下A或B :A、将经出蜂培养后的带有蛹的菜豆幼苗叶片在水中浸泡10-15分钟，且同时震荡以脱落所述蛹，收集所述蛹，待所述蛹羽化，得到豌豆潜蝇姬小蜂；B、将经出蜂培养后的带有蛹的菜豆幼苗叶片置于开口端封闭的容器中，并将所述容器置于集蜂箱中，在所述集蜂箱的上方提供亮光，待所述豌豆潜蝇姬小蜂蛹羽化后，打开所述容器的开口，利用所述豌豆潜蝇姬小蜂成蜂的趋光性，所述豌豆潜蝇姬小蜂成蜂自动进入集蜂箱完成收集。上述方法中，所述生长13天的菜豆幼苗按照包括如下A、B和C步骤的方法制备A、将菜豆的种子播种，培育，得到菜豆幼苗；所述培育的时间具体为5天，将播种日记作第I天；B、将所述菜豆幼苗移栽到含有培养基质的营养钵中，继续培育，得到带有真叶的幼苗；上述将所述幼苗移栽到含有培养基质的营养钵中具体为按照每钵2棵所述幼苗、移栽，上述培养基质具体为草炭和蛭石以体积比2 I混合的混合物；所述继续培育的时间具体为3天；
C、去除所述带有真叶的幼苗的生长点，再次培育，得到所述生长13天的菜豆幼苗；所述再次培育的时间为5天；各种所述培育的条件均具体为温度27 ± O. 5 °C、相对湿度65%_70%、光周期L D=14h 10h。本发明的实验证明，本发明围绕繁蜂寄主筛选、最佳接蜂比例、接蜂关键时机、成蜂收集贮存等技术环节，经过反复探索与改进，形成了高效、经济、简便的寄生蜂扩繁技术，可快速大量扩繁豌豆潜蝇姬小蜂，达到对害虫生物防止的目的，具体优点如下(I)成本低廉技术采用的种苗扩繁环节，菜豆为常用品种，扩繁的基质(蛭石)可多次使用，只需经日光曝晒即可。承载潜蝇幼虫的叶片营养来自于菜豆的子叶，不许额外补充肥料及营养液。其他各环节采用的营养钵、纱网等均是低值品，易购得并能自行加工。(2)空间利用率高本技术不限扩繁空间，大至扩繁天敌的生产线、小至简易的温室和塑料棚，均可用来扩繁豌豆潜蝇姬小蜂天敌产品。(3)便于工厂化操作本技术涉及扩繁豌豆潜蝇姬小蜂的各个环节，均可集约化操作，便于工厂化生产。(4)蛹及成蜂可自动收集，并能分别针对防控对象的不同而收集蛹卡、成蜂，快速释放，节省大量的人工物力。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例I、扩繁豌豆潜蝇姬小蜂一、种苗的培育I、种苗品种选择种苗选择菜豆，品种为英国红芸豆，选择颜色正、颗粒大、饱满、形状规则、质地均匀的种子。2、种苗的快繁快繁培育条件种苗种植生长的最佳环境条件温度27±0.5°C、相对湿度65%-70%、光周期 L D=14h IOh。I)催芽播种在封闭隔离的种苗培育室内，于塑料盘钵(60CmX30Cm)内放入蛭石，约为盆容积的2/3，将蛭石润湿均匀(切忌水不可过多，防止菜豆腐烂)，然后将菜豆种子摁入蛭石中，刚没过蛭石即可，培育约5d，得到种子萌发且茎长到3cm左右的豆苗，将播种日记作第I天。2)及时分钵将上述I)得到的豆苗移到直径为12cm的营养钵中，以混合土 (草炭和蛭石以2 I混匀)栽培，每钵2棵，继续培育3天，长到2片真叶充分展开。3)两叶载体接虫豆苗长到2片真叶充分展开时，掐除生长点，使得种子内的后续营养及光合同化营养均用来生长这两片真片，再次培育5天，得到生长13天的豆苗，将2)培育结束日记作第O天。从种子到得到所需要的苗共培育13d，真叶面积充分扩大至O. 01-0. 02m2时，既可、用于下一环节。二、接种(接寄主)I、寄主遴选选择豌豆潜蝇姬小蜂优势寄生的寄主——美洲斑潜蝇(美洲斑潜蝇田间药剂筛选试验肖春雷罗丰周彬杨礼哲刘勇孔祥义《长江蔬菜》2011年第20期，公众可从中国农业科学院植物保护研究所获得)，以其幼虫作为繁蜂寄主。2、保种维持即保种种群的建立与维持；为满足扩繁的需求，需建立美洲斑潜蝇和豌豆潜蝇姬小蜂的保种种群，此二种群适宜的保种环境条件为温度26±0. 5°C，相对湿度RH65%-70%，光周期L D=14h IOh0定期从野外采集土著种群进行复壮。3、接种I)接种时间的选择试验方法分别将9d、lld、13d、15d、17d生长期(自播种日其第几天即为几天的生长期，播种日记作第I天)的菜豆各I钵移入接虫笼中，并向笼中接入30对美洲斑潜蝇成虫，然后将接虫笼置于人工气候箱内(温度26°C，相对湿度RH70%，光周期L D=14h 10h。)。美洲斑潜蝇蝇成虫在菜豆上产卵2h后将其剔除。将带有卵的各生长期菜豆在人工气候箱(温度26°C，相对湿度RH70%，光周期L D=14h IOh)内继续培养。待菜豆叶片上的卵孵化且在幼虫发育到I龄时观察各叶片上单位面积的幼虫数及总幼虫数，比较美洲斑潜蝇对不同生长期菜豆的嗜食性。共5次重复。结果如表I所示，美洲斑潜蝇对不同生长期的菜豆苗有选择性差异，总体来看，美洲斑潜蝇更喜取食偏老龄叶片，13d、15d、17d的菜豆叶片上平均总幼虫数均在38头以上。其中，美洲斑潜蝇对生长期为13d的菜豆苗选择性最强，叶片上总幼虫数最多可达112头，单位面积幼虫数为O. 39头/cm2 ;对其他各生长期的菜豆的选择性无显著性差异。因此，美洲斑潜蝇最嗜食生长期为13d的菜豆苗。表I美洲斑潜蝇对不同生长期生长期菜豆的选择性
ttil HPJi 笮位 ι_ 幼虫数_ _(I)_(5</cm3)_
9]8.2+_a0.17
U33.6±^. a0.22
1374.g±I2.7b0.39
154i.5土6.4 a0.27
1733 3-fcI1.3a0.24、
注表中数据为平均值土标准差；不同小写字母表示在O. 05水平上的差异显著性因此，选用13d生长期的菜豆无虫苗(真叶面积充分扩大至O. 01-0. 02m2)移入接虫室接种，此时蚕豆叶片面积及柔嫩度最佳，单片叶面可负虫Iio头，单位面积幼虫数为O. 39头/cm2，是最佳的接种时间。2)接寄主量的选择试验方法每个接虫笼(50X40X40)放入生长期为13d的菜豆苗，共4个处理，并分别向4个笼中接入10对、30对、50对、70对美洲斑潜蝇成虫让其取食、产卵，产卵2h后剔除成虫，且将带有卵的菜豆苗移出接虫笼并置于人工气候箱(温度26°C，相对湿度RH70%，光周期L D=14h IOh)内继续培养3周。待菜豆叶片上的卵孵化且在幼虫发育到3龄时观察各叶片上单位面积的幼虫数及总幼虫数。每处理5次重复。试验结果如表2所示，可以看出，当接入70对美洲斑潜蝇成虫时，由于虫口密度过高，在美洲斑潜蝇各龄期幼虫之间存在激烈的种内竞争，一部分幼虫未能发育至3龄就死亡；发育至3龄时，由于幼虫取食量较大，导致菜豆叶片全花、叶肉食尽、仅余上下表皮组织,整个叶片枯萎甚至干瘪。接入50对美洲斑潜蝇成虫时，总幼虫数、单叶幼虫数、单位面积幼虫数分别可以达到112. 6头、56. 7头、O. 83头/cm2，既能避免种内竞争，又可以获得大量健康的3龄美洲斑潜蝇幼虫。因此，每笼接入美洲斑潜蝇成虫的最适数量为50对，折算为接虫室内单位面积250对/m2的密度(养虫笼底面积是45cm*45cm=0. 2025m2,每平方米可放置5个养虫笼，每笼50对，故此接虫数量为250对/m2)，每钵50对，每钵2株。表2美洲斑潜蝇最适接虫数量
权利要求
1.一种扩繁豌豆潜蝇姬小蜂的方法，包括如下步骤 1)将带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗放入养虫容器中，接入待产卵的豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂,在所述寄主幼虫体内产卵后培养至所述寄主幼虫发育为蛹状,得到带有蛹的植物A ； 2)取出所述带有蛹的植物A进行出蜂培养，收集豌豆潜蝇姬小蜂，实现扩繁。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于 步骤I)中，所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主为美洲斑潜蝇， 所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫为2-3周龄的美洲斑潜蝇。
3.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于 步骤I)中,所述接入豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂和所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的个数比为I: (15-25)。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于 步骤I)中,所述接入豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂和所述豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的个数比为1:25。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于 步骤I)中，所述植物为豆科植物，所述豆科植物具体为菜豆； 所述植物幼苗具体为生长13-17天的菜豆幼苗；所述菜豆幼苗具体为生长13天的菜豆幼苗；所述生长13天的菜豆幼苗为菜豆种子播种后培育13天得到的菜豆幼苗，自种子播种起记作第I天。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于 步骤2)中，所述出蜂培养为将取出的所述植物A的叶片在出蜂容器中培养3-6天。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法,其特征在于 在步骤I)前，还包括制备带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗的步骤向放有所述生长13天的菜豆幼苗的养虫容器中接入成对美洲斑潜蝇，产卵，培养，得到带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于 所述制备带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗的步骤中，所述美洲斑潜蝇按照每平方米所述养虫容器接250对美洲斑潜蝇接入。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于 所述制备带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗的步骤中，所述培养为在所述产卵后2h移除所述美洲斑潜蝇，培养卵2周-3周，自产卵日起记作第I天。
10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于 步骤2)中，所述收集豌豆潜蝇姬小蜂为如下A或B : A、将经出蜂培养后的带有蛹的菜豆幼苗叶片在水中浸泡10-15分钟，且同时震荡以脱落所述蛹，收集所述蛹，待所述蛹羽化，得到豌豆潜蝇姬小蜂； B、将经出蜂培养后的带有蛹的菜豆幼苗叶片置于开口端封闭的容器中，并将所述容器置于集蜂箱中，在所述集蜂箱的上方提供亮光，待所述豌豆潜蝇姬小蜂蛹羽化后，打开所述容器的开口，利用所述豌豆潜蝇姬小蜂成蜂的趋光性，所述豌豆潜蝇姬小蜂成蜂自动进入集蜂箱完成收集。
全文摘要
本发明公开了一种扩繁豌豆潜蝇姬小蜂的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤1)将带有豌豆潜蝇姬小蜂寄主幼虫的植物幼苗放入养虫容器中，接入待产卵的豌豆潜蝇姬小蜂雌蜂，在所述寄主幼虫体内产卵后培养至所述寄主幼虫发育为蛹状，得到带有蛹的植物A；2)取出所述带有蛹的植物A进行出蜂培养，收集豌豆潜蝇姬小蜂，实现扩繁。本发明的实验证明，本发明围绕繁蜂寄主筛选、最佳接蜂比例、接蜂关键时机、成蜂收集贮存等技术环节，经过反复探索与改进，形成了高效、经济、简便的寄生蜂扩繁技术，可快速大量扩繁豌豆潜蝇姬小蜂，达到对害虫生物防止的目的。
文档编号A01K67/033GK102630647SQ20121013559
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月3日 优先权日2012年5月3日
发明者张礼生, 王孟卿, 王树英, 陈红印, 陈长风, 顾新丽 申请人:中国农业科学院植物保护研究所