专利名称：一种长爪沙鼠生物净化的方法
技术领域：
本发明涉及实验动物的生物净化领域，具体涉及一种长爪沙鼠生物净化的方法。
背景技术：
实验动物的生物净化是指在保留该实验动物遗传性状的前提下，提高该品种品系的微生物和寄生虫质量等级。按微生物学质量控制的程度或根据微生物净化程度分类，可分为五类(I)普通动物(conventional animals):亦称一级动物,在微生物学控制上要求最低的动物，它要求不携带人畜共患病和动物烈性传染病的病原。因价格低，故教学实验中常用之。(2)清洁动物(clean animals):亦称二级动物，除普通动物应排除的病原外，不 携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。(3)无特殊病原体动物(specific-pathogen free animals):亦称三级动物，是指动物体内无特定的微生物和寄生虫存在，但带有非特定的微生物和寄生虫的动物。此类动物应排除一、二级动物所排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科研实验干扰大的病原。(4)无菌动物(germ-free animals):是指在动物体内外的任何部位都检不出一切生命体的动物。这类动物系在无菌条件下剖腹产出，又饲养在无菌、恒温、恒湿的条件下，食品饮料等全部无菌。(5)悉生动物(gnotobiotes animals):是指机体内带着已知微生物的动物。此种动物原是无菌动物，系人为将指定微生物丛投给其体内，例如使大肠杆菌定居在无菌小鼠体内，在进行微生物检查时仅能检出大肠杆菌。依据GB14922-2001《实验动物微生物学等级及监测》划分的实验动物等级，并与寄生虫学等级对应，将实验小鼠和大鼠的微生物等级分为清洁级、无特定病原体级(SPF)和无菌级三个级别，普通级的实验小鼠和大鼠原则上不再使用；豚鼠、地鼠和兔分为普通级、清洁级、SPF级和无菌级四个级别。犬和猴分为普通级和SPF级二个级别。长爪沙鼠(Mongoliangerbil,Meriones unguiculatus)亦称长爪沙土鼠，蒙古沙鼠或黑爪蒙古沙土鼠(内蒙一带)，黄耗子(河北坝上地区)，砂耗子等。在动物分类学上属于哺乳纲，啮齿目，仓鼠科，沙鼠亚科，沙鼠属。分布在内蒙古自治区及其毗邻的省区，包括河北省北部、山西、陕西、甘当、宁夏、青海等地的草原地带。蒙古人民共和国和苏联布里亚特地区也有分布。长爪沙鼠是一个正在被国内外开发、有着广阔应用前景的实验动物品种，野生状态的长爪沙鼠世代生活在高海拔的干旱、半干旱的草原地带，其生存环境的典型特点表现为食物贫乏、病原微生物较内陆地区稀少等，由于特殊环境对该种群的长期选择，长爪沙鼠在脂质代谢、肾功能、免疫学等诸多方面的遗传特性上与其他人工驯化的啮齿类实验动物存在较大区别。因其具有独特的生物学特征，长爪沙鼠已被广泛用于脑神经、寄生虫病、微生物、生殖、内分泌、营养、代谢及药理、肿瘤等诸多领域研究，被称为“多功能”实验动物。我国现有的长爪沙鼠为普通级种群，随着生命科学的发展和社会公共安全意识的提高，科研试验对实验动物遗传质量、微生物等级的要求也随之升高，客观上要求提供清洁级以上等级的长爪沙鼠用于科学研究。现阶段，国内尚无长爪沙鼠生物净化的研究报道，也无该实验动物相关孕鼠选择和临产期判断、无菌剖腹产、长爪沙鼠仔鼠的代乳、IVC饲养管理和微生物检测技术等诸方面的操作技术的文字记载。
发明内容
本发明提供了一种长爪沙鼠生物净化 的方法，该方法可以将长爪沙鼠的微生物和寄生虫等级由普通级净化为清洁级。一种长爪沙鼠生物净化的方法，包括步骤(I)选取在无菌条件下剖腹产出的长爪沙鼠仔鼠，以ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠提供母乳或者人工授乳，在长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时开始增加含兔乳的小鼠饲料粉末，每IOOg小鼠饲料粉末中含兔乳60ml-70ml，直至长爪沙鼠仔鼠在25-30日龄体重达16g后安全离乳，得到离乳后的长爪沙鼠仔鼠；(2)对步骤(I)中生产长爪沙鼠仔鼠的长爪沙鼠母鼠进行支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物检测；若长爪沙鼠母鼠泰泽病原体抗体呈阳性，则检测离乳后的长爪沙鼠仔鼠泰泽病原体抗体，离乳后的长爪沙鼠仔鼠抗体呈阳性者弃去，呈阴性者留用；若长爪沙鼠母鼠支原体呈阳性，则弃去其生产的所有长爪沙鼠仔鼠；微生物检测的主要原则为①长爪沙鼠母鼠检测结果呈阳性，则其生产的长爪沙鼠仔鼠全部检测，呈阳性者弃去，呈阴性者留用长爪沙鼠母鼠检测结果可疑，则其生产的长爪沙鼠仔鼠抽样检测，抽样比例为其生产的长爪沙鼠仔鼠总数的40%以上，呈阳性者弃去，呈阴性者留用长爪沙鼠母鼠检测结果呈阴性，则其生产的长爪沙鼠仔鼠不检测，直接留用；(3)将步骤(2)中支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物检测合格(呈阴性)的离乳后的长爪沙鼠仔鼠放入屏障系统单独饲养，并跟踪检测2代支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物，合格者(呈阴性)作为清洁级长爪沙鼠。为了达到更好的发明效果，优选所述的含兔乳的小鼠饲料粉末的添加次数为每天2-5次。每次以长爪沙鼠仔鼠吃饱为宜。在长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时开始增加含兔乳的小鼠饲料粉末，有助于剖腹产出的长爪沙鼠仔鼠实现正常离乳，并于正常离乳前达到优于自然分娩ICR小鼠代乳的体重水平。进一步优选，每IOOg小鼠饲料粉末中含兔乳67ml。所述的含兔乳的小鼠饲料粉末的制备方法，包括将小鼠饲料制成小鼠饲料粉末，添加灭菌后的兔乳，混合均匀，制得含兔乳的小鼠饲料粉末。所述的小鼠饲料具体可参照《实验动物配合饲料卫生标准》(GB14924. 2-2001)和《实验动物配合饲料营养成分》(GB14924. 3-2010)标准执行，可采用市售产品(如浙江省实验动物饲料生产基地生产的大、小鼠辐照繁殖料，质量规格0 12mm颗粒)。所述的长爪沙鼠母鼠在剖腹产前12-24小时肌肉注射2_4mg/次 只的剂量的黄体酮，每只总剂量不超过6mg，以延长孕鼠分娩时间，方便综合运用观察法、触诊法、黄体酮法等判定孕鼠分娩时间点，把握最佳剖腹产时机。在无菌条件下剖腹的条件包括应用质量百分浓度为2%的过氧乙酸水溶液作为消毒液，质量百分浓度为5%的NaOH水溶液中和消毒液，以及纱布端断脐和止血，环境温度为30°C _33°C，提高无菌剖腹产手术成功率。所述的人工授乳，每日授乳量Y与大鼠体重X的关系为Y = 0. 361x-0. 167，Y的单位为mg，x的单位为g。授乳方法一般是每隔4h—次，每日6次，每次以喂饱为宜。人工授乳的乳液可采用母鼠乳液或者市售的与母鼠乳液营养成分相近的人工乳。所述的ICR泌乳小鼠为产乳周期为20天以上且性情温顺的ICR泌乳小鼠。以ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠提供母乳时，在ICR泌乳小鼠和长爪沙鼠仔鼠初次接触时预留ICR泌乳小鼠亲仔1-2只，同时将长爪沙鼠仔鼠放置在ICR泌乳小鼠笼内，轻柔地将长爪沙鼠仔鼠与笼内垫料充分混翻，确保长爪沙鼠染味，混养数小时 后，若发现长爪沙鼠仔鼠的腹部有乳白色乳液，表明授乳成功，此时将ICR泌乳小鼠亲仔取出。选取产乳周期相对较长，性情温顺的ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠代乳鼠，在代乳鼠和仔鼠初次接触时采用合理的染味、观察等方法提高代乳成功率。优选，于长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时按5g/天/只的量添加兔乳，直至安全离乳。可进一步助于剖腹产出的长爪沙鼠仔鼠实现正常离乳，并于正常离乳前达到优于自然分娩ICR小鼠代乳的体重水平。所述的兔乳为泌乳母兔分泌的新鲜乳汁，即兔乳原液；可人工采集泌乳母兔新鲜乳汁，于_20°C保存待用。临用前，取出乳汁后，经高压蒸汽(115°C，15min)灭菌备用。所述的其他垂直感染微生物包括弓形虫、小鼠肝炎病毒、流行性出血热病毒等，主要包括弓形虫、小鼠肝炎病毒和流行性出血热病毒。因长爪沙鼠好动，为保持内环境清洁，安全离乳前(即整个代乳或授乳过程)最好每3天更换一次垫料。长爪沙鼠生性好动，垫料消耗大，且容易变脏。在高压灭菌草纸、木屑等材料中选择合适的垫料及更换周期，理想的温湿度控制等，是长爪沙鼠IVC饲养管理的重要工作。由于待净化的孕鼠自然分娩存在病原微生物对仔鼠的污染，因此，为实现实验动物的生物净化目标，需采用无菌剖腹产的仔鼠，并需建立代乳技术和微生物监测。现有长爪沙鼠为普通级种群，不适合作为无菌剖腹产的仔鼠的代乳鼠。本发明选择合适的其他品种品系实验动物=ICR泌乳小鼠作为代乳鼠，确保仔鼠乳量充足、贯穿整个哺乳期直到离乳，是本发明的关键技术。微生物检测结果是长爪沙鼠生物净化成功与否的衡量标准，因此，本发明在实施生物净化前对普通级和生物净化的长爪沙鼠种群进行全面的微生物普查，并在生物净化过程中不断对亲代长爪沙鼠和生物净化后长爪沙鼠进行微生物监测。普查主要针对存在垂直传播风险的泰泽病原体和支原体，选择合适的监测方案直接关系生物净化的成败。
图I为分别以长爪沙鼠、ICR小鼠和SD大鼠代乳的自然分娩仔代长爪沙鼠(仔长爪沙鼠)每窝存活率趋势图；图2为分别以长爪沙鼠、ICR小鼠和SD大鼠代乳的自然分娩仔代长爪沙鼠(仔长爪沙鼠)生长曲线比较；图3为本发明生物净化代乳仔代长爪沙鼠与自然分娩母乳喂养长爪沙鼠的生长曲线比较；图4为剖腹产长爪沙鼠仔鼠由ICR泌乳小鼠代乳并配合辅料饲养与剖腹产长爪沙鼠仔鼠由ICR小鼠代乳至断奶、自然分娩长爪沙鼠仔鼠由ICR小鼠代乳和由亲母鼠代乳的生长曲线比较。
具体实施例方式实施例I长爪沙鼠孕鼠选择和临产期判断、无菌剖腹产、长爪沙鼠仔鼠的代乳、IVC饲养管理和微生物检测技术等诸方面的关键技术。
I.孕鼠选择和临产期判断长爪沙鼠与大鼠、小鼠不同，长爪沙鼠是“一夫一妻”长期同居的繁殖方式，因此选择普通级3月龄的长爪沙鼠雌雄比I : I进行同居交配。小鼠的妊娠期为19-21天，长爪沙鼠妊娠期24-26天，因此代乳ICR小鼠的交配一般较剖腹产母鼠交配时间迟3-4天，即ICR代乳母鼠在剖腹产手术前12-36小时内分娩。长爪沙鼠交配后不容易见到明显的阴道栓，很难通过查找阴道栓的方法推算长爪沙鼠的预产期。此外，啮齿类实验动物在接近出生前的24h内生长发育最旺盛，仔鼠初生时20%体重都是在最后24h内生长的，提早几个小时或者十几小时进行剖腹产都会对胎儿的成熟造成很大影响，因此通过计算长爪沙鼠雌雄同居时间，综合运用观察法、触诊法、黄体酮法等多种方法来判断确定孕长爪沙鼠分娩时间点，把握最佳剖腹产时机。通过①观察法观察分娩前孕鼠躁动不安、清理产床，孕长爪沙鼠下腹部膨大、外阴湿润鲜红且阴道口扩大，待孕鼠俯卧巢内并见流血和羊水后即表明将分娩。②触诊法安静自然保定分娩期(妊娠后期)孕长爪沙鼠，通过触摸其腹部，对比感觉腹肌松弛度，胎仔头硬度，胎仔头和躯干大小，当胎仔头和躯干大小一致(宽度达到约0.8-1. 2cm)，腹肌松弛，胎仔头硬度较大时，则可判断为孕长爪沙鼠分娩时机成熟。③黄体酮法长爪沙鼠分娩通常发生在夜间，为适当顺延分娩时间，提高剖腹产手术的成功率，需预先给孕长爪沙鼠肌肉注射黄体酮。一般对预计2小时内或夜间产仔的孕长爪沙鼠肌肉注射2-4mg/(次 只)剂量的黄体酮，动物可于注射后12-24小时内施行剖腹产手术。须注意给药总剂量不宜过多(总剂量不超过6mg，次数不超过3次)，否则易导致剖腹产胎仔鼠发黑、过于成熟，甚至出现死胎现象。2.剖腹产手术整个手术过程应无菌操作。用约35°C的蒸馏水配制质量百分浓度为2%过氧乙酸消毒液。采用颈椎脱白法处死孕鼠后，迅速将其浸入消毒液5s，置于手术台，固定四肢。消毒大鼠腹部，用灭菌剪、镊开腹腔，暴露子宫。用止血钳夹住两侧输卵管前侧和子宫远端，从远端切断子宫，此过程操作应迅速，约需45-60S。切取子宫后，将其连同止血钳迅速放入35°C灭菌消毒液中浸泡约10s。立即以质量百分浓度5% NaOH碱液(溶剂为水)中和消毒液，并用灭菌蒸馏水冲洗，以纱布吸附剩余液体。灭菌镊子迅速撕开子宫，破羊膜取出胎仔，用纱布或棉签去除羊水，擦净胎盘和胎仔，特别是胎仔的口鼻处。以湿棉签轻轻按摩胎仔胸部，刺激其获得自主呼吸，全过程需密切注意保温。至胎仔全身呈鲜红色，扭曲脐带，并用无菌纱布扯断脐带并压迫止血。自主呼吸的仔鼠体色由紫红色逐渐转成鲜红色，约半小时后可开始授乳或接受代乳。留取部分胎盘和子宫放入试管，取出隔离器后进行微生物检测。新生幼仔的剖腹取胎时手术台环境温度一般控制在30_33°C，与代乳鼠合拢后降至 20-26 °C，湿度 40-70%。3.雌鼠代乳技术选取经产、母性较好的ICR雌鼠为剖腹产长爪沙鼠的代乳母鼠。在已确定乳母鼠怀孕的情况下，应将雄鼠移出，以免生产后又怀孕，影响带乳。将生产前2-3天的ICR小鼠转移到净化室，以适应环境。ICR小鼠在生产前三天停止更换垫料。选取产乳周期为20天以上且性情温顺的ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠，在完成剖腹产术后，ICR泌乳小鼠的亲仔留下1-2只，同时将刚剖腹产出来的长爪沙鼠仔鼠(仔长爪沙鼠)放置在乳母鼠笼内，轻柔地将其与笼内垫料充分混翻，确保长爪沙鼠染味，该程序对乳母鼠的授乳至关重要。混养数小时后，若发现长爪沙鼠仔鼠的腹部有乳白色乳液，表明授乳成功，此时应 将ICR泌乳小鼠亲仔取出。由于长爪沙鼠和ICR小鼠在离乳期上的差别，代乳长爪沙鼠仔鼠从17日龄开始体重增加会出现明显停滞，提示营养供应不足，因此在17-20日龄时开始增加软料，即含67%(v/w,ml兔乳/IOOg小鼠饲料粉末)兔乳的小鼠饲料粉末，每天至少添加两次，每次以长爪沙鼠仔鼠吃饱为宜。软料(即含兔乳的小鼠饲料粉末)的制备将小鼠饲料(浙江省实验动物饲料生产基地生产的大、小鼠辐照繁殖料，质量规格0 12mm颗粒)粉碎成粉末，置无菌瓶皿中，添加高压灭菌后的兔乳，将饲料粉末充分搅拌混匀至适当湿度即可，每次添加兔乳不可太多。同时在长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时按5g/天/只的量添加兔乳，直至安全离乳。代乳期间每3天更换一次垫料。代乳仔长爪沙鼠在25-30日龄间，体重达16g可安全离乳，得到离乳后的长爪沙鼠仔鼠。4.微生物检测本发明发现在长爪沙鼠易感病原体中存在垂直感染导致生物净化失败风险的主要为支原体和泰泽病原体。孕长爪沙鼠在实施剖腹产手术前摘眼球采血检测泰泽病原体抗体，剖腹产手术后迅速实施无菌取气管，经研磨过0. 45 y m滤膜，进行支原体培养。泰泽病原体抗体检测及支原体培养具体操作依据实验动物微生物质量控制的国家标准(实验动物泰泽病原体检测方法GB/T 14926. 10-2008,实验动物支原体检测方法GB/T14926.8-2001)。根据母鼠抗体检测与支原体培养情况分别进行处理。若母鼠泰泽病原体抗体阳性，则在仔鼠断奶后进行眼静脉窦采血，再次测抗体，抗体阳性者弃去或迅速处死，以防止接触传播病原体。若母鼠支原体阳性，则弃去整窝仔鼠。微生物检测的主要原则为①长爪沙鼠母鼠检测结果呈阳性，则其生产的长爪沙鼠仔鼠全部检测，呈阳性者弃去，呈阴性者留用长爪沙鼠母鼠检测结果可疑，则其生产的长爪沙鼠仔鼠抽样检测，抽样比例为其生产的长爪沙鼠仔鼠总数的40%以上，呈阳性者弃去，呈阴性者留用长爪沙鼠母鼠检测结果呈阴性，则其生产的长爪沙鼠仔鼠不检测，直接留用。将支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物检测合格的离乳后的长爪沙鼠仔鼠放入屏障系统单独饲养，并跟踪检测2代支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物，合格者作为清洁级长爪沙鼠。微生物跟踪检测主要针对易造成垂直感染病原体，主要包括泰泽氏病原体、支原体、弓形虫、小鼠肝炎病毒、流行性出血热病毒(检测方法分别依据实验动物弓形虫检测方法GB/T 18448. 2-2008，实验动物小鼠肝炎病毒检测方法GB/T 14926. 22-2001，实验动物汉坦病毒检测方法GB/T 14926. 19-2001)等。 长爪沙鼠、ICR小鼠和SD大鼠代乳比较仔长爪沙鼠经长爪沙鼠、ICR小鼠和SD大鼠代乳后的存活率见图I。由图可知，SD大鼠代乳的长爪沙鼠仔鼠在3日龄开始出现显著性死亡，存活率降至80%以下，到11日龄，仔鼠存活率降至47%，在17日龄更有2窝仔鼠整体淘汰；仔鼠25日龄时，存活率仅为31% ;在整个代乳期，仔鼠均存在陆续死亡现象。ICR小鼠代乳的48只仔鼠中，有46只存活，25日龄时存活率为95%。长爪沙鼠代乳的仔鼠中，仅一组动物出现3只死亡，其余45 只均存活。通过比较各组仔鼠平均体重(见图2)，发现ICR小鼠代乳的长爪沙鼠仔鼠在20日龄前平均体重均略高于长爪沙鼠代乳和SD大鼠代乳的长爪沙鼠仔鼠，个别日龄存在显著性差异，表明ICR小鼠代乳的长爪沙鼠仔鼠生长发育情况较为理想。在20日龄后，与长爪沙鼠代乳的长爪沙鼠仔鼠比较，ICR小鼠代乳长爪沙鼠仔鼠体重增重明显变缓，这可能与ICR小鼠哺乳周期有关。此外，SD大鼠代乳长爪沙鼠仔鼠的体重变化存在较为明显的组内波动。综合上述结果，选择ICR小鼠作为长爪沙鼠生物净化后的代乳鼠。 剖腹产及代乳情况采用未添加软料组的生物净化方法，共实施长爪沙鼠生物净化临产期判断150多胎次，无菌剖腹产达85胎次，通过ICR代乳鼠代乳并成功断乳167只，平均胎仔出生体重
2.9g/只，窝平均胎子数8. 4只/窝，共完成20只生物净化代乳长爪沙鼠和正常长爪沙鼠生长曲线比较(图3)。与母乳喂养的普通级长爪沙鼠相比，未添加软料组的生物净化后的代乳长爪沙鼠体重普遍较低，从I日龄到25日龄均有统计学差异。由图4可知，与自然分娩仔鼠的ICR小鼠代乳组相比，剖腹产仔长爪沙鼠的生长曲线普遍较低，提示剖腹产手术对仔长爪沙鼠的生长发育带来较大影响，本发明添加软料组可显著提高17日龄后剖腹产仔长爪沙鼠的体重增长速度，并于断奶前达到优于自然分娩ICR小鼠代乳组的体重水平，表明所添软料有助于剖腹产手术中的仔长爪沙鼠实现正常离乳。此外，人工授乳方式可替代以ICR泌乳小鼠为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠来实现生物净化后仔鼠的代乳，该技术的操作方法为(以大鼠人工授乳为例说明)新生动物(长爪沙鼠仔鼠)经人工授乳需要非常熟练的实验技术，包括强饲、吸吮二种人工授乳方法。强饲法可保证每次灌喂人工乳的量，而吸吮法模拟自然吸吮的方式，但控制不了每次的哺乳量。授乳方法是每隔4h—次，每日6次。每日授乳量Y(mg)与大鼠体重x(g)的关系参照一次方程Y = 0. 361x-0. 167。对于授乳时下腹部胀满的动物，要用脱脂棉压迫刺激其下腹部，促其排尿；还要用浸水后拧干的脱脂棉刺激肛门，使其排粪。最为理想的人工乳是采集哺乳期8 21天的母鼠乳，或处死哺乳期幼鼠，从胃中取乳，但由于采集困难，很少采用。目前，国内外主要采用配制与母鼠乳营养成分相近的人工乳，人工乳可采用市售无菌大鼠王氏(1991年)人工乳的配方(见表I)。乳鼠随着其自身的生长发育，对营养的需求也在不断变化，因而，随着乳鼠的生长有针对性地设计不同配方的人工乳，有利于不同日龄动物获得生长所需营养。
权利要求
1.一种长爪沙鼠生物净化的方法，包括步骤 (1)选取在无菌条件下剖腹产出的长爪沙鼠仔鼠，以ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠提供母乳或者人工授乳，在长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时开始增加含兔乳的小鼠饲料粉末，每IOOg小鼠饲料粉末中含兔乳60ml-70ml，直至长爪沙鼠仔鼠在25-30日龄体重达16g后安全离乳，得到离乳后的长爪沙鼠仔鼠； (2)对步骤(I)中生产长爪沙鼠仔鼠的长爪沙鼠母鼠进行支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物检测；若长爪沙鼠母鼠泰泽病原体抗体呈阳性，则检测离乳后的长爪沙鼠仔鼠泰泽病原体抗体，离乳后的长爪沙鼠仔鼠抗体呈阳性者弃去，呈阴性者留用；若长爪沙鼠母鼠支原体呈阳性，则弃去其生产的所有长爪沙鼠仔鼠；微生物检测的主要原则为①长爪沙鼠母鼠检测结果呈阳性，则其生产的长爪沙鼠仔鼠全部检测，呈阳性者弃去，呈阴性者留用长爪沙鼠母鼠检测结果可疑，则其生产的长爪沙鼠仔鼠抽样检测，抽样比例为其生产的长爪沙鼠仔鼠总数的40%以上，呈阳性者弃去，呈阴性者留用；③长爪沙鼠母鼠检测结果呈阴性，则其生产的长爪沙鼠仔鼠不检测，直接留用； (3)将步骤(2)中支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物检测合格的离乳后的长爪沙鼠仔鼠放入屏障系统单独饲养，并跟踪检测2代支原体、泰泽病原体和其他垂直感染微生物，合格者作为清洁级长爪沙鼠。
2.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，所述的含兔乳的小鼠饲料粉末的添加次数为每天2-5次。
3.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，每IOOg小鼠饲料粉末中含兔乳67ml。
4.根据权利要求I或3所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，所述的含兔乳的小鼠饲料粉末的制备方法，包括将小鼠饲料粉碎成小鼠饲料粉末，添加灭菌后的兔乳，混合均匀，制得含兔乳的小鼠饲料粉末。
5.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，长爪沙鼠母鼠在剖腹产前12-24小时肌肉注射2-4mg/次·只的剂量的黄体酮，每只总剂量不超过6mg。
6.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，所述的人工授乳，每日授乳量Y与大鼠体重X的关系为Y = O. 361χ-0. 167，Y的单位为mg，x的单位为g。
7.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，所述的ICR泌乳小鼠为产乳周期为20天以上且性情温顺的ICR泌乳小鼠。
8.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，以ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠提供母乳时，在ICR泌乳小鼠和长爪沙鼠仔鼠初次接触时预留ICR泌乳小鼠亲仔1-2只，同时将长爪沙鼠仔鼠放置在ICR泌乳小鼠笼内，轻柔地将长爪沙鼠仔鼠与笼内垫料充分混翻，确保长爪沙鼠染味，混养数小时后，若发现长爪沙鼠仔鼠的腹部有乳白色乳液，表明授乳成功，此时将ICR泌乳小鼠亲仔取出。
9.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，步骤(I)中，安全离乳前每3天更换一次垫料。
10.根据权利要求I所述的长爪沙鼠生物净化的方法，其特征在于，于长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时按5g/天/只的量添加兔乳，直至安全离乳。
全文摘要
本发明公开了一种长爪沙鼠生物净化的方法，包括选取在无菌条件下剖腹产出的长爪沙鼠仔鼠，以ICR泌乳小鼠作为长爪沙鼠仔鼠的代乳母鼠给长爪沙鼠仔鼠提供母乳或者人工授乳，在长爪沙鼠仔鼠17-20日龄时开始增加含兔乳的小鼠饲料粉末，每100g小鼠饲料粉末中含兔乳60ml-70ml，直至长爪沙鼠仔鼠在25-30日龄体重达16g后安全离乳，得到离乳后的长爪沙鼠仔鼠；对长爪沙鼠母鼠和仔鼠进行支原体和泰泽病原体等微生物检测，合格的离乳后的仔鼠放入屏障系统单独饲养，并跟踪检测2代支原体和泰泽病原体等微生物，合格者作为清洁级长爪沙鼠。该方法实现了将长爪沙鼠的微生物等级由普通级净化为清洁级。
文档编号A01K67/02GK102812920SQ201210288188
公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月14日 优先权日2012年8月14日
发明者戴方伟, 卢领群, 宋晓明, 周莎桑, 萨晓婴, 李长龙, 马伟锋, 柯贤福, 楼琦 申请人:浙江省医学科学院