专利名称：一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的固体培养基，属于农业生物技术领域。
背景技术：
马铃薯普通栽培种为同源四倍体，其单倍体也称为双单倍体。四倍体马铃薯产生双单倍体主要有两种途径一是利用花药培养人工诱导单雄生殖，二是通过二倍体授粉者诱导孤雌生殖。马铃薯的普通栽培种属于四倍体，遗传背景异常复杂，而马铃薯双单倍体，基因高度纯和，并且位点间的互作减少，简化了遗传比例，便于我们研究基因序列的功能与分布。尤其是近年来随着马铃薯全基因组测序的完成，我们可以利用双单倍体进行更广泛的遗传研究。纯合双单倍体基因型也是鉴定基因功能的优良载体，理论上，外源基因导入后不会受·到等位基因的干扰，呈显性遗传。而基因的转化和功能验证均离不开植株再生，高效的离体再生技术成为影响研究进展的重要环节。但是马铃薯双单倍体的生产力、生活力等非加性作用性状比四倍体弱，所以马铃薯双单倍体的离体再生具有一定的难度。因此，本文研究了双单倍体茎段离体诱导再生植株。CN201110233008. 9公开了一种用于马铃薯茎尖无愈伤成苗的固体培养基，包括硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、碘化钾、硼酸、硫酸锰、硫酸锌、钥酸钠、硫酸铜、氯化钴、硫酸铁、乙二胺四乙酸二纳、烟酸、盐酸吡哆醇、甘氨酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、酵母提取物、蔗糖、6-苄氨基腺嘌呤、玉米素、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素、倍力凝。该培养基用于马铃薯栽培种茎尖的培养，试验效果好，基本无愈伤组织产生，成苗率高。但是，由于马铃薯双单倍体不同于普通栽培种，其生产力、生活力比较弱；另外为了后续基因转化和功能的验证，本实验选用茎段作为外植体，所以该培养基不适用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株。
发明内容
为了构建马铃薯双单倍体的遗传转化体系，深入研究马铃薯全基因组序列中某些基因的功能，本发明对马铃薯双单倍体的茎段再生体系优化系统进行了研究。本发明技术方案如下—种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖和倍力凝；其特征是，无机物包括浓度范围在165 2108mg/L的大量元素氮、磷、钾、硫、钙、镁，浓度范围在O. 025^38mg/L的微量元素；有机物包括谷氨酰胺、水解酪蛋白、酵母提取物、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸中的一种或其组合；植物激素包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、激动素、玉米素、吲哚乙酸中的一种或其组合。所述的大量元素氮、磷、钾、硫、镁、钙，优选的为氮、磷、钾、硫、镁、钙的硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、氯化物。所述的微量元素为碘、硼、锰、锌、钠、铜、铁、钥、钴。
一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖和倍力凝；其特征是，包括以下组分(I)无机物大量元素
硝酸 if W00-21_mg/L 硝酸铵 1600-1700 mg/L _酸二氣鉀 165-175 mg/L 硫酸镁 360^380 mg/L 氯化锊 430-450 mg/L；微量元素
·
義化卿 0.8 0.9 mg/L ■酸5.5-6.5 Iii^L
硫酸猛 16 17.5mg/L硫酸锌 9 10 m^L
Il 酸钠 0.2-0.3 m^L 硫酸铜 0.02403 mg/L
氯化钴 0.02-^0.03 mg/L 硫酸 IE 铁 27~28 mg/L 乙二胺四乙酸二钠 37 38 mg/L；(2)有机物水解酪蛋白0-300 mg/L
酵母提取物0 5_mg/L
水解乳蛋&0~500mg/L
肌醉80-120 mg/L
鑛酸0.4~0.6 mg/L
ft酸_嗔醇O.私復6 mg/L
盐.酸硫胺素0.05-0.15 mg/L
廿it酸I 2 mg/L；(3)植物激素
6-苄氨基腺嘌時I 4 mg/L 萘乙 SI0.01 0.50 mg/L
激动素0-2.0 mg/L
玉米素l~4mg/L
吲哚乙隱O 2 mg/L(4)蔗糖 25 35g/L;(5)倍力凝 3. 5 4. 5g/L。优选的，该种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖、倍力凝；其特征是，包括以下组分(I)无机物大量元素硝酸钾1900-2108 mg/L
硝酸铵1650 mg/L
磷酸二氫钾 170 mg/L
硫酸镁370 mg/L
ft 化 f!440 mg/L；微量元素
确化钾0.83 mg/L
硼酸6.0 mg/L
硫酸蜢16.9 mg/L
硫酸锌9.6 mg/L
钼酸钠0.25 mg/L
硫酸頓0.025mg/L
氯化锆0.025mg/L
硫酸Il铁观mg/L 乙二胺_乙酸二钠 37.3 mg/L ；(2)有机物
7jC 解酪蛋白 0-300 mg/L，
奮爾WMfM 0~500 m^L 水解乳蛋Θ0~500mg/L
肌醇50 100 mg/L
烟酸0.25 D.5 mg/L
盐酸吡哆？f 0.25 0.5 mg/L 0.()5 -(). I mg/L.
货氣酸I 2 ra^L；(3)植物激素
·
6-苄氨基腺嘌呤 I 2mg/L
萘乙酸0.01-0.5 mg/L
激动素CMX5 mg/L
玉米素I 2 mg/L
喷哚乙酸(M).5 mg/L(4)蔗糖 30 35g/L;(5)倍力凝 4 5g/L。本发明进一步技术方案该种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖、倍力凝；其特征是，包括以下组分( I)无机物大量元素硝酸钾 2108 mg/L
硝酸铵 1650 mg/L磷酸二氢钾170 mg/L硫酸犠 370 mg/L氯化 f! 440 mg/L；微量元素
碘化钾 0.83 mg/L硼酸 6.0 mg/L窺酸猛 16.9 mg/L硫酸铸 9.6 mg/L鑛酸钠 0.25mg/L·
硫酸頓 OmSmgL 氯化 tt 0.025mg/L 硫酸歷铁 27 J mg/L 乙二K四乙酸二钠37.3 mg/L；(2)有机物水解 蛋白100 mg/L
酵母提取物250 mg/L
水解乳蛋ΘI OOmgZL
肌醇100 mg/L
烟酸0.5 mg/L
1&酸_嚷醇0.5 mg/L
Il酸硫胺素0.1 mg/L
货氣酸2 mg/L.(3)植物激素·
6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L
萘乙酸0.5 mg/L
激动素0.5 mg/L
玉米素LOmgZL(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4g/L。配制方法按照配方准确称量各组分，所用试剂为分析纯，加去离子水充分溶解，定容，调整pH至5. 8 6. O,分装，121。。灭菌15分钟。本发明还提供所述培养基用于马铃薯双单倍体茎段离体再生植株的方法，具体操作过程如下将双单倍体组培苗切成茎段，去掉含腋芽部分，接种到该成苗培养基上，在培养温度22±2°C，光照强度7001x，光照时间8h/d，相对湿度65 75%的培养室内培养。本发明将大量元素里的铵态氮和硝态氮、钾离子的水平进行了调节，并增加了四种有机添加物，主要是调节了激素种类和水平，由于选用的培养基各种因素的综合作用，应用该培养基，茎段先脱分化成愈伤，后分化再生成苗，成苗率极高。(见表I、图I、图2)，解决了长期困扰马铃薯双单倍体茎段再生率低的关键技术难题，为马铃薯双单倍体基因转化体系的顺利进行奠定了基础。
图1CN201110233008. 9中的培养基茎段再生成苗；图2培养基改良后茎段再生成苗(实施例3)。
具体实施例方式实施例I
一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾1900mg/L,硝酸铵1650mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,硫酸镁370mg/L,氯化I丐 440mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6 . Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸卩比卩多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. Img/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. Olmg/L，激动素2mg/L，吲哚乙酸2mg/L,玉米素 4mg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4g/L。配制方法按照配方准确称量各组分，加去离子水充分溶解，定容，调整pH至5. 8^6. 0，分装，121°C灭菌15分钟。还可以先将无机物、有机物和植物激素配成母液，再按照配方准确称量其余组分，加去离子水充分溶解，定容，调整PH至5. 8飞.O,分装，灭菌。实施例2一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾1900mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾175mg/L,硫酸镁360mg/L,氯化I丐 430mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸卩比卩多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. Img/L,甘氨酸lmg/L ；(3)植物激素6-苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. 05mg/L,吲哚乙酸O. 5mg/L,玉米素 4mg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4g/L。配置方法同实施例I。实施例3—种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾1900mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾165mg/L,硫酸镁370mg/L,氯化I丐 440mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌9. 6mg/L，钥酸钠 O. 25mg/L,硫酸铜 O. 025mg/L,氯化钴 O. 025mg/L,硫酸亚铁 27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)有机物水解酪蛋白100mg/L,肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸卩比卩多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤3mg/L，激动素lmg/L，吲哚乙酸2mg/L，玉米素lmg/,萘乙酸 O. 4mg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4g/L。配置方法同实施例I。实施例4一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾1900mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾165mg/L,硫酸镁380mg/L,氯化I丐 450mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. 5mg/L,硫酸猛 16mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L,钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L,氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸·二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物水解酪蛋白200mg/L,肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸卩比卩多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. 25mg/L，激动素O. 5mg/L，玉米素2mg/L ；(4)鹿糖 35g/L ;(5)倍力凝 4g/L。配制方法同实施例I。实施例5一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾2108mg/L,硝酸铵1650mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,硫酸镁370mg/L,氯化I丐 440mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌 9. Omg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物水解酪蛋白100mg/L，酵母提取物250mg/L，水解乳蛋白200mg/L，肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸批P多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. Olmg/L，激动素2mg/L，吲哚乙酸2mg/L,玉米素 4mg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4.5g/L。配置方法同实施例I。实施例6一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾2108mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾175mg/L,硫酸镁360mg/L,氯化I丐 430mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物水解酪蛋白300mg/L，酵母提取物500mg/L，水解乳蛋白500mg/L，肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸卩比卩多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6-苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. 05mg/L,吲哚乙酸O. 5mg/L,玉米素 4mg/L ；(4)蔗糖 25g/L;(5)倍力凝 4g/L。配置方法同实施例I。实施例7一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾2108mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾165mg/L,硫酸镁370mg/L,氯化I丐 440mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；
·
(2)有机物水解酪蛋白100mg/L,酵母提取物100mg/L,水解乳蛋白100mg/L,肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸批P多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. 25mg/L，激动素O. 5mg/L，玉米素2mg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4.5g/L。配置方法同实施例I。实施例8一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾1900mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾165mg/L,硫酸镁380mg/L,氯化I丐 450mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. 5mg/L,硫酸猛 16mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L,钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L,氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物水解酪蛋白100mg/L，酵母取物250mg/L，水解乳蛋白100mg/L，肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸批P多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤3mg/L，萘乙酸O. 25mg/L，激动素O. 5mg/L，玉米素2mg/L ；(4)鹿糖 35g/L ;(5)倍力凝 4g/L。配置方法同实施例I。实施例9一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基(I)无机物硝酸钾1900mg/L,硝酸铵1600mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,硫酸镁370mg/L,氯化I丐 440mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. 5mg/L,硫酸猛 17. 5mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸亚铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ；(2)有机物水解酪蛋白200mg/L，酵母提取物100mg/L，水解乳蛋白100mg/L，肌醇100mg/L,烟酸O. 5mg/L,盐酸批P多醇O. 5mg/L,盐酸硫胺素O. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6_苄氨基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸O. 25mg/L,激动素O. 5mg/L,玉米素 2mg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4g/L。对比例采用CN201110233008. 9公布的配方进行茎段离体再生植株培养基配方(I)无机物硝酸钾2108mg/L,硝酸铵1650mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,硫酸镁370mg/L,氯化I丐 440mg/L,碘化钾 O. 83mg/L,硼酸 6. Omg/L,硫酸猛 16. 9mg/L,硫酸锌 9. 6mg/L，钥酸钠O. 25mg/L，硫酸铜O. 025mg/L，氯化钴O. 025mg/L，硫酸铁27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二纳 37. 3mg/L ；(2)有机物谷氨酰胺250mg/L，水解酪蛋白100mg/L，酵母提取物250mg/L，肌醇·100mg/L,烟酸0. 5mg/L,盐酸批P多醇0. 5mg/L,盐酸硫胺素0. lmg/L,甘氨酸2mg/L ；(3)植物激素6-节氨基腺嘌呤0. 2mg/L,卩引哚丁酸0. 05mg/L,赤霉素0. lmg/L ；(4)蔗糖 30g/L;(5)倍力凝 4g/L。实施例和对比例的试验结果见表I.表I马铃薯双单倍体茎段离体再生植株培养基改良前后成苗率情况比较
坊:+岸J1I类11接种雀段数(t)成+ffi书(%)
对比_丨(>0O
实淹例〗I觸丨fi.+7
实施例HHIO〗:!·:《
实施例丨100 Cl, 4
I:施 W 4IUO 5. O
劣施例Γι100 7,7
丈施例6I(M)24. I
实施 W 7100*18. 1
实施例《](ΜΙ72.:!
实施例9HM)m. I注成苗率为成苗的株数占总接种茎尖数的百分比。由图I可以看出，本发明的培养基配方对于马铃薯双单倍体茎段离体再生植株具有良好的作用。从表I可以看出，，所有实施例的效果都优于对比例，本发明的优选范围(实施例3、实施例8)更具有突出的效果，成苗率在70%以上。·
权利要求
1.一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖和倍力凝；其特征是，无机物包括浓度范围在165 2108mg/L的大量元素氮、磷、钾、硫、钙、镁，浓度范围在O. 025^38mg/L的微量元素；有机物包括谷氨酰胺、水解酪蛋白、酵母提取物、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸中的一种或其组合；植物激素包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、激动素、玉米素、吲哚乙酸中的一种或其组合。
所述的大量元素氮、磷、钾、硫、镁、钙，优选的为氮、磷、钾、硫、镁、钙的硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、氯化物。所述的微量元素为碘、硼、锰、锌、钠、铜、铁、钥、钴。
2.一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖和倍力凝；其特征是，包括以下组分 (1)无机物 大量元素 硝酸卿 !900-210gmg/L 硝酸铵 160(M700mg/L 磷酸二氢钾165-175 mg/L 硫酸镁 360-380 mg/L 氣化钙 430 450 mg/L； 微量元素碘化钾 0.8 0.9 mg/L 翻酸5.5~6.5mg/L硫酸锰16~17.5mg/L硫酸锌9-10 mg/L 钼酸铺0.2 0.3 mg/L硫酸铜0.02403 mg/L 氯化钴0.02-0.03 mg/L硫酸亚铁27~28 mg/L乙二胺四乙酸二钠 37 38 mg/L； (2)有机物水解酪蛋白O 300 mg/L _母提取物O 500 mg/L水解乳蛋白0~500mg/L 肌醇80 120 mg/L烟酸0.4 0.6 mg/L■* st m —..^r 、盐酸吡哆醇0.4 0.6 mg/L 盐酸硫臟素0.05 0.15 mg/L 货氨酸I 2 mg/L; (3)植物激素 6-苄氨基腺嘌呤 ！ 4 mg/L 萘乙酸0.0K0.50 mg/L 激动素0~2.0 mg/L 玉米素I 4mg/L 賴嗓乙酸CK2mg/L (4)蔗糖25 35g/L; (5)倍力凝3.5 4.5g/L。
3.如权利要求I或2所述的用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖、倍力凝；其特征是，包括以下组分 (I)无机物 大量元素 硝酸钾1900~2108mg/L硝酸铵〗650 mg/L 磷酸..—钾170 mg/L 硫酸镁370 mg/L :氣化钙440 mg/L； 微量元素碘化钾0.83 mg/L 翻酸6.0 nig/L 硫酸蜢16.9 mg/L 鱗酸锋9.6 mg/L 麵酸 _0.25mg/L 硫酸铜0,025mg/L 氯化钴 0.025mg/L 硫酸亚铁27.8 mg/L 乙二胺四乙酸二Ι 37.3 mg/L；(2)有机物 水解酪蛋白0-300 mg/L酵母提取物O 500 mg/L 水解乳蛋白(K500mg/L 肌醇50-100 mg/L 烟酸0.25-0.5 mg/L Ife 酸 _ 哆醇0.25~0.5mg/L 盐酸硫胺桌0.05 OJ mg/L 甘氨酸I'-2 mg/L；(3)植物激素 6-炎氨基腺囉呤l~2mg/L 萘乙酸0.0K.5 mg/L Λ动素0-0.5 mg/L 米素I 2 mg/L 丨I引哚乙酸(M).5 mg/L(4)蔗糖3(T35g/L; (5)倍力凝4 5g/L。
4.如权利要求I 3任一项所述的用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，包括无机物、有机物、植物激素、蔗糖、倍力凝；其特征是,包括以下组分 (1)无机物 大量元素硝酸钾 2108 mg/L硝酸铵 1650 mg/L磷酸:.....:氢钾 170 mg/L硫酸镁 370 mg/L氣化钟 440 mg/L I 微量元素 碘化钾 0.83 mg/L 硼酸 6.0 mg/L 硫酸猛 16.9 mg L 硫酸锌 9.6 mg/L 钼酸钠 025 mg/L 硫酸铜 0.025mg/L 氣化钴 0.025mg/L 硫酸亚铁 27.8 mg/L 乙二胺四乙酸二钠37.3 mg/L； (2)有机物 水解酪蛋白 100 mg/L 酵岈提取物 250 mg/L水解乳蛋白 I OOmg/L 肌醇100 mg/L 烟酸0.5 mg/L 盘酸眵醇 0.5 mg/L Il酸硫膽素 0.1 mg/L 甘氨酸2 mg/1.； (3)植物激素 6-1 基腺嗓呤 2.0mg/L 萘乙酸0.5 mg/L激动素0.5 mg/L玉米素I.OmgZL (4)蔗糖30g/L; (5)倍力凝4g/L。
5.如权利要求I 4任一项所述的用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基制备方法，包括下列步骤按照配方准确称量各组分，所用试剂为分析纯，加去离子水充分溶解，定容，调整PH至5. 8飞.O，分装，121°C灭菌15分钟。
6.如权利要求I 4任一项所述的用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基用于马铃薯双单倍体茎段离体再生植株的方法，操作过程如下 1)将双单倍体组培苗切成茎段，去掉含腋芽部分，接种到该成苗培养基上， 2)在培养温度20 24°C，光照强度7001x，光照时间8h/d，相对湿度65 75%的培养室内培养。
全文摘要
本发明公开了一种用于马铃薯双单倍体茎段离体诱导再生植株的培养基，属于农业生物技术领域。它包括以下组分硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、碘化钾、硼酸、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、烟酸、盐酸吡哆醇、甘氨酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、酵母提取物、蔗糖、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、激动素、玉米素、吲哚乙酸倍力凝。该培养基用于马铃薯双单倍体茎段再生成苗的诱导和培养，试验效果好，出愈率提高了76%，成苗率高达80.5%。大大增加了马铃薯双单倍体茎段的再生率，为其遗传转化体系的建立奠定了基础；并且这种培养方式采用一步成苗法，降低了污染几率。
文档编号A01H4/00GK102870682SQ201210417700
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月26日 优先权日2012年10月26日
发明者刘芳, 杨元军, 王培伦, 马伟清, 董道峰, 陈广侠, 马蕾 申请人:山东省农业科学院蔬菜研究所