专利名称：用于防治松材线虫病的菌株Smal-007及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细菌菌株，具体涉及一种防治松材线虫病的菌株。
背景技术：
松材线虫病是世界上最严重的林木病害。该病在日本、韩国、美国、加拿大、墨西哥等国都有发生，日本是松材线虫病危害最严重的国家，几乎造成了赤松林和黑松林的覆没。我国自1982年在江苏省首次发现松材线虫病以来，疫区已扩大至14个省、(自治区、直辖市)192个县级行政区，累计致死松树5亿多株，毁灭松林500多万亩，造成经济损失数千亿元。我国对于松材线虫病的研究尽管已经持续了几十年，但到目前为止仍然没有找到能应用与生产，切实有效控制病害发展的防治方法。目前世界上对 松材线虫病的防治还没有有效的方法。目前使用的防治方法主要有①冬季砍除病死株，以减少初侵染来源。该方法缺点是砍伐不彻底，年年砍年年有发生，②树干注射杀线虫剂，以保护珍贵松树。该方法的缺点是使用繁琐，对树木伤害较大。③用寄生昆虫寄生传媒昆虫天牛，该方法的缺点是寄生昆虫的饲养繁琐，效果也一般。④利用天牛引诱剂引诱天牛，该方法效果一般。总的来说，这些方法虽然有一定效果，但都不能彻底解决松材线虫病问题。
发明内容
本发明的目的在于解决上述现有技术的不足，提供一种用于防治松材线虫病的菌株，只要把菌株Smal-007喷洒到松林内，所述菌株就可快速替代我国松林内松材线虫体表的强致病细菌，使松材线虫失去致病能力，从而达到控制松材线虫病流行的目的，本发明方法简单易行，效果稳定。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案:—种用于防治松材线虫病的菌株Smal-007,所述菌株的分类命名为:嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),保藏编号为CGMCC N0.6990,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址为:北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所，保藏日期为2012年12月13日。所述菌株为革兰氏染色阴性细菌，经16rDNA序列测定，菌株Smal-007为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),菌株的 16s rDNA喊基序列如 SEQ ID No:l 所示所述菌株能附着在松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)体表,能替代松材线虫体表的其他强致病细菌。所述菌株产生的毒素对马尾松，黑松，湿地松等毒性较小，不能导致大多数松树死亡；对紫外线有一定的抵抗能力，可在松林内长期生存。经安全性测定，所述菌株对环境和其他生物没有任何影响。菌株可用液体深层发酵培养，发酵通气量15L/m,搅拌转速200r/min，发酵温度为30°C，发酵时间36h，初始pH值7.0。最适的发酵培养基配方(g/ml)葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨酵母膏复合物3%。发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体剂型。本发明的优点是:菌株Smal-007是用于防治松材线虫病(Pine wild disease)的生防细菌。松材线虫病是世界林木头号病害，可引起松林成片枯萎死亡，但目前还没有很好的防治方法。如果把菌株Smal-007喷洒到松林内，就可在松林内长期生存，并逐渐替代松材线虫体表致病细菌,使松材线虫失去致病性,从而能以微生物之间的“竞争”达到彻底防治松材线虫病的目的菌株Smal-007 的 16s rDNA 序列如 SEQ ID No:1 所示。
具体实施方式
:实施例1:1.配制培养基:葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨酵母膏复合物3% (g/ml)。2.发酵培养:将菌株Smal-007加入培养基中，液体深层发酵培养，发酵通气量15L/m,搅拌转速200r/min，初始pH值7.0，发酵温度为30°C，发酵时间36h，菌液OD值14。3.菌剂分装运输:菌剂用塑料包装桶或包装瓶分装，运输中菌剂温度不应超过35。。。4.菌剂林间喷洒:(1)飞机喷洒:原菌液喷雾，每亩喷雾400克。每架次载药量200千克，喷洒500亩。(2)机动喷雾器喷雾:原菌液喷雾，每亩喷雾500-1000克。重点喷洒枯死木松树树干及枯死木附近松树树干及梢头。
权利要求
1.一种用于防治松材线虫病的细菌菌株，其特征在于，所述菌株的保藏编号为CGMCCN0.6990。
2.如权利要求1所述的菌株在防治松材线虫病中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，包括以下具体步骤:(1)配制培养基:葡萄糖2%(g/ml)，蔗糖2% (g/ml)，蛋白胨酵母膏复合物3% (g/ml), (2)液体深层发酵培养:将所述菌株加入所述培养基中，发酵通气量15L/m，搅拌转速200r/min,初始pH值7.0，发酵温度为30°C，发酵时间36h，测得菌液OD值为14， (3)将发酵后的菌液喷洒于林间。
4.如权利要求3所述的应用，其中，所述喷洒方法为:飞机喷洒和机动喷雾器喷雾。
5.如权利要求4所述的应用，其中喷洒的地方为:枯死木松树树干、枯死木附近松树树干和梢头。
6.如权利要求4所述的应用，其中所述飞机喷洒的方法具体为:采用菌液喷雾，每亩喷 雾400克。
7.如权利要求4所述的应用，其中所述机动喷雾器喷雾的方法具体为:采用菌液喷雾，每亩喷雾500-1000克。
全文摘要
本发明涉及一种用于防治松材线虫病的细菌菌株Smal-007及其应用，所述菌株为嗜麦芽寡养单胞菌，保藏编号为CGMCC No.6990。菌株的16s rDNA碱基序列如SEQ ID No1所示。本发明还涉及该菌株的发酵培养和林间应用，具体步骤包括(1)发酵培养基配方；(2)发酵方法(包括发酵参数和技术)；(3)菌剂分装和运输技术；(4)菌剂林间喷洒技术(林间防治技术)。
文档编号A01N63/02GK103205385SQ20131013904
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月22日 优先权日2013年4月22日
发明者韩正敏, 曾腓力, 贲爱玲, 刘侃诚, 孙京天, 糜文琪 申请人:南京林业大学