一种玉米转基因组培苗的移栽方法
【专利摘要】本发明公开了一种玉米转基因组培苗的移栽方法。该方法是：（1）将组培苗加无菌水于培养室中炼苗1-2天；（2）取出洗净后，将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入含有甲基硫菌灵和硫酸铜钙的溶液中浸1分钟；（3）将组培苗种植于营养土中，营养土的组分为腐殖质土、草木灰和蛭石，添加甲基硫菌灵和硫酸铜钙；再加入生物有机肥，覆盖薄膜静置2-3天；（4）移栽后的第5-7天和第10-12天，各喷雾1次喹啉铜溶液。利用本发明提供的玉米组培苗的移栽方法，玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生产旺盛，能够正常的开花结实，平均每株结实25-40粒；改进了营养土的配置和灭菌方法，节省经济及人工成本。
【专利说明】一种玉米转基因组培苗的移栽方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种玉米转基因组培苗的移栽方法，属于玉米转基因组织培养【技术领域】。
【背景技术】
[0002]玉米是我国重要的粮食作物和经济作物，2012年我国玉米种植面积在5.24亿亩，平均亩产1400斤左右，2012年总产在4000亿斤左右。我国玉米在育种、栽培、植保、加工等领域的研究均处于国际领先水平。现代转基因技术的发展对提高玉米抗性、改良玉米品质等发挥重要的作用，玉米的转基因育种也逐渐在育种领域占有一席之地。由于玉米转基因育种所选择的自交系为易受侵染的自交系，抗逆性差，易感多种病虫害，且在恒温组培室里的遗传转化前期周期较长，导致玉米转基因组培苗适应性差，移栽成活率较低。通过转基因技术得到的具有优良性状的玉米再生苗，不能保证以高成活率移栽，限制了玉米组织培养和转基因技术的发展。因此，提高阳性苗的成活率至关重要。
[0003]现有玉米转基因组培苗的移栽方法包括炼苗、灭菌水洗净培养基、移栽至经过高压蒸汽灭菌的成品营养土中等步骤，此移栽方法有两个弊端:1、除短时间炼苗外没有提高组培苗抗逆性和适应性的措施，转基因玉米苗移栽成活率稍低，成活率约为60%-80%，平均每株结实20-30粒；2、对营养土的处理为高压蒸汽灭菌，不仅需要购买灭菌仪器，还需人工对营养土进行分装、灭菌、晾晒，增加经济和人工成本。
【发明内容】
[0004]本发明克服了上述现有技术的不足，提供了一种玉米转基因组培苗的移栽方法。采用该方法，玉 米组培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生产旺盛，能够正常的开花结实。
[0005]本发明的技术方案是:一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，依次包括以下步骤:
[0006](I)将生长在1/2MS生根培养基中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口，在培养基上加2-3mm高度的无菌水，每天更换一次无菌水，培养室中炼苗1_2天；
[0007](2)用镊子将组培苗从培养瓶中取出，灭菌水洗净培养基；然后将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒,吸水纸上晾干；所述浸根液具体为:每Ikg水加入4.5-5.5g甲基硫菌灵(有效成分含量为70%)和4.5-5.5g硫酸铜钙(有效成分含量为 77%)；
[0008](3)将组培苗种植于营养土中(营养土需覆盖过根茎连接处Icm);培养室内的湿度为65-75%，光照强度为4500-5500LX，温度为27_29°C ；
[0009]所述的营养土为:将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀，按照每20升营养土 (非压缩体积)添加甲基硫菌灵(有效成分含量为70%)和硫酸铜钙(有效成分含量为77%)各I克的比例添加并混合均匀，加水至手捏成团、松手即散，室温覆盖塑料薄膜静置，第2天加入20g生物有机肥(加水溶解)，混合均匀，室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cmX 15cm-20cmX20cm带吸水孔的塑料营养钵中；所述生物有机肥的Ν+Ρ205+Κ20≥5%，有机质≥ 45%，有益微生物≥ 10亿/克；
[0010](4)移栽后的第5-7天和第10-12天，各喷雾I次0.03%的喹啉铜溶液，每次用量为100棵苗用8-12ml0.03%的喹啉酮溶液；
[0011](5)移栽7天之内不浇水，防止污染及烂根，之后一周浇水一次；
[0012](6)移栽三周之后，待转基因玉米苗芯叶长出、长势良好，即可移至大田或植物生长室，此后同普通玉米管理方法一致。
[0013]与现有技术相比，本发明具有如下优点和显著的进步:
[0014]1、利用本发明提供的玉米组培苗的移栽方法，玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生产旺盛，能够正常的开花结实，平均每株结实25-40粒。
[0015]2.改进了营养土的配置和灭菌方法，节省经济及人工成本。
【具体实施方式】
[0016]实施例1玉米组培苗的移栽
[0017](1)配制营养土
[0018]在玉米组培苗移栽前，将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀，按照每20升土 (非压缩体积)添加70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和77%硫酸铜钙可湿性粉剂各I克的比例添加并混合均匀，加水至手捏成团、松手即散，室温覆盖塑料薄膜静置，第2天加入IOg生物有机肥(Ν+Ρ205+Κ20≥5%，有机质≥45%，有益微生物≥10亿/克，使用时加水溶解)，混合均匀，室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cmX 15cm的带吸水孔的塑料营养钵中。
[0019](2)炼苗
[0020]将生长在1/2MS生根培养基培养瓶中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口，在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,炼苗2天；
[0021](3)取出组织苗
[0022]移栽时首先将组培苗从培养瓶中取出，取时要用镊子小心地操作，切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂用无菌水全部漂洗掉，在浸根液中浸根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位I分钟，吸水纸上晾干；所述浸根液具体为:每Ikg水加入5g70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和和5g77%硫酸铜钙可湿性粉剂；
[0023](4)移栽
[0024]移栽时将营养土挖一个深10cm，宽IOcm的小孔，然后再将植株种植下去，让根舒展开，并防止弄伤幼苗。轻轻覆盖营养土，以覆盖过根茎连接处Icm为宜，以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。共移栽35株综31玉米转基因组培苗。在移栽苗周围打圈轻浇少量水，保证室内空前湿度保持在70%，培养室内光照强度为5000Lx，温度为28°C。
[0025](5)移栽后的第5天和第11天，喷雾I次0.03%的喹啉酮溶液，每次用量为每100棵苗IOml0.03%的喹啉酮溶液。移栽后一周内不浇水，一周后每周浇一次水，水量以24小时内底盘的水可被吸收为宜。移栽18天后移栽至日光大棚培养，34株转基因苗在日光大棚生长正常，移栽成活率为97.1%。收获后，平均每株结实25-30粒。[0026]实施例2玉米组培苗的移栽
[0027](I)配制营养土
[0028]在玉米组培苗移栽前，将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀，按照每20升土 (非压缩体积)添加70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和77%硫酸铜钙可湿性粉剂各I克的比例添加并混合均匀，加水至手捏成团、松手即散，室温覆盖塑料薄膜静置，第2天加入IOg生物有机肥(Ν+Ρ205+Κ20≥5%，有机质≥45%，有益微生物≥10亿/克，使用时加水溶解)，混合均匀，室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cmX 20cm的带吸水孔的塑料营养钵中。[0029](2)炼苗
[0030]将生长在1/2MS生根培养基培养瓶中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口，在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,炼苗2天；
[0031](3)取出组织苗
[0032]移栽时首先将组培苗从培养瓶中取出，取时要用镊子小心地操作，切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂用无菌水全部漂洗掉，在浸根液中浸根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位I分钟，吸水纸上晾干。所述浸根液具体为:每Ikg水加入5g70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和5g77%硫酸铜钙可湿性粉剂；
[0033](4)移栽
[0034]移栽时将营养土挖一个深12cm，宽IOcm的小孔，然后再将植株种植下去，让根舒展开，并防止弄伤幼苗。轻轻覆盖营养土，以覆盖过根茎连接处Icm为宜，以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。共移栽41株综31转基因玉米组培苗。在移栽苗周围打圈轻浇少量水，保证室内空间湿度保持在70%。光照强度为5000Lx，温度为28°C。
[0035](5)移栽后的第5天和第10天，喷雾I次0.03%的喹啉酮溶液，每次用量为100棵苗IOml0.03%的喹啉酮溶液。移栽后一周内不浇水，一周后每周浇一次水，水量以24小时内底盘的水可被吸收为宜。移栽24天后移栽至大田培养，40株转基因苗在大田生长正常，移栽成活率达到97.5%。秋天收获后，平均每株结果30-40粒。
[0036]对比例:玉米组培苗的移栽(常规方法)
[0037](I)配制营养土
[0038]在玉米组培苗移栽前，将市售营养土、珍珠岩按2:1的质量比混合均匀，高压蒸汽灭菌，加水至手捏成团、松手即散，装入15cmX15cm的带吸水孔的塑料营养钵中。
[0039](2)炼苗
[0040]将生长在1/2MS生根培养基培养瓶中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口，在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,炼苗2天；
[0041](3)取出组织苗
[0042]移栽时首先将组培苗从培养瓶中取出，取时要用镊子小心地操作，切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂用无菌水全部漂洗掉；
[0043](4)移栽
[0044]移栽时将营养土挖一个深12cm，宽IOcm的小孔，然后再将植株种植下去，让根舒展开，并防止弄伤幼苗。轻轻覆盖营养土，以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。共移栽30株综31转基因玉米组培苗。轻浇透水，保证室内空间湿度保持在70%。光照强度为5000Lx，温度为28 °C。
[0045](5)移栽后一周内不烧水,一周后每周烧一次水，水量以24小时内底盘的水可被吸收为宜。移栽23天后 移栽至大田培养，22株转基因苗在大田生长正常，移栽成活率达到73.3%。秋天收获后，平均每株结果20粒左右。
【权利要求】
1.一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，依次包括以下步骤: (1)将生长在1/2MS生根培养基中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口，在培养基上加2-3mm高度的无菌水，每天更换一次无菌水，培养室中炼苗1_2天； (2)用镊子将玉米转基因组培苗从培养瓶中取出，灭菌水洗净培养基；然后将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒，吸水纸上晾干；所述浸根液具体为:每Ikg水加入4.5-5.5g有效成分含量为70%的甲基硫菌灵和4.5-5.5g有效成分含量为77%的硫酸铜钙； (3)将组培苗种植于营养土中；所述的营养土为:将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀，按照每20升营养土添加有效成分含量为70%的甲基硫菌灵和有效成分含量为77%的硫酸铜钙各I克的比例添加并混合均匀，加水至手捏成团、松手即散，室温覆盖塑料薄膜静置；第2天按照每20升营养土加入20g加水溶解的生物有机肥的比例添加生物有机肥，混合均匀，室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入带吸水孔的塑料营养钵中； (4)移栽后的第5-7天和第10-12天，各喷雾I次0.03%的喹啉铜溶液，每次用量为每100棵苗使用8-12ml ； (5)移栽7天之内不烧水,之后一周烧水一次； (6)移栽三周之后，待转基因玉米苗芯叶长出、长势良好，移至大田或植物生长室。
2.如权利要求1所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，所述步骤(3)营养土覆盖过根茎连接处1cm。
3.如权利要求1所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，所述步骤(3)培养室内的湿度为65-75%，光照强度为4500-5500LX，温度为27_29°C。
4.如权利要求1所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，所述步骤(3)的生物有机肥的Ν+Ρ205+Κ20≤5%，有机质≤45%，有益微生物≤10亿/克。
5.如权利要求1-4中任意一项所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，所述步骤(3)塑料营养钵的规格为15cmX15cm-20cmX20cm。
【文档编号】A01H4/00GK103858771SQ201410131337
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年4月2日 优先权日:2014年4月2日
【发明者】宣宁, 姚方印, 毕玉平, 彭振英, 柳絮, 刘国霞, 边斐, 陈高 申请人:山东省农业科学院生物技术研究中心