一种卵形鲳鲹早期性别判定的方法
【专利摘要】本发明公开了一种卵形鲳鲹早期性别判定的方法，取幼龄卵形鲳鲹，剪去左侧体壁，找出性腺，原位观察性腺特征，取出并解剖性腺，观察性腺解剖面特征，通过分析性腺特征判定卵形鲳鲹性别。该方法器械简单，操作快速，结果准确，不使用有毒化学试剂，是一种方便高效的卵形鲳鲹早期性别判定方法，可为进一步寻找卵形鲳鲹性别特异的分子标记研究提供可靠的材料。
【专利说明】一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产生物【技术领域】中的鱼类性别鉴定技术，更具体地说，本发明涉及一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法。
【背景技术】
[0002]卵形鲳鰺(TracAiz7Ote1S orates)，俗称金鲳，黄腊鲳，属鲈形目，鰺科。卵形鲳鰺鱼肉细嫩，味道鲜美，营养价值高，是名贵的食用鱼类，深受市场欢迎。同时卵形鲳鰺生长速率快、抗病力强、产量高、效益好，是养殖户非常喜爱的养殖品种。但卵形鲳鰺性成熟时间长，一般需4至5年，且卵形鲳鰺其整个生命过程中，雌雄鱼均不具备性别特异的外形特征。因此，养殖者在进行亲鱼培育和催产的时候不易区分雌雄，增加了亲鱼培育和催产的生产成本。而且，随着卵形鲳鰺产业化发展，品种选育和规模化苗种繁育，均需要大量性别明确的亲本进行人工繁殖和家系建立。寻找性别特异的分子标记，建立基于PCR的分子生物学性别判定方法是进行卵形鲳鰺早期性别鉴定的有效手段，而进行性别特异分子标记的筛选，需要性别确定的个体作为筛选材料。
[0003]在缺乏卵形鲳鰺分子生物学性别判定方法条件下，通过鉴定其性腺特征可以判定卵形鲳鰺性别。目前研究幼鱼性腺特征来判定性别的方法主要有超声波法和制片法，根据观察到的性腺形态和构造，可以判定性腺为精巢或卵巢，进而判定幼鱼性别。如中国专利200810208110.1 (申请号)公开了一种鲟鱼超声波性别鉴定方法，该方法采用超声波检测仪鉴定发育至II期的鲟鱼性腺来鉴定性别，超声波检查前，鲟鱼经过2个月的低温养殖时期，鲟鱼检查前停止投喂两周，超声波检查时，保存观察到较清晰和典型的性腺超声波检查图像，与不同发育时期精巢 和卵巢的超声波图像特征进行比对来鉴别鲟鱼的性别。中国专利201310466149.4 (申请号)公开了一种鉴别杂交黄颡鱼幼鱼性别的方法，该方法运用活体性腺压片一醋酸洋红染色一乙醇结晶紫染色的方法，鉴定个体体长规格为3厘米以上杂交黄颡鱼性别。超声波法研究幼鱼性腺，幼鱼需要经过特殊的处理，并且超声检测仪价格昂贵，检测人员技术要求高，不适合广大养殖户的需求。制片法研究幼鱼性腺，需要配置多种较为复杂的化学试剂，操作步骤多，技术要求较严格，且需要配备生物显微镜，不适宜大量样品的鉴定。
[0004]目前还没有关于卵形鲳鰺性别鉴定方法的文献报道和发明专利，给卵形鲳鰺苗种繁育中的催产和选育家系的建立工作造成了很大的困难，不利于卵形鲳鰺养殖产业的发展。因此，发展一种简单、快速、准确的卵形鲳鰺性别鉴定方法，可为寻找卵形鲳鰺性别特异的分子标记研究提供可靠的材料，对建立卵形鲳鰺分子生物学性别鉴定方法尤为重要，更是产业发展的迫切需求。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术不足，提供一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，取幼龄卵形鲳鰺，从内脏组织中取出完整的单侧性腺，通过比较性腺特征判定卵形鲳鰺性别。
[0006]本发明是这样实现的:
一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，包括以下步骤:
(I)取幼龄卵形鲳鰺，剪去体壁，暴露内脏。
[0007](2)自泄殖孔往腹腔方向找到左右性腺，原位观察性腺位置、形状、颜色及大小特征。
[0008](3)剥除性腺周围组织，取出完整单侧性腺，解刨性腺，观察性腺解剖面结构特征。
[0009](4)根据步骤(2)和(3)观察到的性腺特征对卵形鲳鰺性别进行判定:性腺位于鳔的背部两侧，形状为细长线状、乳白色，体积较小，解剖面呈实心结构的为精巢，判定卵形鲳鰺为雄性，或性腺位于鳔的背部两侧，紧贴体壁和肾脏，形状为中间粗两端细、淡黄色、体积较大，解剖面呈空心结构的为卵巢，判定卵形鲳鰺为雌性。
[0010]作为本发明的进一步限定，在步骤(1)中，所述幼龄卵形鲳鰺为一龄卵形鲳鰺。
[0011]作为本发明的进一步限定，在步骤(1)中，所述体壁为左侧体壁。 [0012]作为本发明的进一步限定，在步骤(2)中，所述观察为肉眼观察。
[0013]作为本发明的进一步限定，在步骤(3)中，所述解剖性腺为将性腺从中部横向切断。
[0014]作为本发明的进一步限定，在步骤(3)中，所述观察为肉眼观察和解剖镜观察。
[0015]与现有技术相比，本发明具有如下优点:
(I)一龄卵形鲳鰺即可判定性别，判定时期早，可为下一步建立卵形鲳鰺早期性别分子生物学鉴定方法提供研究材料，尽早为亲鱼培育提供技术支持。性成熟个体解剖后可通过性腺形态直接判定性别，但成本昂贵。
[0016](2)性腺分离过程简单、快速，剪刀或者手术刀即可完成，适合广大养殖户操作。
[0017](3)性腺特征观察方法技术要求低，肉眼或解剖镜都可以进行，提高了观察效率。
[0018](4)不同性别的性腺特征差异明显，判定方法容易、结果准确。
[0019](5)该方法不需要任何化学试剂、不需要昂贵的器械，成本极低，适合大规模样品的快速判定需求，而传统的通过石蜡切片观察细胞形态判定性别，需要繁琐的实验步骤，并需用到多聚甲醛、二甲苯等有毒试剂。
【专利附图】
【附图说明】
[0020]图1为本发明一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法工艺流程图。
【具体实施方式】
[0021]下面结合具体实施例对本发明进一步详细说明。
[0022]实施例1
1、取一龄卵形鲳鰺，剪去左侧体壁，暴露内脏组织。
[0023]2、自泄殖孔往腹腔方向找到肠道和左右性腺，原位观察性腺位于鳔的背部两侧，性腺呈细长线状，乳白色，体积较小。
[0024]3、小心剥去除性腺外的其它内脏组织，取出完整的单侧性腺，自中部横向切断，肉眼观察和解剖镜下观察，均为实心结构。[0025]4、判定性腺为精巢，卵形鲳鰺为雄性。
[0026]为了验证此方法的准确性，进行了以下切片实验:
取出另一侧性腺于4% PFA溶液中固定24h，经70%~100%梯度的乙醇脱水后，进行常规石蜡切片和HE染色。在光学显微镜下观察性腺细胞形态，为精巢组织，有典型的精小囊结构、精原细胞和各期精母细胞。
[0027]本实施例共验证30条鱼，平均体重0.62±0.057kg，平均体长24.56± 1.143cm，其中利用本发明方法验证有18条鱼为雄性(性腺呈细长线状，乳白色，体积较小，剖面为实心结构)，再经切片验证，雄性鱼为18条，形态判定准确率100%。
[0028]实施例2
1、取一龄卵形鲳鰺，剪去左侧体壁，暴露内脏组织。
[0029]2、自泄殖孔往腹腔方向找到肠道和左右性腺，原位观察性腺位于鳔的背部两侧，紧贴体壁和肾脏，性腺形 状呈中间粗两端细，淡黄色，体积较大。
[0030]3、小心剥去除性腺外的其它内脏组织，取出完整的单侧性腺，自中部横向切断，肉眼观察和解剖镜下观察，均为空心结构，显微镜下可见卵腔内壁着生的颗粒状卵母细胞。
[0031]4、判定性腺为卵巢，卵形鲳鰺为雌性。
[0032]为了验证此方法的准确性，进行了以下切片实验:
取出另一侧性腺于4% PFA溶液中固定24h，经70%~100%梯度的乙醇脱水后，进行常规石蜡切片和HE染色。在光学显微镜下观察性腺横切面细胞形态，为卵巢组织，卵巢中间为卵巢腔，卵巢小叶紧密着生于卵巢腔壁。卵巢小叶中大量分布一期卵母细胞。
[0033]本实施例共验证30条鱼，平均体重0.66±0.059kg，平均体长24.66±1.027cm，其中利用本发明方法验证有15条鱼为雌性(性腺形状呈中间粗两端细，淡黄色，体积较大，剖面为空心结构)，再经切片验证，雌性鱼为15条，形态判定准确率100%。
【权利要求】
1.一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取幼龄卵形鲳鰺，剪去体壁，暴露内脏； (2)自泄殖孔往腹腔方向找到左右性腺，原位观察性腺位置、形状、颜色及大小特征； (3)剥除性腺周围组织，取出完整单侧性腺，解剖性腺，观察性腺解剖面结构特征； (4)根据步骤(2)和(3)观察到的性腺特征对卵形鲳鰺性别进行判定:性腺位于鳔的背部两侧，形状为细长线状、白色，解剖面呈实心结构的为精巢，判定卵形鲳鰺为雄性；或性腺位于鳔的背部两侧，紧贴体壁和肾脏，形状为中间粗两端细、黄色，解剖面呈空心结构的为卵巢，判定卵形鲳鰺为雌性。
2.根据权利要求1所述的一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，其特征在于:在步骤(1)中，所述幼龄卵形鲳鰺为一龄卵形鲳鰺。
3.根据权利要求1所述的一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，其特征在于:在步骤(1)中，所述体壁为左侧体壁。
4.根据权利要求1所述的一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，其特征在于:在步骤(2)中，所述观察为肉眼观察。
5.根据权利要求1所述的一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，其特征在于:在步骤(3)中，所述解剖为将性腺从中部横向切断。
6.根据权利要求1所述的一种卵形鲳鰺早期性别判定的方法，其特征在于:在步骤(3)中，所述观察为肉眼观察及解剖镜观察。
【文档编号】A01K61/00GK103975886SQ201410241717
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年6月3日 优先权日:2014年6月3日
【发明者】彭金霞, 李咏梅, 陈晓汉, 彭敏, 蒋小珍, 韦嫔媛, 蒋伟明, 黎铭 申请人:广西壮族自治区水产科学研究院